你做的微生物檢驗就像一部驚險大片

微生物與人們的生活息息相關，微生物主要包含細菌、病毒以及真菌等在內的一系列個體微小的生物群體。微生物檢驗工作涉及多個領域，包括健康業、工農業、醫藥業等，其中醫學微生物的檢驗是臨床感染性疾病診斷治療的重要組成部分。醫學微生物檢驗工作中標本的留取、不同的培養基和培養條件等都會對檢驗結果產生直接影響。那么，在醫學微生物的檢驗中需要注意什么？最終結果又是怎樣出爐的呢？說起這個過程，每一步都嚴謹到苛刻，不能出一絲一毫的差錯，其緊張程度就像一部驚險刺激的院線大片。

一標本的留取

不同標本有不同的要求，血、腦脊液、胸腹水、痰、分泌物、尿液、糞便等根據不同的需求，需氧、厭氧、標本量、留取要求、留取時間，如血培養留取時間：發熱（≥38℃）或低溫（≤36℃）；寒戰；血小板減少；皮膚、黏膜出血；昏迷等情況下抽取血液標本送檢；血培養一般在不同部位采血，需氧和厭氧培養。清潔中段尿通常取晨起第一次尿液送檢，可提高陽性率，首先針對患者外陰部進行清潔，后應用無菌棉球進行擦干處理，患者自行排尿時醫務人員應囑咐其留取中段尿，并立即蓋好瓶蓋送檢。對于痰液標本而言，取樣時間應于患者晨起，給予患者清水漱口3次后，用力咯出氣管深處痰液，盛于清潔無菌容器內立即蓋蓋送檢，保證標本的新鮮程度，防止免細菌自溶，切勿混入唾液及鼻咽分泌物。對于糞便標本而言，醫務人員應囑咐患者于盆內進行晨便，取少許大便膿血或黏液置于無菌容器中送檢，試管中不可混入尿液等異物及其他化學藥品。其他標本盡量在抗菌藥物使用前留取。

二標本的接種

現在醫院檢驗科接種標本基本在生物安全柜中進行，不允許用明火，使用高溫滅菌器，尤其是容易產生氣溶膠的標本，接種時戴手套、口罩、帽子、隔離衣，通過標本接收窗口收取標本，人員進出須和污物分開，人流、物流分門進出。

細菌標本的接種根據標本的種類、檢驗的目的選擇合適的培養基，如血培養選擇需氧、厭氧血培養瓶，尿標本選擇血平、麥康凱平板，痰標本選擇血平板、麥康凱平板、巧克力平板等，一般選擇一個基礎培養基、一個選擇性培養基。培養條件，5%二氧化碳培養箱和37℃的普通培養箱，厭氧培養需要選擇厭氧環境如厭氧袋、厭氧罐等。

三標本的運送

標本采集完后，應及時運送，一般要求在2小時內送到實驗室，不能及時送檢的，根據不同的標本和不同的檢驗需求，在室溫或4℃冰箱保存，在一定的時間內送到。

四實驗室的消毒滅菌要求

操作房間已沒有無菌間，空氣消毒每日用紫外燈照射、每日定點通風，臺面消毒用不同濃度的含氯制劑擦拭，物體消毒包括使用過的培養基、接種標本等打包高壓滅菌后再集中處理，使用后的玻片、針頭等利器放入利器盒使用一定濃度的含氯制劑浸泡后，再集中處理。

常用的消毒滅菌方法為干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌，目前實驗室主要為濕熱滅菌。應用該方法之前，非感染物品如吸頭、配置的培養基和吸管等玻璃器皿需要選擇合適的包裝容器，包裝完整。在滅菌之前要針對滅菌器檢查門的開關進行核實，以保證其靈活程度；并對橡膠圈進行觀察，核實其有無損壞現象和是否平整；保證壓力表蒸汽排凈時停留在零位，檢查儀器中水位，要求達到儀器要求的高度，并關好門和蓋。當達到規定的滅菌時間時，醫務人員針對需干燥的物品，應立刻打開排氣閥，當蒸汽排出且壓力恢復到零時，保證其自然冷卻至60℃后，再將蓋打開并取出物品。而若是針對液體樣本，則不應該打開排氣閥，而是應該將高壓蒸汽鍋去除熱源，當其自然冷卻且壓力恢復至零后，針對其溫度進行測量，當自然冷卻至60℃后，再開蓋取物。

