卵黃抗體在毛皮動物疾病防治中的應(yīng)用

于慧麗,邵志武

1.山東省榮成市上莊畜牧獸醫(yī)站，山東榮成 264300；2.山東省榮成市夏莊畜牧獸醫(yī)站，山東榮成 264300

卵黃抗體也被稱為是卵黃免疫球蛋白，通過特殊抗原刺激后，經(jīng)B 淋巴細(xì)胞能夠形成多克隆抗體并轉(zhuǎn)移至卵黃中，大多數(shù)為IgG，免疫效果較好，通常卵黃抗體具有良好的耐酸性，較強(qiáng)穩(wěn)定性，制作流程簡單，因此被廣泛用于多種生物制品中和獸醫(yī)領(lǐng)域，其在動物重大疾病防控和治療中具有廣泛前景。本研究分析了卵黃抗體的形成過程以及其理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特點等，闡述在毛皮動物疾病防治中卵黃抗體的應(yīng)用。

1 卵黃抗體

1.1 形成過程

卵黃抗體是具備特定抗原的多克隆抗體，是通過免疫禽蛋所提取的，能夠經(jīng)體液免疫應(yīng)答，最終由B 淋巴細(xì)胞分化形成抗體，具體流程如下：當(dāng)受到外界抗原刺激之后，體內(nèi)免疫系統(tǒng)會被激活，抗原經(jīng)過一系列酶應(yīng)答形成特異性抗體，并隨著血液循環(huán)到達(dá)動物身體多個位置，有效抑制抗原并對機(jī)體形成保護(hù)。對機(jī)體采用多種抗原刺激之后，在體內(nèi)其抗體會通過血流循環(huán)移動到卵巢中，在卵巢受體作用下最終抗體到達(dá)卵巢濾泡和輸卵管中，在卵巢中抗體最終形成卵黃抗體。

1.2 結(jié)構(gòu)

由動物所生存的免疫球蛋白即卵黃抗體，從結(jié)構(gòu)來看呈現(xiàn)Y 字形，分子質(zhì)量為180 ku，包含兩條重鏈和兩條輕鏈，可通過二硫鍵將兩條鏈進(jìn)行整合，其中輕鏈分子量為20 ～30 ku，重鏈的分子量為60 ～70 ku，包含一個可變區(qū)和4 個不可變區(qū)，兩條鏈中含有甘氨酸和脯氨酸，即CH1-CH2 以及CH2-CH3 邊界區(qū)域和甘氨酸殘基，因此使卵黃抗體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。

1.3 卵黃抗體理化性質(zhì)

從等電點來看卵黃抗體數(shù)值為5.7 ～7.6 之間，應(yīng)對壓力相對穩(wěn)定，在處于4 000 kg/cm2壓力時，卵黃抗體的活性較高。采用不同溫度進(jìn)行卵黃抗體熱處理之后可以發(fā)現(xiàn)，隨溫度以及加熱時間延長，卵黃抗體與抗原結(jié)合性能有一定程度的降低，在處于60 ～70 ℃時，卵黃抗體的性質(zhì)較為穩(wěn)定，經(jīng)過70 ℃持續(xù)90 min 加熱之后，會降低卵黃抗體的氧化性。當(dāng)外界溫度高于80 ℃時，卵黃抗體會出現(xiàn)變性，當(dāng)外界pH 條件為3.5 ～11.0，抗體活性相對穩(wěn)定，如果高于或低于這種pH 條件會降低卵黃抗體活性，尤其在處于強(qiáng)堿或強(qiáng)酸條件下會使抗體的特異性位點產(chǎn)生構(gòu)象變化，當(dāng)胃蛋白酶與卵黃抗體發(fā)生反應(yīng)時其不會對卵黃抗體的活性產(chǎn)生影響，而在胰蛋白酶與卵黃抗體接觸之后會影響卵黃抗體活性。除此之外，在處于耐受高滲環(huán)境且反復(fù)凍融的情況下，能夠使卵黃抗體活性保持穩(wěn)定。

