基于可培養(yǎng)技術(shù)的中國不同城市家用冰箱中真菌多樣性研究

劉學(xué)孜,張晶晶,劉沖,白飛榮,趙貞堯,袁帥,龐玲玲,張永飛,張文趙,王喆*,姚粟*

1(合肥華凌股份有限公司,安徽 合肥,230601)2(中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院有限公司,北京,100015)3(中標(biāo)能效科技(青島)有限公司,山東 青島,266200)

冰箱是現(xiàn)代家庭不可或缺的家用電器之一,其所提供的低溫環(huán)境在食品保鮮、延長食品存儲期等方面起到了重要作用[1]。冰箱低溫環(huán)境可抑制大部分微生物的活性,減緩微生物的生長速度,但一些嗜冷微生物在食品儲藏過程中仍可引起食物的腐敗變質(zhì)[2]。因此,在冰箱的使用過程中,如果未進(jìn)行定期清理,可能存在微生物交叉污染現(xiàn)象。

近年來國內(nèi)外已陸續(xù)開展家用冰箱微生物衛(wèi)生狀況調(diào)研和群落多樣性研究,如CATELLANI等[3]采集了293臺冰箱冷藏室垂直側(cè)壁、蔬菜框底部部位樣品,發(fā)現(xiàn)冷藏室平均微生物總數(shù)為(1.2±1.2) lg CFU/cm2,其中最大值為3.6 lg CFU/cm2。沈瑾等[4]在家用冰箱霉菌和酵母菌的研究中發(fā)現(xiàn),有86個標(biāo)本每平方厘米表面的霉菌總數(shù)對數(shù)值≥1,有16個標(biāo)本每平方厘米表面的酵母菌總數(shù)對數(shù)值≥2.5,微生物污染較為嚴(yán)重,存在安全隱患。YE等[5]采用擴(kuò)增子測序的方法檢測了中國國內(nèi)16臺冰箱的冷藏室空氣和擱架、底部和內(nèi)壁等接觸表面,發(fā)現(xiàn)冰箱內(nèi)環(huán)境的真菌在科水平上,酵母菌科占比在0～50.95%,是真菌中檢出頻率占比最高的菌科。羊宋貞等[6]從家庭冰箱中分離獲得微生物158株,其中真菌74株,主要包括邁耶氏酵母屬(Meyerozyma)、紅酵母屬(Rhodotorula)、枝孢菌屬(Cladosporium)、曲霉屬(Aspergillus)和青霉屬(Penicillium)等類群,其中致病真菌4株,分別為黑色毛殼菌(Chaetomiumnigricolor)、威尼克何德霉(Hortaeawerneckii)、Lacazialoboi和Pseudozymaaphidis。2010年全球衛(wèi)生理事協(xié)會公布的報告[7]顯示,44%家庭的冰箱已有霉菌繁殖擴(kuò)增的跡象。祝白春等[8]、辛克銘等[9]在研究中發(fā)現(xiàn)餐飲業(yè)冰箱中存在著嚴(yán)重的霉菌污染,但沒有進(jìn)一步對霉菌的種類做詳細(xì)的分析。目前,針對我國不同地域來源冰箱中不同位點可培養(yǎng)微生物的系統(tǒng)性研究鮮有報道。

本研究選取了中國不同地域5個代表城市的15臺冰箱作為研究對象,基于可培養(yǎng)技術(shù)系統(tǒng)研究了冰箱使用過程中冷藏和冷凍區(qū)域真菌多樣性,分析了優(yōu)勢真菌類群的分布規(guī)律,探究了冰箱中真菌的污染狀況,重點分析了關(guān)鍵特征微生物的致味、致腐和致病特性,為升級優(yōu)化冰箱保鮮技術(shù)以及相關(guān)抗菌材料的開發(fā)提供了基礎(chǔ)資源和數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 樣品信息