五有毒有菌污物的處理要求

針對微生物實驗室所涉及的物品有嚴格的管理，要求所用到的器材以及培養物，在未經過消毒處理時，保證其不可被帶出實驗室。而針對已經培養的污染材料和廢棄物（如使用過的培養基等），則應該將其放在黃色耐高溫的垃圾袋，并集中存放于指定地點，對其進行121℃，時間為30分鐘的高壓滅菌；針對污染過的吸管，則需將其放置在百萬分比濃度2000的含氯制劑浸泡24小時后，接受溫度為121℃，時間長達30分鐘的高壓滅菌；針對涂片染色沖洗片的液體，一般是采用直接將其沖入下水道的方式進行處理；針對染色的玻片，則需將其用百萬分比濃度2000的含氯制劑浸泡后，再進行煮沸并洗滌。凝集試驗所涉及的玻片以及平皿，需要接受高壓滅菌并洗滌的方式，才能夠再次使用。

六培養基的保存方法

目前所使用的培養基大多是購買商品化的培養基，例如血平板、巧克力平板、麥康凱平板、改良羅氏培養基（酸性）、羅氏斜面培養基等，那么該如何保存呢？培養基目前大多時候使用的是商品化培養基，針對商品化的培養基，需要嚴格注重相關貯存要求，根據相應的說明書進行貯存，并且于標簽之上，詳細記錄商品化培養基的批號，包含生產日期、有效期等有關特性，一般情況下商品化的培養基有效期為1～2個月，使用過程中，按照培養基標簽上的有效期使用即可，這樣可以避免自制培養基質量受到影響，培養基滅菌后儲藏在高壓菌器中的問題，自制的培養基還需要保存在2℃～8℃，與此同時，保證其避光，商品化的培養基使用更加便捷，簡化培養基的保存方法。保證商品化培養基的保藏和運送條件，確保培養基以最低極限地丟失水分；將培養基保存在原裝的密封袋中，能夠有效防止水分的丟失，且可以在一定程度上延長保存時間。特別需要注意的是，開封的培養基一般要求在兩周內運用，而針對保存于密封中的培養基，則需根據使用說明書，在有效期內使用；保證瓊脂培養基的保存溫度在2℃～8℃，若需要經過長期的保存，瓊脂平板應密閉包裝或置于密閉容器中以防止水分丟掉。

七樣品的采集及處理要求

微生物檢驗要求，所采集的檢驗樣品需要極具代表性，因此，在采樣的過程中，應該嚴格遵守無菌操作，保證容器是經過滅菌處理的，以避免周圍環境中的微生物對其造成的污染。在針對容器進行滅菌時，不可以使用新潔爾滅、酒精等消毒藥物進行滅菌，更不能應用含有此類消毒藥物或抗生素類藥物，以防止該藥物滅殺樣本中的微生物，而采樣時用到的剪刀等用具，也需要經過滅殺后才可以投入使用。

樣品采集后應立即送往檢驗室進行檢驗，送檢過程中一般不超過兩小時，如路程較遠，可保存在2℃～8℃環境中。檢驗科收到樣品后進行登記，觀察樣品的外觀，如果發現收集標本的容器破損、敞口，采集時間過長等，可拒絕檢驗，告知患者原因并要求重新留取標本。對送檢符合要求的樣品，檢驗科收到后，應立即進行接種，如進行血清學、分子生物學等檢測，標本超過規定檢測時間，放2℃～8℃冰箱保存，集中檢測。在每次應用培養基時，檢驗科人員應注意對其生產日期進行檢查，確認其生產日期在保質期內，并對開瓶日期及瓶口密封性進行查看，確保其沒有發生變質、吸潮等情況。

八不能培養的微生物標本該怎樣留取標本檢測

人體感染的微生物包括細菌、病毒、真菌、支原體等，對于一些不易或不能進行人工培養的微生物，首先，檢測抗體（如肺炎支原體、乙肝病毒、流感病毒等），采集患者血液，及時檢測，如不能檢測，可離心后放2℃～8℃冰箱保存。其次，使用PCR等分子生物學的方法直接檢測病原體，采集可疑部位的分泌物等標本，放入特殊的保存液體，及時運送實驗室，提取微生物的DNA或RNA進行檢測，或使用金標等快速檢測試劑直接檢測采集標本的目標微生物。對微生物標本的檢驗結果進行判定，人為因素包括手柄操作等都會使結果出現偏差，需要由質量專家、部門負責人等經驗豐富的人員一起定奪，如此能減少很多不必要的誤差。

（作者單位系上海市徐匯區大華醫院）