枸杞葉黃酮泡騰片的配方優(yōu)化及抗氧化活性研究

查曉彤,裴宇芳,馬瑞雪,范艷麗

(寧夏大學(xué) 食品與葡萄酒學(xué)院,寧夏 銀川,750021)

枸杞(LyciumbarbarumL.)主要分布在西北和華北地區(qū),其中,寧夏中寧枸杞質(zhì)量較好。枸杞在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中被廣泛用作保健食品補(bǔ)充劑[1],用于改善視力等[2]。經(jīng)研究表明,枸杞葉的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和枸杞果一樣,富含氨基酸、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分以及生物堿、黃酮類等活性成分[3]。枸杞葉中總黃酮含量遠(yuǎn)高于枸杞果[4],酚類化合物在抗氧化中起重要作用[5],具有抗衰老[6]、抗炎[7]、保肝[8]作用。

新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的自由基,對(duì)健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。自由基可降解DNA、蛋白質(zhì)和脂類等細(xì)胞成分,易產(chǎn)生衰老、致癌和硬化等不良影響,導(dǎo)致心血管、炎癥等多種疾病。因此,研制具有較強(qiáng)抗氧化作用的保健品,有助于預(yù)防此類疾病。

目前,枸杞葉加工形式較少,市面上枸杞葉產(chǎn)品主要為枸杞葉茶。本研究以枸杞葉為原料,制備枸杞葉黃酮提取物,按比例添加不同輔料,通過(guò)單因素、爬坡和響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化枸杞葉黃酮泡騰片配方,研制一款口感適宜、香氣較好、組織形態(tài)光滑完整、崩解時(shí)間正常以及色澤怡人的枸杞葉黃酮泡騰片。通過(guò)檢測(cè)理化指標(biāo)和抗氧化活性,評(píng)價(jià)其質(zhì)量與抗氧化能力,為枸杞葉高值化利用提供一定的理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

枸杞葉茶,寧夏童子茶科技有限公司;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,上海源葉生物公司;抗壞血酸、DPPH標(biāo)準(zhǔn)品、ABTS標(biāo)準(zhǔn)品等,阿拉丁試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SE-750粉碎機(jī),圣像電器有限公司;H97恒溫磁力攪拌器,上海梅穎浦儀器儀表制造有限公司;LGJ-50FG冷凍干燥機(jī),北京亞星儀科科技發(fā)展有限公司;UV-1800紫外分光光度計(jì),日本島津公司;實(shí)驗(yàn)室單沖壓片機(jī),上海泰博雷特機(jī)械有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 枸杞葉黃酮提取物的制備

提取與純化,參考方甜等[8]的方法稍作改動(dòng)。

1.3.2 枸杞葉黃酮泡騰片工藝流程

枸杞葉黃酮泡騰片工藝流程如下:

枸杞葉黃酮提取物→加入輔料混合→制粒→壓片→滅菌→包裝

1.3.3 單因素試驗(yàn)

1.3.3.1 崩解劑檸檬酸與NaHCO3配比單因素試驗(yàn)

崩解劑的配比決定崩解時(shí)間。固定枸杞葉黃酮提取物添加量6%(質(zhì)量分?jǐn)?shù),下同)、崩解劑50%、甜菊糖苷0.7%、可溶性淀粉9%、微晶纖維素1.5%、聚乙烯吡咯烷酮1.5%、麥芽糊精30%、硬脂酸鎂1.5%。以感官評(píng)分為指標(biāo),選取m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)為1∶0.5、1∶0.6、1∶0.7、1∶0.8、1∶0.9,進(jìn)行單因素試驗(yàn)。

1.3.3.2 填充劑添加量單因素試驗(yàn)

選擇麥芽糊精作為填充劑。固定枸杞葉黃酮提取物添加量6%、甜菊糖苷0.7%、崩解劑50%、可溶性淀粉9%、硬脂酸鎂1.5%、聚乙烯吡咯烷酮1.5%、微晶纖維素1.5%、m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)為1∶0.7。選取麥芽糊精添加量20%、25%、30%、35%、40%,進(jìn)行單因素試驗(yàn)。