2021年11月至2022年5月,依據(jù)地理位置以及不同地域飲食習(xí)慣差異,選取哈爾濱、北京、青島、成都和廣東5個城市的15臺冰箱作為研究對象,詳細(xì)信息見表1。每臺冰箱設(shè)置4個采樣位點(包括果蔬籃、冷藏室門擱架、冷凍室內(nèi)壁和冷藏室空氣),共入戶采集到60個樣品。

表1 樣品信息

1.2 試劑與儀器

麥芽提取粉瓊脂(malt extract agar,MEA)培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potato dextrose agar,PDA)培養(yǎng)基、0.85%生理鹽水,北京陸橋技術(shù)股份有限公司;丙三醇,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;真菌DNA提取試劑盒,美國Omega Bio-Tek公司;PCR MasterMix、DL 2000 Marker,北京全式金生物技術(shù)有限公司;PCR引物,生工生物工程(上海)股份有限公司。

AC2-6S1 CLASS II TYPE A2生物安全柜,益世科(上海)企業(yè)發(fā)展有限公司;隔水式培養(yǎng)箱,上海一恒科學(xué)儀器有限公司;微量可調(diào)移液器,德國Eppendorf公司;冰箱,海爾智家股份有限公司;電子天平,常熟市佳衡天平儀器有限公司;高速冷凍離心機(jī),德國Eppendorf公司;生物樣品均質(zhì)器,奧然科技(北京)有限公司;PCR儀,美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司;Gel DoCqM EZ凝膠成像儀、EC250-90電泳儀,伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品(上海)有限公司;高壓滅菌鍋,日本HIRAYAMA公司;MA-100ST浮游菌采樣器,西瓦卡精密量儀(東莞)有限公司。

1.3 采樣方法

根據(jù)GB/T 18204.4—2013《公共場所衛(wèi)生檢驗方法 第4部分:公共用品用具微生物》,在冰箱內(nèi)接觸表面冷藏室門擱架、果蔬籃、冷凍室抽屜內(nèi)壁各選取5個位點,將無菌棉拭子于無菌生理鹽水中浸潤,在每個采樣點(5 cm×5 cm)均勻涂抹5次后洗入同一管5 mL無菌生理鹽水中,用滅菌剪刀剪去棉簽與手接觸部位,將剩余的棉拭子置于無菌生理鹽水,封口并置于采樣箱中,于2～8 ℃下保存并運輸,每個采樣區(qū)域收集2份樣品。

根據(jù)GB/T 18204.3—2013《公共場所衛(wèi)生檢驗方法 第3部分:空氣微生物》,對冰箱冷藏室空氣進(jìn)行采樣,將貼有玻璃紙的PDA培養(yǎng)基放入浮游菌采樣器內(nèi),置于冰箱冷藏室進(jìn)行采樣,采樣流量為100 L/min,采樣時間10 min。采樣完成后將培養(yǎng)皿用封口膜密封,于2～8 ℃下保存并運輸。

1.4 真菌的分離純化

冰箱接觸表面采集的樣品原液,以10倍梯度逐級稀釋,制得1∶10(mL∶mL)的樣品菌懸液。采集的冷藏室空氣樣品,將PDA培養(yǎng)基上的玻璃紙置于無菌培養(yǎng)皿中,用5 mL PBS緩沖液進(jìn)行反復(fù)沖洗回收,制成樣品菌懸液。吸取樣品原液和稀釋后的菌懸液100 μL分別涂布于PDA和MEA固體培養(yǎng)基上,每組2個平行,分別放置于28 ℃和6.5 ℃條件下培養(yǎng)7～10 d,每天觀察不同條件下的菌落特征(包括大小、形狀、顏色、質(zhì)地、有無滲透液、有無可溶性色素等),選取不同形態(tài)的單菌落進(jìn)行平板劃線,純化得到的菌株保存于甘油管中。記錄不同菌株的菌落特征和數(shù)量,根據(jù)稀釋梯度計算冰箱內(nèi)接觸表面每平方厘米和冷藏室空氣每立方米的菌落數(shù)。

