Tie2表達在結直腸癌中的臨床意義及其預后價值

鄭慧芬,楊蔚清,朱益平

(皖南醫學院第一附屬醫院 弋磯山醫院 腫瘤內科,安徽 蕪湖 241001)

結直腸癌(colorectal cancer,CRC)是一種發生于結腸和直腸部位的常見的消化道惡性腫瘤,其發病率位居第三,病死率位居第二[1]。早期診斷和早期治療是改善CRC預后的關鍵,早期CRC患者經過根治性切除后5年生存率在90%以上,而晚期患者的5年生存率僅有10%[2]。

酪氨酸激酶受體(tyrosine-protein kinase receptor,Tie)屬于受體酪氨酸激酶家族,當與血管生成素(Angiogenin,Ang)結合后其激酶結構域內的5個酪氨酸殘基會自動磷酸化[3]。Tie2的激活會刺激多個信號通路,如磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B、絲裂原激活蛋白激酶/細胞外信號調節激酶、生成素等,這些通路被激活后會減少血管生長以及血管通透性,從而提高血管穩定性[4]。研究發現,Tie2的表達在許多癌癥都是上調的[5-7]。在腎癌和卵巢癌中抗Ang-Tie2治療在臨床上已經被認為是一個有效的治療靶點[8-9]。也有報道稱在使用抗血管內皮生長因子(vascular endothial growth factor,VEGF)治療期間,血漿中多個與血管生成有關的標記物發生了量的變化,其中關系最為密切的是外周血漿中Tie2濃度,基線Tie2、VEGF表達水平較低的患者預后較好[10-12]。盡管Tie2已經被研究了幾十年,但關于Tie2能否作為CRC預后的生物標志物仍然未知。本研究旨在探討Tie2作為CRC預后的生物標志物的可能性,希望發現CRC治療的新靶點。

A.CRC組織;B.癌旁組織。

1 材料和方法

1.1 材料 組織樣本:收集2017年1～12月在弋磯山醫院接受CRC根治術的91例患者(男56名、女35名,中位年齡65歲)的術后腫瘤組織蠟塊以及距癌邊緣約5 cm處的癌旁組織蠟塊。所有患者均經術后病理證實為CRC,術式均為CRC根治術。血液樣本選取2021年3月～2022年5月在我院腫瘤內科接受貝伐珠單抗一線治療的晚期CRC患者35例,采集抗血管生成治療前患者的血液樣本。該研究獲得弋磯山醫院倫理委員會批準及患者知情同意。

1.2 免疫組織化學染色 調取所收集的組織樣本蠟塊,切片、脫蠟、抗原修復,內源性過氧化物酶阻斷,一抗4℃過夜,二抗37℃ 30 min,顯色、封片,閱片。

1.3 酶聯免疫吸附試驗 使用收集的外周血血清,按照酶聯免疫吸附試劑盒中步驟進行檢測,利用酶標儀測定樣本中的Tie2濃度。

1.4 隨訪 通過隨訪獲取患者信息,隨訪結束日期為2022年11月。組織樣本的終點事件為OS和DFS;血液樣本的終點事件為PFS。采用實體瘤療效評價標準(RECIST 1.1)。生存時間按月為單位計算。

1.5 統計學方法 采用SPSS 26.0軟件進行數據分析。計數資料采用卡方檢驗或Fisher確切概率法;多因素分析采用Cox回歸分析模型,并繪制ROC曲線。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Tie2在CRC組織和癌旁組織中的表達情況 免疫組化結果顯示,在CRC組織中Tie2呈高表達,而癌旁組織中Tie2則呈低表達。見圖1。

2.2 Tie2表達與患者臨床病理特征之間的關系 依據免疫組化結果,64例(70.3%)患者的CRC組織中Tie2呈高表達,27例(29.7%)患者的CRC組織中Tie2呈低表達?；颊逤RC組織中Tie2表達與其性別、年齡、腫瘤侵犯深度、類型、位置以及淋巴結受累均無關聯性(P>0.05),而與臨床分期存在相關性(P<0.05)。見表1。