1.3.3.3 黏合劑添加量單因素試驗(yàn)

選擇聚乙烯吡咯烷酮作為黏合劑,可以使得泡騰片更好的形成一個(gè)完整的片劑。固定枸杞葉黃酮提取物添加量6%、甜菊糖苷0.7%、可溶性淀粉9%、崩解劑50%、硬脂酸鎂1.5%、微晶纖維素1.5%、麥芽糊精30%、m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)為1∶0.7。以感官評(píng)分為指標(biāo),選取聚乙烯吡咯烷酮添加量0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%,進(jìn)行單因素試驗(yàn)。

1.3.3.4 枸杞葉黃酮提取物添加量單因素試驗(yàn)

枸杞葉黃酮提取物是該泡騰片的主要活性物質(zhì)。固定甜菊糖苷0.7%,崩解劑50%、硬脂酸鎂1.5%、聚乙烯吡咯烷酮1.5%、可溶性淀粉9%、麥芽糊精30%、微晶纖維素1.5%、m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)為1∶0.7。以感官評(píng)分為指標(biāo),選取枸杞葉黃酮提取物添加量4.0%、5.0%、6.0%、7.0%、8.0%,進(jìn)行單因素試驗(yàn)。

1.3.3.5 甜味劑添加量單因素試驗(yàn)

選擇甜菊糖苷作為甜味劑。固定枸杞葉黃酮提取物添加量6%,崩解劑50.0%、硬脂酸鎂1.5%、聚乙烯吡咯烷酮1.5%、可溶性淀粉9%、麥芽糊精30%、微晶纖維素1.5%、m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)為1∶0.7。以感官評(píng)分為指標(biāo),選取甜菊糖苷添加量0.5%、0.7%、0.9%、1.1%、1.3%,進(jìn)行單因素試驗(yàn)。

1.3.4 枸杞葉黃酮泡騰片配方的Plackett-Burman試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上,通過(guò)Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)5個(gè)影響因素進(jìn)行評(píng)估。以感官評(píng)分為響應(yīng)值,對(duì)每個(gè)因素取高水平和低水平值,篩選影響顯著的因素用于后續(xù)響應(yīng)面試驗(yàn)。Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

表1 Plackett-Burman試驗(yàn)的因素與水平Table 1 Factors and levels of Plackett-Burman test

1.3.5 枸杞葉黃酮泡騰片配方的Box-Behnken響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

在Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上,選取A[m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)]、B(麥芽糊精添加量)和C(聚乙烯吡咯烷酮添加量)3個(gè)對(duì)枸杞葉黃酮泡騰片感官評(píng)分影響顯著的因素,并通過(guò)最陡Plackett-Burman試驗(yàn)選取試驗(yàn)中心點(diǎn),進(jìn)行Box-Behnken響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。

表2 Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)的因素與水平Table 2 Factors and levels of Box-Behnken response surface test

1.3.6 枸杞葉黃酮泡騰片感官評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

取不同配比的枸杞葉黃酮泡騰片,室溫下置于200 mL蒸餾水中,崩解后,每個(gè)樣品取20 mL。挑選10名從事相關(guān)工作或者有相關(guān)工作經(jīng)驗(yàn)的人員,依據(jù)表3的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估,感官評(píng)分滿分為10分。按照公式(1)計(jì)算感官評(píng)分:

感官評(píng)分=口感×0.3+發(fā)泡量×0.2+香氣×0.2+組織狀態(tài)×0.1+崩解時(shí)間×0.1+色澤×0.1

(1)

1.3.7 枸杞葉黃酮泡騰片質(zhì)量分析

1.3.7.1 片重差異測(cè)定

參考曲中原等[9]的方法并略作修改,隨機(jī)選取20片枸杞葉黃酮泡騰片,電子天平分別稱取每片質(zhì)量,再稱取20片的總質(zhì)量,求平均值。片重差異≤5%為合格,差異>5%則不合格。按照公式(2)計(jì)算片重差異:

(2)

表3 感官評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)Table 3 Sensory assessment criteria

1.3.7.2 硬度測(cè)定

參考鄭丹丹等[10]的方法并略作修改,隨機(jī)選取6片枸杞葉黃酮泡騰片,質(zhì)構(gòu)儀測(cè)定其硬度。最佳硬度大小為30～50 N,不得檢出>50 N或<20 N的泡騰片。

1.3.7.3 崩解時(shí)限

參考王京龍等[11]的方法并略作修改,隨機(jī)選取1片枸杞葉黃酮泡騰片,將其放入燒杯中,加入100 mL 37 ℃溫水,記錄完全溶解而無(wú)殘留的時(shí)間。同法檢查6片,取平均值。

1.3.7.4 發(fā)泡量的測(cè)定

隨機(jī)選取1片枸杞葉黃酮泡騰片,研磨,稱取粉末1.00 g,置于含50 mL蒸餾水燒杯中,發(fā)泡完全后測(cè)量發(fā)泡體積,平行測(cè)定6次,取平均值。

1.3.7.5 pH測(cè)定

隨機(jī)選取1片枸杞葉黃酮泡騰片,室溫下置于70 mL蒸餾水中,待其完全溶解,使用pH計(jì)測(cè)定,平行測(cè)定6次,取平均值。

1.3.7.6 黃酮含量含量測(cè)定

采用NaNO2-Al(NO3)3比色法測(cè)定總黃酮含量[12],于510 nm下測(cè)定吸光值,得回歸方程:Y=0.019 8X+0.008 3,R2=0.999 4。

準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量樣品,配成一定濃度的樣液,于510 nm處測(cè)定吸光值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,按公式(3)計(jì)算含量。

(3)

式中:ρ,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的樣品溶液中總黃酮的質(zhì)量濃度,mg/mL;V,樣品溶液體積,mL;m,稱取的樣品質(zhì)量,g。

1.3.8 枸杞葉黃酮泡騰片的抗氧化活性試驗(yàn)

將陽(yáng)性對(duì)照維生素C、枸杞葉黃酮提取物和枸杞葉黃酮泡騰片溶液稀釋成系列質(zhì)量濃度(1、2、3、4、5 mg/mL)溶液。參考李志等[13]的方法稍作修改,測(cè)定DPPH自由基清除能力;參考WU等[14]的方法,測(cè)定ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力;參考吳冬青等[15]的方法稍作修改,測(cè)定羥自由基(·OH)清除能力;參考阮國(guó)瑞[16]的方法,測(cè)定鐵還原能力。通過(guò)枸杞葉黃酮泡騰片線性回歸方程計(jì)算半數(shù)清除率(IC50)。

1.3.9 統(tǒng)計(jì)分析方法

所有試驗(yàn)均重復(fù)3次,使用Excel 2010、SPSS 21.0、Origin 2018對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理并繪圖,使用Design Expert 11進(jìn)行響應(yīng)面分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 枸杞葉黃酮提取物的黃酮含量

代入公式(3)計(jì)算得:所制備枸杞葉黃酮提取物的總黃酮含量為(812.4±0.31) mg/g。

2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 檸檬酸與NaHCO3配比對(duì)泡騰片感官評(píng)分的影響

常用的酸源包括蘋果酸、檸檬酸。蘋果酸雖然味道較好,但易吸收水分,不宜后期保存。檸檬酸價(jià)格相對(duì)較低,酸味適中。NaHCO3、Na2CO3等堿性物質(zhì)可與酸源在水中產(chǎn)生大量CO2,但NaHCO3更適合批量生產(chǎn)。