1.5 真菌的菌種鑒定

利用真菌DNA提取試劑盒提取實驗菌株的基因組DNA,稱取200 mg的菌絲體至1.5 mL的無菌研磨管內(nèi)(內(nèi)含0.1 mm石英砂,0.4 g 1.5 mm鋯株,0.3 g 3.0 mm鋯珠),加入200 μL的裂解液,置于生物樣品均質(zhì)器內(nèi)破碎2 min,按照試劑盒說明進(jìn)行DNA提取。參照ZHANG等[10]的方法,對實驗菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增,通過核糖體翻譯間隔序列(ITS rDNA)進(jìn)行菌種鑒定,如果鑒定不到屬水平,進(jìn)一步通過核糖體rDNA大亞基序列(26S D1/D2)[11]鑒定,引物信息見表2。PCR反應(yīng)條件:95 ℃ 5 min;95 ℃ 30 s,55 ℃ 45 s,72 ℃ 45 s,共27個循環(huán);72 ℃ 10 min。擴(kuò)增后獲得約600 bp的DNA片段,由北京諾賽基因組研究中心有限公司完成測序。將測序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLAST比對,搜索同源序列,以97%序列相似性做為判定標(biāo)準(zhǔn)完成菌種鑒定。

表2 引物信息

1.6 數(shù)據(jù)分析

使用WPS 2019進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析,RStudio繪制主成分分析圖和Venn圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 家用冰箱中真菌污染情況

15臺冰箱共60個樣品中可培養(yǎng)真菌總數(shù)的檢測結(jié)果如表3所示。結(jié)果顯示,15臺冰箱的果蔬籃中真菌平均菌落數(shù)為115 CFU/cm2,嗜冷真菌平均菌落數(shù)為46 CFU/cm2;冷藏室門擱架中真菌平均菌落數(shù)為25 CFU/cm2,嗜冷真菌平均菌落數(shù)為12 CFU/cm2;冷凍室中真菌平均菌落數(shù)為32 CFU/cm2,嗜冷真菌平均菌落數(shù)為17 CFU/cm2;冷藏室空氣真菌平均菌落數(shù)<1 CFU/m3,無嗜冷真菌檢出。5個城市中,廣東地區(qū)3臺冰箱的平均真菌總數(shù)為260 CFU/cm2;北京地區(qū)3臺冰箱的平均真菌總數(shù)為22 CFU/cm2;哈爾濱地區(qū)3臺冰箱的平均真菌菌落總數(shù)較高為377 CFU/cm2;成都地區(qū)3臺冰箱的平均真菌總數(shù)為72 CFU/cm2;青島地區(qū)3臺冰箱的平均真菌總數(shù)為125 CFU/cm2。因此,本研究在不同位點的冰箱樣品中檢測的真菌污染情況具有明顯差異,其中果蔬籃的真菌污染情況最為嚴(yán)重,G3冰箱果蔬籃的真菌菌落總數(shù)最高,為6.22×102CFU/cm2;在不同城市的不同用戶中均有不同程度的真菌污染,沒有明顯地域規(guī)律,其中廣東G3冰箱的真菌菌落總數(shù)最高為699 CFU/cm2,哈爾濱H1中真菌菌落總數(shù)為686 CFU/cm2。已有不同國家研究表明,細(xì)菌和真菌均可在冰箱內(nèi)表面大量生存,冰箱的內(nèi)表面底部污染較為嚴(yán)重[14],并且微生物污染與冰箱清潔頻率和方法之間存在相關(guān)性[15]。

表3 冰箱樣品的真菌總數(shù)及嗜冷真菌總數(shù)