1.4 具體作用機(jī)理

特異性的卵黃抗體能夠有效抵御病原菌，以防機(jī)體受到傷害，具有良好的免疫功能。具體作用：第一，有效抑制病毒感染。當(dāng)病毒表面受體與卵黃抗體出現(xiàn)特異性結(jié)合時，會使病毒自身結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞，進(jìn)一步影響細(xì)胞與病毒膜的融合，有效抑制細(xì)胞中核酸復(fù)制，使卵黃抗體依附于病毒衣殼中，有效防止病毒快速生長；第二，病原體的抑制。病原菌的菌毛能夠被粘附在抗體分子中，進(jìn)而通過腸道壁中病原菌抑制會使非腸道菌進(jìn)一步失去宿主能力，對病原菌產(chǎn)生破壞效果，防止病原菌快速增殖；第三，抑制內(nèi)毒素的產(chǎn)生。卵黃抗體能夠中和一些毒素，比如細(xì)菌毒素或霉菌等，進(jìn)而使體內(nèi)巨噬細(xì)胞形成炎性炎癥因子，幫助機(jī)體緩解炎癥反應(yīng)，同時能夠抑制靶細(xì)胞與內(nèi)毒素的結(jié)合，防止機(jī)體產(chǎn)生不良反應(yīng)[1]；第四，其他的作用。結(jié)合現(xiàn)有的研究，在腸道中卵黃抗體能夠被消化酶降解，經(jīng)過降解之后的片段包含抗體，能夠被腸道吸收，抗體進(jìn)入血液后能夠與病原菌特定位點融合，在腸道中會保留穩(wěn)定區(qū)，但會使卵黃抗體失去對易感細(xì)胞致病性。

1.5 卵黃抗體優(yōu)點

根據(jù)現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，卵黃抗體存在較多的抗原位點，一般來說卵黃抗體是不會與哺乳動物抗原產(chǎn)生反應(yīng)的，并且能夠有效抑制FC 受體的結(jié)合，通過免疫檢測不會導(dǎo)致結(jié)果存在假陽性或假陰性問題。卵黃抗體針對疾病治療作用較快，其療效高，不會形成耐藥菌，對于抗原區(qū)域有特異免疫性。當(dāng)卵黃抗體產(chǎn)生作用后，機(jī)體會通過分解吸收抗體，將其作為營養(yǎng)物質(zhì)，對機(jī)體來說無明顯副作用，不會存在有害物質(zhì)殘留，當(dāng)禽類動物接受免疫時僅需注入較小劑量的抗原物質(zhì)，此時能夠在機(jī)體內(nèi)可產(chǎn)生使抗原卵黃抗體長時間維持較高水平。除此之外，母雞飼養(yǎng)便捷，具有雞蛋均勻性好、成本低、便于收集等優(yōu)勢。在提取卵黃抗體時無需采集動物血液，不會損害動物健康，是符合國家提倡動物保護(hù)準(zhǔn)則的。

2 在疾病防治中卵黃抗體的應(yīng)用

第一， 兔瘟。兔瘟也被稱為是兔病毒性出血癥，是通過兔瘟病毒所導(dǎo)致的一種熱性、急性和毀滅性傳染病，該疾病通常會呈現(xiàn)暴發(fā)性流行，具有較高的發(fā)病率及死亡率，給基層養(yǎng)兔業(yè)帶來較大經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)前對于兔瘟這一疾病無有效治療藥物，在接種疫苗7 ～10 d 之后，才能夠形成抗體，因此無法對兔子產(chǎn)生有效保護(hù)。在構(gòu)建疫苗免疫之前，針對兔瘟易感兔群采取有效保護(hù)方法，以控制疾病發(fā)生具有重要意義。根據(jù)王孝友等人提出，可采用充分抗原免疫產(chǎn)蛋雞精制的卵黃抗體，同時采用血凝抑制實驗測定，最高滴度為15log2，根據(jù)臨床研究發(fā)現(xiàn)，卵黃抗體能夠針對發(fā)病兔子實現(xiàn)緊急防治，其治愈率達(dá)84%～92%。張宏偉等人制備兔瘟卵黃抗體，其HI 效價為14log2，可維持7 周以上。在兔瘟高發(fā)季節(jié)之前，每間隔15 d 進(jìn)行兩次疫苗接種，相比往年數(shù)據(jù)來說能夠有效降低該疾病發(fā)生率[2]。