由圖1-a可知,當(dāng)m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)為1∶0.7時(shí),溶液pH值適宜,酸甜可口,發(fā)泡量較多。隨著NaHCO3比例增大,崩解時(shí)間較短,發(fā)泡量較多,但溶液pH值上升,口感發(fā)澀。因此,選擇1∶0.7為檸檬酸與NaHCO3最佳配比。

2.2.2 麥芽糊精添加量對(duì)泡騰片感官評(píng)分的影響

填充劑主要作用為稀釋、填充、增強(qiáng)分散性和溶解度。乳糖和淀粉不適宜高血糖人群食用。麥芽糊精可快速溶于水中且熱量低,溶于水時(shí)不易結(jié)塊。

由圖1-b可知,麥芽糊精添加量在20%～30%時(shí),感官評(píng)分逐漸增加,超過(guò)30%,感官評(píng)分逐漸下降。因?yàn)楫?dāng)添加量<30%則不宜成型,超過(guò)30%時(shí),影響泡騰片溶液的澄清度。因此,選擇麥芽糊精添加量為30%。

2.2.3 聚乙烯吡咯烷酮添加量對(duì)泡騰片感官評(píng)分的影響

黏合劑主要作用為促進(jìn)片劑成型,不易松散。常用黏合劑為明膠、聚乙二烯吡咯烷酮等。明膠黏度較大,長(zhǎng)時(shí)間放置,硬化明顯,在水中不易崩解。聚乙二烯吡咯烷酮為干黏合劑,常添加于泡騰片中。

由圖1-c可知,隨聚乙烯吡咯烷酮添加量增加,感官評(píng)分呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢(shì),當(dāng)添加量為1.5%時(shí),感官評(píng)分最高。當(dāng)添加量<1.5%時(shí),泡騰片不宜成型;添加量>1.5%時(shí),硬度較大,不易崩解。因此,選擇聚乙烯吡咯烷酮添加量為1.5%。

2.2.4 枸杞葉黃酮提取物添加量對(duì)泡騰片感官評(píng)分的影響

由圖1-d可知,當(dāng)枸杞葉黃酮提取物添加量在3%～6%感官評(píng)分逐漸增加,6%時(shí)感官評(píng)分最高。當(dāng)枸杞葉黃酮提取物添加量>6%時(shí),感官評(píng)分下降,主要原因?yàn)殍坭饺~黃酮提取物味感微苦,當(dāng)枸杞葉黃酮提取物添加量>6%時(shí),味道苦澀,湯色顏色加深。因此,選擇枸杞葉黃酮提取物添加量為6%。

2.2.5 甜菊糖苷添加量對(duì)泡騰片感官評(píng)分的影響

由圖1-e可知,當(dāng)甜菊糖苷添加量為0.9%時(shí),感官評(píng)分達(dá)到最高。添加量<0.9%時(shí),無(wú)法掩蓋苦澀味;添加量>0.9%時(shí),由于甜菊糖苷甜度是蔗糖的200～300倍[17],濃度偏高會(huì)產(chǎn)生異味,影響枸杞葉黃酮泡騰片獨(dú)特風(fēng)味。因此,選擇甜菊糖苷添加量為0.9%。

2.2.6 其他添加劑的選擇

潤(rùn)滑劑選取對(duì)溶液澄清度無(wú)影響的硬脂酸鎂,但硬脂酸鎂具有疏水性,對(duì)崩解時(shí)間有影響,應(yīng)減少硬脂酸鎂的添加量[18],因此通過(guò)單因素試驗(yàn)確定潤(rùn)滑劑的添加量為1.5%。另外,選擇微晶纖維素和可溶性淀粉混合可以促進(jìn)泡騰片的崩解,通過(guò)單因素試驗(yàn)確定可溶性淀粉和微晶纖維素的添加量分別為9%和1.5%。由于這3種添加劑對(duì)泡騰片影響較小,起到輔助成型作用,因此在試驗(yàn)中固定其添加量。

a-m(檸檬酸)∶m(NaHCO3);b-麥芽糊精添加量;c-聚乙烯吡咯烷酮添加量;d-枸杞葉黃酮提取物添加量;e-甜菊糖苷添加量圖1 不同原輔料添加量對(duì)枸杞葉黃酮泡騰片感官評(píng)分的影響Fig.1 Effects of different raw materials on sensory scores of flavonoids effervescent tablets from L.barbarum leaves