2.2 家用冰箱中真菌的分離鑒定結(jié)果

2.2.1 冰箱中真菌總體分離鑒定結(jié)果

在60個冰箱來源樣品中通過可培養(yǎng)方法共分離獲得39個屬的216株真菌,分離株數(shù)>2的真菌如圖1所示。在屬水平上分離頻次較高的真菌主要為青霉屬(Penicillium),共44株,占分離總菌數(shù)的20.37%;枝孢菌屬(Cladosporium)共41株,占分離總菌數(shù)的18.98%;曲霉屬(Aspergillus)有28株,占分離總菌數(shù)的12.96%;紅酵母屬(Rhodotorula)有21株,占分離總菌數(shù)的9.72%;線黑粉酵母屬(Filobasidium)有9株,占分離總菌數(shù)的4.16%。分離到的這些微生物系空氣、土壤、植物中比較常見的微生物,如青霉屬(Penicillium)以腐生方式生活,生長在腐爛的水果、蔬菜、肉類和各種潮濕的有機(jī)物上;曲霉屬(Aspergillus)可導(dǎo)致果蔬面包類食物腐敗;輪枝菌屬(Gibellulopsis)為嗜冷微生物,常見于植物根莖的下部。

圖1 分離株數(shù)>2的真菌

在28 ℃培養(yǎng)條件下,共分離到37個屬,169株真菌,主要優(yōu)勢屬為青霉屬(Penicillium)、枝孢菌屬(Cladosporium)、曲霉屬(Aspergillus)、紅酵母屬(Rhodotorula),與總分離結(jié)果基本一致。6.5 ℃培養(yǎng)條件下,共分離獲得嗜冷真菌13個屬,47株,詳見表4,占分離總菌數(shù)的21.76%,優(yōu)勢類群主要為枝孢粉菌屬(Cystofilobasidium)、線黑粉酵母屬(Filobasidium)、維希尼克氏酵母屬(Vishniacozyma)、紅酵母屬(Rhodotorula),其中果蔬籃分離到的嗜冷真菌菌株最多(20株),冷藏室空氣分離到的嗜冷真菌菌株最少(5株)。由圖2可知,28 ℃與6.5 ℃培養(yǎng)條件下共分離獲得11個屬的共有菌屬,其中枝孢菌屬(Cladosporium)和青霉屬(Penicillium)在2種培養(yǎng)條件下的分離頻次均較高,表明這兩類菌適應(yīng)生長的溫度范圍較廣,可以在4～28 ℃的范圍下生長。28 ℃培養(yǎng)條件下共分離獲得26個屬的特有真菌,其中分離頻次較高的有亞隔孢殼屬(Didymella)、節(jié)菱孢屬(Arthrinium)與耙齒菌屬(Irpex)等。6.5 ℃培養(yǎng)條件下共分離獲得2個屬的特有真菌,為維希尼克氏酵母屬(Vishniacozyma)和假裸囊菌屬(Pseudogymnoascus)。普通冰箱冷藏室的溫度抑制絕大多數(shù)微生物的生長,但是一些嗜冷真菌能在低溫環(huán)境中仍可生長繁殖[16],在加速食物變質(zhì)的同時,還對人們的身體健康構(gòu)成安全隱患,這類微生物在后續(xù)的抗菌、除菌技術(shù)的優(yōu)化升級中需重點關(guān)注。

