4-(三氟甲基)煙酰胺的高效液相色譜分析

張凱，郭勇飛，潘理想，李樂樂，張小軍

(中農立華生物科技股份有限公司，北京 100052)

氟啶蟲酰胺(flonicamid)化學名稱為N-(氰甲基)-4-(三氟甲基)煙酰胺，是由日本石原產業(yè)株式會社發(fā)現并開發(fā)的一種低毒、高效的新型吡啶酰胺類昆蟲生長調節(jié)劑類殺蟲劑，其通過對蚜蟲等刺吸式口器害蟲的神經毒性和快速拒食活性而表現出殺蟲活性，具有觸殺、內吸和滲透作用，且與其他類化合物無交互抗性，可用于防治蘋果黃蚜、蔬菜蚜蟲、柑橘蚜蟲和粉虱、水稻稻飛虱等害蟲[1-4]。4-(三氟甲基)煙酰胺是氟啶蟲酰胺的主要代謝物之一，具有殺蟲活性，在1 h 時的毒力甚至高于母體[5-6]。部分農藥企業(yè)已申請或取得了該化合物的殺蟲組合物等專利，防治對象包括蚊蟲、棉蚜、白粉虱、水稻褐飛虱等，農業(yè)農村部認為該化合物用于預防、控制危害農業(yè)、林業(yè)的蟲害，依據《農藥管理條例》第2 條規(guī)定，應按照農藥管理[7]。

目前，相關分析方法國外未見公開報道，國內主要為采用液相色譜-質譜聯用法對氟啶蟲酰胺及其代謝物的殘留量進行檢測[8-10]，分析方法較為復雜，儀器設備昂貴，不適于工業(yè)化生產的質量控制和定性定量判定。基于此，本文采用高效液相色譜儀開展了4-(三氟甲基)煙酰胺的定量分析方法研究，旨在為該產品生產的質量控制和標準制定提供技術支撐[11]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260 型高效液相色譜儀(二極管陣列檢測器)和色譜工作站(美國安捷倫科技有限公司)；BSA124S 型電子天平[賽多利斯科學儀器(北京)有限公司]；KQ5200DE 型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

甲醇(色譜純，賽默飛世爾科技公司)；冰乙酸(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)；超純水(實驗室自制)；4-(三氟甲基)煙酰胺標準品(質量分數99.7%，廣州佳途科技股份有限公司)；98%4-(三氟甲基)煙酰胺樣品(上海麥克林生化科技股份有限公司)。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流動相：甲醇-0.5%冰乙酸水溶液(20∶80，體積比)；流量：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：266 nm；進樣體積：5.0 μL。在上述色譜操作條件下，4-(三氟甲基)煙酰胺的保留時間約為7.3 min。標樣及樣品的高效液相色譜圖見圖1。

圖1 4-(三氟甲基)煙酰胺的高效液相色譜圖

1.3 溶液的配制

1.3.1 標樣溶液的配制

稱取0.05 g 4-(三氟甲基)煙酰胺標樣(精確至0.000 2 g)于50 mL 容量瓶中，加入適量甲醇超聲溶解，冷卻至室溫后定容至刻度，搖勻，脫氣后待用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取含4-(三氟甲基)煙酰胺0.05 g (精確至0.000 2 g)的樣品于50 mL 容量瓶中，加入適量甲醇超聲溶解，冷卻至室溫后定容至刻度，搖勻，脫氣后待用。

1.4 測定

待儀器基線穩(wěn)定后，按照以上色譜條件連續(xù)注入數針標樣溶液，直到相鄰2 針標樣響應值的相對變化小于1.5%后，方可按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的次序進行測定。

1.5 計算

試樣中4-(三氟甲基)煙酰胺的質量分數X(%)按下式計算：

式中：A1為標樣溶液中4-(三氟甲基)煙酰胺平均峰面積值；A2為試樣溶液中4-(三氟甲基)煙酰胺平均峰面積值；m1為4-(三氟甲基)煙酰胺標樣的質量(g)；m2為試樣的質量(g)；P為標樣中4-(三氟甲基)煙酰胺的質量分數(%)。

2 結果與討論

2.1 流動相的選擇

在甲醇中溶解度較好，優(yōu)先選擇甲醇為有機相。當采用甲醇-水作為流動相時，峰型對稱，且加入0.5%冰乙酸后峰型和分離度變得更好。當流動相中甲醇比例太高時，4-(三氟甲基)煙酰胺出峰時間過早，經過反復測試，在流速1.0 mL/min，甲醇-0.5%冰乙酸水溶液的體積比為20∶80 時，4-(三氟甲基)煙酰胺的出峰時間相對適中，且峰型尖銳對稱無拖尾，分離效果好。

2.2 檢測波長的選擇

采用DAD(二極管陣列檢測器)對4-(三氟甲基)煙酰胺標準品溶液在200～400 nm 波長下進行掃描，其紫外吸收光譜圖如圖2 所示。由圖2 可知：4-(三氟甲基)煙酰胺的最大吸收波長為266 nm，且能夠得到較好的峰型同時避免雜質的干擾。因此，最后選定本分析方法的檢測波長為266 nm。

圖2 4-(三氟甲基)煙酰胺的紫外吸收譜圖

圖3 4-(三氟甲基)煙酰胺質量濃度與峰面積線性關系圖

2.3 分析方法的線性相關性

分別配制5 個不同質量濃度的4-(三氟甲基)煙酰胺標準品溶液，按照1.2 節(jié)所述的液相色譜條件進行進樣測定，每個質量濃度溶液分別測定2 次，取其平均值。以4-(三氟甲基)煙酰胺的進樣質量濃度(x)為橫坐標、峰面積(y)為縱坐標繪制標準曲線(圖4)，得到線性方程為y=5 623.6x+53.957，相關系數為R2=0.999 9，說明該方法在測定質量濃度范圍內呈現良好的線性關系。

2.4 分析方法的精密度

從同一批98%4-(三氟甲基)煙酰胺樣品中準確連續(xù)稱取6 個試樣，在上述操作條件下進行分析測定，計算其含量平均值、標準偏差、變異系數，結果見表1。可見，4-(三氟甲基)煙酰胺樣品的標準偏差為0.25，變異系數為0.25%。說明該方法的重現性好、精密度高，滿足工業(yè)分析的定量要求。

表1 分析方法的精密度測定

2.5 分析方法的準確度

準確稱取5 個98%4-(三氟甲基)煙酰胺樣品，加入一定量的4-(三氟甲基)煙酰胺標準品，按上述方法進行測定，并計算回收率，結果見表2。可見，4-(三氟甲基)煙酰胺的回收率為98.77%～101.43%，平均回收率均為100.25%，符合分析標準。

表2 分析方法的準確度測定

3 結論

本文采用高效液相色譜儀建立了一種能夠定量測定4-(三氟甲基)煙酰胺的分析方法。該方法分離效果良好，方法的準確度和精密度均較高，且簡單高效易操作，可用于4-(三氟甲基)煙酰胺的質量控制和定性定量判定，具有很強的可行性和實際應用價值。