2.3 枸杞葉黃酮泡騰片配方的Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.3.1 Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果

在單因素試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上,進(jìn)行5因素2水平Plackett-Burman試驗(yàn),共12組試驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表4。

2.3.2 方差分析

由表5可知,模型P=0.002 4<0.05,表明試驗(yàn)?zāi)Ｐ惋@著。5個(gè)因素中,因素A、B、C的P值均小于0.05,對(duì)泡騰片感官評(píng)分的影響顯著。因素D、E對(duì)泡騰片感官評(píng)分的影響不顯著,因此將后續(xù)試驗(yàn)的枸杞葉黃酮提取物添加量設(shè)定為6%、甜菊糖苷添加量設(shè)定為0.9%。

根據(jù)Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果,最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表6。當(dāng)A、B、C分別為1∶0.6、25%、1%時(shí),其感官評(píng)分最好,說(shuō)明此時(shí)比較接近最佳響應(yīng)區(qū)域。因此,Box-Behnken試驗(yàn)將以此作為試驗(yàn)中心點(diǎn),對(duì)配方進(jìn)行優(yōu)化。

表4 Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Results for Plackett-Burman test

表5 Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果的顯著性檢驗(yàn)Table 5 Significance test of factors of Plackett-Burman

表6 最陡Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 6 Design and results of steepest Plackett-Burman

2.4 枸杞葉黃酮泡騰片配方的Box-Behnken響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.4.1 Box-Behnken試驗(yàn)結(jié)果

在Plackett-Burman試驗(yàn)基礎(chǔ)上確定優(yōu)化范圍,進(jìn)行3因素3水平Box-Behnken試驗(yàn),共17組試驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表7。

2.4.2 回歸方程的擬合及方差分析

通過(guò)Design-Expert 7.0軟件對(duì)表7的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,得到回歸方程:感官評(píng)分=8.48+0.637 5A+0.025B+0.187 5C-0.225AB-0.1AC-0.175BC-1.92A2-1.74B2-1.47C2,對(duì)該方程進(jìn)行方差分析結(jié)果見(jiàn)表8。

表7 Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果Table 7 Results for Box-Behnken response surface test

表8 感官評(píng)分回歸模型的方差分析Table 8 Analysis of variance of sensory score regression model

由表8可知回歸方程的F值為176.25(P<0.000 1),表明此模型差異極顯著;對(duì)回歸方程進(jìn)行失擬項(xiàng)檢驗(yàn):F=2.60,P=0.089 5>0.05,不顯著,R2=0.995 6,表明方程的擬合度和可信度高,可用于枸杞葉黃酮泡騰片感官評(píng)價(jià)預(yù)測(cè)。由檢驗(yàn)值F可知,對(duì)枸杞葉黃酮泡騰片感官評(píng)分的影響大小依次是:A[m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)]>C(聚乙烯吡咯烷酮添加量)>B(麥芽糊精添加量)。由各因素的P值可知,A[m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)]對(duì)枸杞葉黃酮泡騰片感官評(píng)分的影響極顯著(P<0.000 1),C(聚乙烯吡咯烷酮添加量)對(duì)感官評(píng)分影響顯著(P=0.016 5<0.05)。兩兩交互項(xiàng)中,AB交互作用P=0.032 5<0.05,說(shuō)明檸檬酸與NaHCO3配比和麥芽糊精添加量的交互作用對(duì)枸杞葉黃酮泡騰片的感官評(píng)分影響顯著;二次項(xiàng)A2、B2、C2對(duì)枸杞葉黃酮泡騰片的感官評(píng)分均有極顯著影響。