圖2 28 ℃及6.5 ℃培養(yǎng)條件下分離的共有真菌及特有真菌

表4 冰箱中嗜冷真菌分布情況

2.2.2 不同城市家用冰箱中真菌分布情況

為探究地域因素對冰箱使用過程中真菌多樣性的影響,對所選5個城市中冰箱分離株種類和數(shù)量在屬水平上進(jìn)行統(tǒng)計,分離頻次>2的真菌分離株與其分離頻次如圖3所示。廣東地區(qū)共分離獲得19個屬,58株真菌,分離頻次較高的真菌為枝孢菌屬(Cladosporium)、青霉屬(Penicillium)等;北京地區(qū)共分離獲得15個屬,44株真菌,分離頻次較高的真菌為枝孢菌屬(Cladosporium)、曲霉屬(Aspergillus)等;哈爾濱地區(qū)共分離獲得17個屬,53株真菌,分離頻次較高的真菌為青霉屬(Penicillium)、曲霉屬(Aspergillus)等;成都地區(qū)共分離獲得12個屬,32株真菌,分離頻次較高的真菌為紅酵母屬(Rhodotorula)、曲霉屬(Aspergillus)、枝孢菌屬(Cladosporium)、線黑粉酵母屬(Filobasidium)等;青島地區(qū)共分離獲得9個屬,29株真菌,分離頻次較高的真菌為枝孢菌屬(Cladosporium)、曲霉屬(Aspergillus)、青霉屬(Penicillium)、紅酵母屬(Rhodotorula)等。通過主成分分析,如圖4-a所示,北京、青島、成都、哈爾濱可培養(yǎng)真菌群落結(jié)構(gòu)具有較高的相似性,成都地區(qū)的群落結(jié)構(gòu)相對聚集,表明成都地區(qū)的樣品間差距較小,廣州地區(qū)微生物集群聚集相對分離,表明廣州地區(qū)受試樣本的微生物群落結(jié)構(gòu)相對獨特。

圖3 不同城市冰箱中分離頻次>2的真菌分離株與其分離頻次

a-不同采樣城市樣品可培養(yǎng)真菌的主成分分析;b-不同城市間家用冰箱樣品的共有真菌分析(屬水平)

在北京、哈爾濱、成都、廣東、青島5個城市中共分離獲得5個共有菌屬,分別為青霉屬(Penicillium)、曲霉屬(Aspergillus)、枝孢菌屬(Cladosporium)、紅酵母屬(Rhodotorula)和泡囊線黑粉菌屬(Cystofilobasidium),詳見圖4-b,其中青霉屬(Penicillium)分離頻次最高,該屬的種類很多,在蔬菜、糧食、肉類和食物上常有分布,多呈灰綠色,部分該屬菌株有致病性,引起角膜、皮膚、外耳、呼吸道、泌尿系統(tǒng)感染和心內(nèi)膜炎,可在嚴(yán)重免疫功能低下患者中引起播散性疾病,許多菌株產(chǎn)生真菌毒素。枝孢菌屬(Cladosporium)主要分離自空氣、植物、土壤和臨床人體肺部組織,屬于三類致病菌,能引起鼻竇炎和肺部感染。廣東地區(qū)分離到的特有菌屬最多,青島地區(qū)冰箱中沒有分離到特有菌屬,成都地區(qū)分離到的紅酵母屬(Rhodotorula)的菌株較多,該屬菌株以膠紅酵母(Rhodotorulamucilaginosa)為主,在28 ℃和6.5 ℃溫度下均可生長。不同城市的冰箱內(nèi),有其獨特的可培養(yǎng)真菌多樣性組成,可能與城市氣候、不同地區(qū)的使用習(xí)慣、室內(nèi)空氣環(huán)境質(zhì)量等相關(guān)。