表1 Tie2與CRC患者臨床病理特征的關系

表2 CRC術后關于DFS的單因素及多因素Cox回歸分析

表3 CRC術后關于OS的單因素及多因素Cox回歸分析

2.3 Tie2與CRC患者預后的關系 相較于Tie2高表達的CRC患者,Tie2低表達的患者則具有更好的DFS(圖2A,P<0.01),與Tie2高表達的CRC患者相比,Tie2低表達的CRC患者具有更良好的OS(圖2B,P<0.01)。見圖2。

圖2 Tie2與CRC患者預后的相關性

2.4 Cox回歸分析CRC患者的獨立預后因素(DFS、OS) 單因素Cox回歸分析顯示,臨床分期Ⅲ期以及Tie2高表達均為CRC患者DFS和OS的不良預后因素(P<0.05)。根據單因素分析結果P<0.10的變量納入多因素Cox回歸分析。結果顯示,CRC組織中Tie2高表達是影響患者DFS和OS的獨立預后因素(P<0.05)。

2.5 外周血Tie2與CRC患者預后關系 根據患者的生存狀態繪制外周血Tie2濃度的ROC曲線顯示,最佳截斷值為499.153 L,其曲線下面積為0.719(95%CI:0.530～0.908),靈敏度為71.40%,特異度為78.60%(圖3A)。依據最佳截斷值將患者分為高和低濃度兩組,Kaplan-Meier生存分析結果顯示,與外周血Tie2濃度高的組相比,低Tie2濃度的患者具有更長的PFS(P<0.05)(圖3B)。

圖3 外周血Tie2與CRC患者PFS關系

3 討論

Tie2是目前已知的調節腫瘤血管生成的蛋白。有研究表明Tie2在視網膜血管疾病中可顯著增強VEGF的抑制作用從而改善患者的功能及預后[13]。當然,Tie2在癌癥中的研究最為廣泛。在宮頸癌組織中表達Tie2的單核細胞和巨噬細胞的增加與患者預后較差相關(P<0.05)[5]。在乳腺癌患者中,外周血Tie2水平與腫瘤分級呈正相關(P<0.001),血液中Tie2水平較高的患者較低水平患者生存率可能更低;此外,在體外實驗中發現,Tie2對癌細胞生長有促進作用[14]。但目前很少有研究報道Tie2在CRC組織及外周血中的表達以及與預后的關系。

本研究首先使用免疫組織化學染色方法檢測了91例病人CRC及癌旁組織中Tie2的表達情況。結果表明,Tie2在腫瘤組織中的表達高于癌旁組織,Tie2在CRC中的表達與患者的臨床分期密切相關;通過隨訪發現,腫瘤組織中Tie2表達較低的患者擁有更佳的預后,而Tie2高表達的病人則具有較高的復發風險;進一步的多因素Cox回歸分析結果表明,臨床分期在Ⅱb～Ⅲ期行CRC根治術的患者如臨床分期較晚、Tie2表達高則預后不良。這說明Tie2在CRC發生發展中發揮著重要作用。

然而,組織中Tie2水平的檢測在臨床應用中擁有很多阻礙,越來越多的研究者將目光投入到外周血的Tie2中。另外,我們考慮到抗VEGF治療目前廣泛應用于臨床,尤其是晚期CRC患者的治療中,而貝伐株單抗作為第一批抗VEGF治療的靶向療法之一,標志著一個新的抗癌系列的開始,被廣泛應用于晚期結直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌等[15]。因此,本研究收集了本院進行貝伐株單抗治療的晚期CRC患者的外周血液,通過ELISA檢測外周血中Tie2的表達水平,結果證實:外周血中Tie2濃度低的患者預后更佳,即低Tie2水平的患者使用貝伐株單抗的療效優于外周血中Tie2濃度高的患者。

綜上所述,與癌旁組織相比,Tie2在CRC組織中表達水平高,且與患者的DFS、OS相關;與此同時,Tie2也與接受貝伐株單抗治療的晚期CRC患者的預后密切相關,外周血中Tie2濃度較低的CRC患者在貝伐株單抗治療中獲益更多。Tie2或可成為預測CRC患者預后以及抗血管生成療效的生物標志物,在未來的臨床研究中應該重視Tie2在CRC發生發展中的作用。