2.4.3 響應(yīng)面和等高線分析

當(dāng)?shù)雀呔€為圓形,則表明兩個(gè)因素之間的相互作用不顯著,而等高線為橢圓形,則表明兩個(gè)因素之間的相互作用顯著。圖2可直觀地反映A[m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)]、B(麥芽糊精添加量)、C(聚乙烯吡咯烷酮添加量)對(duì)泡騰片感官評(píng)分的影響。A與B之間交互作用顯著P=0.032 5<0.05,對(duì)枸杞葉黃酮泡騰片感官評(píng)分影響較大。

a、b-m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)和麥芽糊精添加量交互; c、d-m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)和聚乙烯吡咯烷酮添加量交互; e、f-麥芽糊精和聚乙烯吡咯烷酮添加量交互圖2 不同因素交互作用對(duì)感官評(píng)分影響的 響應(yīng)面和等高線Fig.2 Response surface and contour of the interaction of different factors on sensory scores 注:a、c、e為響應(yīng)面圖;b、d、f為等高線圖。

通過(guò)軟件對(duì)所建立的模型進(jìn)行分析,預(yù)測(cè)值感官評(píng)分為8.53分。在此工藝條件下,進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn),平均感官評(píng)分為(8.49±0.075)分,表明模型有很好的精度和擬合度。

2.5 質(zhì)量分析結(jié)果

根據(jù)《中國(guó)藥典總則》(2020版)中關(guān)于泡騰片的特性及對(duì)泡騰片的要求,通過(guò)片重差異、硬度、崩解時(shí)間、發(fā)泡量、pH值和黃酮含量,建立初步質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。以感官評(píng)分為指標(biāo),通過(guò)單因素、Plackett-Burman和Box-Behnken試驗(yàn),得到枸杞葉黃酮泡騰片最佳配方為:枸杞葉黃酮提取物6%、聚乙烯吡咯烷酮1%、麥芽糊精25%、硬脂酸鎂1.5%、甜菊糖苷0.9%、淀粉9%、微晶纖維素1.5%、崩解劑55.1%,m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)為1∶0.6。在此配方下制備3批枸杞葉黃酮泡騰片,對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量分析。 結(jié)果表明,枸杞葉黃酮泡騰片平均片重為(408±11) mg,片重差異小于5%;硬度(46.7±0.51) N,在30～50 N,未發(fā)現(xiàn)超過(guò)50 N;崩解時(shí)間(217.8±2.07) s,未超過(guò)5 min;發(fā)泡量(5.01±0.49) mL;pH值4.80±0.04,符合相關(guān)規(guī)定;總黃酮含量為(47.93±0.045) mg/g。所得枸杞葉黃酮泡騰片表面較光滑,無(wú)裂紋,在水中崩解后,湯色澄清透明,溶液呈弱酸性,酸甜可口。

2.6 體外抗氧化活性

2.6.1 對(duì)DPPH自由基的清除能力

由圖3-a可知,當(dāng)維生素C、枸杞葉黃酮提取物質(zhì)量濃度在1 mg/mL以上時(shí),對(duì)DPPH自由基的清除作用明顯,抗氧化能力強(qiáng)。隨著枸杞葉黃酮泡騰片質(zhì)量濃度增加,對(duì)DPPH自由基的清除作用逐漸增強(qiáng),當(dāng)枸杞葉黃酮泡騰片質(zhì)量濃度為5 mg/mL時(shí),清除率可達(dá)到76.34%,接近于枸杞葉黃酮提取物。其回歸方程Y=6.299 5X+45.15,R2=0.984 5,對(duì)DPPH自由基清除率IC50為0.77 mg/mL。以不含枸杞葉黃酮提取物的泡騰片做陰性對(duì)照,當(dāng)泡騰片陰性對(duì)照質(zhì)量濃度為5 mg/mL時(shí),其對(duì)DPPH自由基的清除作用為11.19%,抗氧化能力較弱,表明枸杞葉黃酮泡騰片的抗氧化能力主要來(lái)源于枸杞葉黃酮。