2.2.3 不同采樣位點家用冰箱中真菌分布情況

為探究采樣位置對冰箱使用過程中真菌多樣性的影響,對所選4個位置中冰箱分離株種類和數(shù)量在屬水平上進(jìn)行統(tǒng)計,分離頻次>2的真菌分離株與其分離頻次詳見圖5。冷藏室門擱架共分離獲得17個屬,47株真菌,分離頻次較高的真菌為青霉屬(Penicillium)、枝孢菌屬(Cladosporium)、曲霉屬(Aspergillus)等;冷凍室內(nèi)壁共分離獲得18個屬,44株真菌,分離頻次較高的真菌為:枝孢菌屬(Cladosporium)、青霉屬(Penicillium)、紅酵母屬(Rhodotorula)、曲霉屬(Aspergillus)、線黑粉酵母屬(Filobasidium)等;冷藏室空氣共分離獲得13個屬,57株真菌,分離頻次較高的真菌為青霉屬(Penicillium)、枝孢菌屬(Cladosporium)、曲霉屬(Aspergillus)等;果蔬籃共分離獲得23個屬,68株真菌,分離頻次較高的真菌為枝孢菌屬(Cladosporium)、青霉屬(Penicillium)、紅酵母屬(Rhodotorula)、曲霉屬(Aspergillus)、泡囊線黑粉菌屬(Cystofilobasidium)等;通過主成分分析所示(圖6-a),冷藏室空氣、果蔬籃、冷藏室門擱架和冷凍室內(nèi)壁4個采樣位點的群落結(jié)構(gòu)都相對分散,且彼此之間沒有顯著差異。

圖5 不同采樣位置冰箱中分離頻次>2的真菌分離株與其分離頻次

a-家用冰箱不同采樣位點可培養(yǎng)真菌的主成分分析;b-家用冰箱不同采樣位點的共有真菌分析(屬水平)

在冷藏室門擱架、冷凍室內(nèi)壁、冷藏室空氣、果蔬籃4個采樣位置中,共有真菌菌屬為青霉屬(Penicillium)、紅酵母屬(Rhodotorula)、曲霉屬(Aspergillus)和枝孢菌屬(Cladosporium),如圖6-b所示。果蔬籃的特有菌株最多,冷藏室門擱架的特有菌株最少。不同采樣位置的冰箱內(nèi),有其獨特的可培養(yǎng)真菌菌屬組成,可能與不同位置用戶冰箱內(nèi)儲存食材種類、冰箱清洗習(xí)慣、室內(nèi)空氣環(huán)境質(zhì)量等相關(guān)。

3 討論與結(jié)論

冰箱作為家庭生活中必不可少的電器之一,在保鮮和預(yù)防食物變質(zhì)等方面起到了重要作用。本研究通過可培養(yǎng)法共分離獲得216株真菌,分布于39個屬,57個種,其中嗜冷菌株有47株,分布于13個屬,占分離總菌數(shù)的21.76%。青霉屬(Penicillium)、枝孢菌屬(Cladosporium)、曲霉屬(Aspergillus)、紅酵母屬(Rhodotorula)和線黑粉酵母屬(Filobasidium)為優(yōu)勢類群,枝孢菌屬(Cladosporium)、青霉屬(Penicillium)、泡囊線黑粉菌屬(Cystofilobasidium)、線黑粉酵母屬(Filobasidium)、維希尼克氏酵母屬(Vishniacozyma)、紅酵母屬(Rhodotorula)為主要的嗜冷菌真菌。本研究分離到的曲霉屬(Aspergillus)、青霉屬(Penicillium)和枝孢菌屬(Cladosporium)在文獻(xiàn)中均有報道[1,3,5],而紅酵母屬(Rhodotorula)、線黑粉酵母屬(Filobasidium)、泡囊線黑粉菌屬(Cystofilobasidium)和維希尼克氏酵母屬(Vishniacozyma)為本研究新發(fā)現(xiàn)的分離頻次較高的菌株。已有文獻(xiàn)中所報道的哈薩克斯坦酵母屬(Kazachstania)和許旺酵母屬(Schwanniomyces)并未在本研究中分離得到,可能與不同地區(qū)的使用習(xí)慣、城市氣候、存放的食材和室內(nèi)空氣環(huán)境質(zhì)量等相關(guān)。