第二，兔大腸桿菌病。兔大腸桿菌被稱為是粘液性腸炎，該疾病是由致病性大腸桿菌以及相關(guān)毒素所導(dǎo)致的腸道性疾病，尤其對于斷奶較短的幼兔來說，疾病發(fā)生率較高，通常該疾病病程較長，反復(fù)發(fā)作，具有較高的死亡率。兔大腸桿菌病是雞抗兔大腸桿菌高免疫反應(yīng)，通過微量凝結(jié)實驗，分析高免疫卵黃抗體的臨床應(yīng)用效果以及消長規(guī)律，通過研究發(fā)現(xiàn)，超強(qiáng)化免疫5 周之后抗體的效價能夠達(dá)到高峰值，經(jīng)9 周之后抗體效價逐漸降低，相同劑量的卵黃抗體效價為26 d。從肌肉位置注入2 mL/kg，連續(xù)3 d，其對于兔大腸桿菌感染治愈率達(dá)90%，相比頭孢噻肟抗生素等藥物治療來說，卵黃抗體治愈率明顯要高于傳統(tǒng)抗生素藥物。

第三，特種毛皮動物疾病治療。對于狐貍、水貂其主要傳染病包括：水貂細(xì)小病毒性腸炎、狐貍腦炎、水貂出血性肺炎、犬瘟熱、水貂阿留申病等。嚴(yán)新華等人利用水貂腸炎病毒免疫蛋制備卵黃抗體，通過研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過5 次免疫制劑卵黃抗體可以發(fā)現(xiàn)，瓊脂擴(kuò)散實驗效價為1:25，第30 天瓊脂擴(kuò)散實驗效價為1:23，表明該抗體具有良好的穩(wěn)定性，經(jīng)4 ℃保存，在120 d 內(nèi)效價能夠保持不變，利用這種抗體進(jìn)行細(xì)小病毒性腸炎犬病的治療，治療率為93%。莊金秋等人利用水貂犬溫?zé)酑DV 分離病毒，進(jìn)行抗原免疫蛋雞卵黃抗體制備，采用間接ELISA 法和AGP 法測定抗體水平，通過研究發(fā)現(xiàn)，卵黃抗體最高抗體滴度與AGP 相近，3 ～5 d 內(nèi)可持續(xù)收集雞蛋制備卵黃抗體。

3 在國際中卵黃抗體的應(yīng)用研究現(xiàn)狀

當(dāng)前日本、德國、韓國等多個國家陸續(xù)提出卵黃抗體研究成果，卵黃抗體可用于特種毛皮動物疾病的防治過程中，且不會引起動物高免血清治療副作用，同時能夠避免同源材料或近源材料攜帶病毒，使動物存在潛在危險，能夠有效降低動物疾病暴發(fā)，為養(yǎng)殖戶降低經(jīng)濟(jì)損失。Kiempeiei 等人提出雞蛋中存在卵黃抗體，之后研究學(xué)者對于卵黃抗體進(jìn)行深入研究，由歐洲研究學(xué)者提出可利用卵黃抗體以代替哺乳動物的IgG 抗體進(jìn)行生產(chǎn)，主要由于兩種抗體結(jié)構(gòu)類似，但在很多方面IgY 性能較好。相對來說，雞是實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化發(fā)展以及SPF 化的重要實驗動物，能夠幫助有關(guān)企業(yè)或科研院所實現(xiàn)卵黃抗體的規(guī)模化生產(chǎn)。因此，在一些重大動物疾病治療和診斷中卵黃抗體具有廣泛應(yīng)用優(yōu)勢。然而當(dāng)前在進(jìn)行動物疾病治療中，卵黃抗體在具體應(yīng)用中還需要注意很多問題，比如在動物發(fā)病初期卵黃抗體治療效果顯著，卵黃抗體和動物疫苗接種兩者之間需間隔一段時間，通過臨床研究發(fā)現(xiàn)，卵黃抗體注射效果較好，但當(dāng)卵黃抗體被用于飲水效果分析時，其整體效果不佳[3]。

4 小結(jié)

總之，卵黃抗體作為多克隆抗體，是經(jīng)禽類特異性抗原刺激之后，經(jīng)B 淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生的抗體，其具有良好免疫功能。本研究分析了卵黃抗體的結(jié)構(gòu)特點、理化性質(zhì)、作用機(jī)理以及在動物疾病治療中的應(yīng)用，尤其是在毛皮動物疾病治療，包括兔瘟、兔大腸桿菌病、特種毛皮動物疾病的應(yīng)用效果。未來隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展以及人們對卵黃抗體的研究拓展，可不斷改善卵黃抗體的生產(chǎn)制備技術(shù)，后續(xù)在動物疾病防治中卵黃抗體將會發(fā)出發(fā)揮更大作用。