2.6.2 對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基的清除能力

由圖3-b可知,當(dāng)維生素C質(zhì)量濃度在1 mg/mL以上時(shí),對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基的清除作用基本呈直線。在質(zhì)量濃度為5 mg/mL時(shí),枸杞葉黃酮提取物的清除率接近于維生素C。在1～5 mg/mL時(shí),枸杞葉黃酮泡騰片對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基的清除率逐漸增加,存在劑量依賴效應(yīng),在5 mg/mL時(shí),清除率可達(dá)到80.21%。當(dāng)泡騰片陰性對(duì)照質(zhì)量濃度為5 mg/mL時(shí),對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基的清除作用為5.19%,表明枸杞葉黃酮提取物和枸杞葉黃酮泡騰片具有較強(qiáng)的抗氧化能力,泡騰片陰性對(duì)照的抗氧化能力較弱。根據(jù)枸杞葉黃酮泡騰片回歸方程Y=9.860 7X+30.197,R2=0.993 0,對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基清除率IC50為2.01 mg/mL。

2.6.3 對(duì)·OH的清除能力

由圖3-c可知,隨著枸杞葉黃酮提取物和枸杞葉黃酮泡騰片質(zhì)量濃度的增加,對(duì)·OH的清除作用逐漸增強(qiáng),存在劑量依賴效應(yīng)。當(dāng)枸杞葉黃酮泡騰片質(zhì)量濃度為5 mg/mL時(shí),清除率可達(dá)89.5%,具有較強(qiáng)的抗氧化活性,而泡騰片陰性對(duì)照清除率僅為10.21%,抗氧化活性較弱。根據(jù)枸杞葉黃酮泡騰片回歸方程Y=9.881 4X+39.113,R2=0.993 4,對(duì)·OH清除率IC50為1.10 mg/mL。

2.6.4 對(duì)鐵還原能力

由圖3-d可知,隨質(zhì)量濃度增加,對(duì)鐵還原能力逐漸增強(qiáng),存在劑量依賴效應(yīng)。根據(jù)吸光值大小可判斷還原能力強(qiáng)弱,吸光度值越高,還原能力越強(qiáng),其抗氧化能力也越高。以維生素C作為陽(yáng)性對(duì)照,當(dāng)質(zhì)量濃度為1 mg/mL時(shí),枸杞葉黃酮提取物、枸杞葉黃酮泡騰片和泡騰片陰性對(duì)照對(duì)鐵還原能力分別是維生素C的71.32%、15.25%、11.76%,當(dāng)質(zhì)量濃度為5 mg/mL時(shí),枸杞葉黃酮提取物、枸杞葉黃酮泡騰片和泡騰片陰性對(duì)照對(duì)鐵還原能力分別是維生素C的91.79%、28.85%、13.6%。相同濃度下,還原力大小為維生素C>枸杞葉黃酮提取物>枸杞葉黃酮泡騰片>泡騰片陰性對(duì)照。

3 結(jié)論

本研究采用單因素、爬坡和響應(yīng)面法,優(yōu)化了枸杞葉黃酮泡騰片配方,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,枸杞葉黃酮泡騰片最佳配方為:枸杞葉黃酮提取物6%、聚乙烯吡咯烷酮1%、麥芽糊精25%、硬脂酸鎂1.5%、甜菊糖苷0.9%、淀粉9%、微晶纖維素1.5%、崩解劑55.1%,m(檸檬酸)∶m(NaHCO3)為1∶0.6。所制得的泡騰片硬度適中,崩解時(shí)間快,色澤好,抗氧化活性強(qiáng)。經(jīng)質(zhì)量分析,該工藝制得的泡騰片符合藥典標(biāo)準(zhǔn),工藝穩(wěn)定可行,操作簡(jiǎn)便,適合于工業(yè)化生產(chǎn),為枸杞葉的高值化利用提供理論依據(jù)。