本研究分析了冰箱使用過程中的真菌衛(wèi)生狀況,在不同城市中,廣東的冰箱分離到的真菌菌株數(shù)最多,共58株真菌(26.85%),其中廣東3臺冰箱中G3中的真菌菌落總數(shù)最高(699 CFU/cm2),以青霉屬(Penicillium)為主。哈爾濱地區(qū)分離到的真菌菌株數(shù)次之,共53株真菌(24.54%),其中哈爾濱3臺冰箱中H1冰箱中真菌菌落總數(shù)較高(686 CFU/cm2),以邁耶氏酵母屬(Meyerozyma)的菌株為主。真菌污染可能與用戶使用頻次和清潔方式有關(guān),食物殘渣未能及時清理,為微生物提供了生長環(huán)境,這可能是真菌污染的一個重要原因。不同采樣位置中,果蔬籃的真菌污染較為嚴(yán)重,該采樣位置分離到的真菌菌株數(shù)最多,共68株(31.48%),冷凍室分離到的真菌菌株數(shù)最少,共44株(20.37%),說明家用冰箱中存在豐富的微生物,長期低溫的環(huán)境雖抑制了絕大多數(shù)微生物的活性,但微生物仍能存活。因此在食用冰箱儲存的食物時應(yīng)盡量避免直接生食,冰箱的定期清潔與消毒應(yīng)引起重視。

青霉屬(Penicillium)和枝孢菌屬(Cladosporium)為本研究分離頻次較高的2個菌群。青霉屬(Penicillium)在5個城市中均有分布,且在不同采樣位置中均有分離到,根據(jù)文獻(xiàn)報道,該屬菌株具有分解纖維素、淀粉、蛋白質(zhì)的能力,使蘋果、梨等水果腐爛,能引起角膜、皮膚、呼吸道、泌尿系統(tǒng)感染[17];枝孢菌屬(Cladosporium)在冰箱接觸表面分離頻次較高,屬于暗色絲孢真菌,可導(dǎo)致皮膚和指甲感染,會引起鼻竇炎和肺部感染,孢子分布廣泛,在戶外的空氣中含量豐富,而在室內(nèi),當(dāng)濕度較大時,它們會在器具表面生長[18]。此外,在冰箱低溫環(huán)境中存在一些嗜冷酵母菌,如泡囊線黑粉菌屬(Cystofilobasidium)可在5 ℃生長[19]。維希尼克氏酵母屬(Vishniacozyma)產(chǎn)低溫酶活性高、穩(wěn)定性好,最初在加拿大冰川上分布,土壤中也有分布,0 ℃下也可以生長,部分種可造成人和其他動物的皮膚和組織感染[20]。根據(jù)我國《人間傳染的病原微生物名錄》,本研究在冰箱中具有潛在風(fēng)險的真菌有曲霉屬(Aspergillus)、青霉屬(Penicillium)、枝孢菌屬(Cladosporium)、鐮刀屬(Fusarium)、假絲酵母屬(Candida)等,青霉菌(Penicillium)、曲霉菌(Aspergillus)都能產(chǎn)生毒素致人以慢性中毒并有致癌作用;鐮刀屬(Fusarium)的有些種可產(chǎn)生毒素,污染糧食、蔬菜和飼料,人畜誤食會發(fā)生中毒。因此,冰箱中的嗜冷微生物需特別關(guān)注,加強(qiáng)冰箱抗除菌技術(shù)的提升是產(chǎn)業(yè)未來重要的發(fā)展方向。

綜上所述,本研究基于可培養(yǎng)技術(shù),初步對中國家用冰箱的真菌污染情況和菌株多樣性進(jìn)行研究,分析了不同地域、不同用戶和不同采樣位置的真菌情況。結(jié)果表明冰箱中分離到的真菌種類在不同地域、不同位點具有一定的相似性,青霉屬(Penicillium)和枝孢菌屬(Cladosporium)為主要優(yōu)勢菌群,并能在低溫下生存。本研究為定向篩選冰箱中具有低溫環(huán)境適應(yīng)性的致污微生物奠定了基礎(chǔ),為保障冰箱食品安全提供了數(shù)據(jù)參考。