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烘干溫度對(duì)不同品系梔子有效成分含量的影響

2024-01-22 00:00:00曹敏劉燕琴楊小玉韓蓉蓉練瀚胡開(kāi)治
南方農(nóng)業(yè)·上旬 2024年12期
關(guān)鍵詞:高效液相色譜

摘 要 為探究烘干溫度對(duì)不同品系梔子活性成分含量的影響,采用高效液相色譜法對(duì)不同烘干溫度烘干的不同品系梔子樣品中的梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ含量進(jìn)行測(cè)定,采用Pearson相關(guān)性分析烘干溫度與梔子有效成分間的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果表明,在40~90 ℃范圍內(nèi),烘干溫度越高,烘干所需時(shí)間越短;不同烘干溫度下不同品系梔子的有效成分含量變化趨勢(shì)一致,烘干溫度與梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ含量呈極顯著負(fù)相關(guān);渝梔1號(hào)、渝梔2號(hào)、渝梔3號(hào)和混合梔子分別在烘干溫度40、40、50和40 ℃下有效成分含量最高。烘干溫度對(duì)不同品系梔子有效成分含量影響較大,不同品系梔子的最適烘干溫度存在一定差異。

關(guān)鍵詞 梔子;烘干溫度;梔子苷;西紅花苷;高效液相色譜

中圖分類(lèi)號(hào):R282.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A DOI:10.19415/j.cnki.1673-890x.2024.23.002

梔子是茜草科梔子屬植物梔子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果實(shí),主產(chǎn)于我國(guó)中南、西南片區(qū)及東南亞地區(qū)[1],具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒等功效。梔子化學(xué)成分種類(lèi)繁多,已分離鑒定到30多種,包括環(huán)烯醚萜、二萜、三萜、有機(jī)酸酯、黃酮類(lèi)[2-5]等化學(xué)成分。梔子苷(geniposide)是環(huán)烯醚萜類(lèi)的代表成分,歷版《中國(guó)藥典》均以其含量高于1.8%作為梔子的質(zhì)控指標(biāo),其活性成分地位明確[6]。西紅花苷屬于二萜類(lèi)化合物,是自然界存在的唯一水溶性胡蘿卜素,可用于補(bǔ)充人體維生素缺乏[7],具有腫瘤抑制[8]、抗動(dòng)脈粥樣硬化[9]、神經(jīng)保護(hù)[10]和肝臟保護(hù)[11]等多種生物學(xué)功能,具有巨大的藥用及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。因此,近年來(lái)許多學(xué)者也將西紅花苷含量作為評(píng)價(jià)梔子藥材品質(zhì)的重要成分之一。

中藥材產(chǎn)地初加工是藥材品質(zhì)形成的關(guān)鍵因素,決定了中藥材的質(zhì)量,科學(xué)合理的產(chǎn)地初加工方法至關(guān)重要。目前關(guān)于加工方法對(duì)梔子品質(zhì)影響的研究報(bào)道很多[12-15],均以市場(chǎng)上混雜的梔子栽培群體或市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的混合梔子樣品作為供試材料,而烘干溫度對(duì)單一品系梔子有效成分含量影響的研究還未見(jiàn)報(bào)道。本研究以團(tuán)隊(duì)優(yōu)選的不同品系梔子良種為試驗(yàn)材料,采用HPLC法測(cè)定不同溫度烘干處理的梔子中梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的含量變化規(guī)律,以期為梔子藥材產(chǎn)地初加工提供理論基礎(chǔ)和生產(chǎn)指導(dǎo)。

1" 材料與方法

1.1" 儀器及試劑

島津LC-20AT高效液相色譜儀(包括LCsoLution色譜管理處理軟件、CTO-20A柱溫箱、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器、CBM-20Alite系統(tǒng)控制器);METTLER AL104型電子天平、MoLecuLar標(biāo)準(zhǔn)智能型純水機(jī)、KQ-1000DE型數(shù)控超聲波清洗器。

水為臨用現(xiàn)制的超純水;甲醇(分析純,天津市化學(xué)試劑廠(chǎng));乙醇(分析純,天津市化學(xué)試劑廠(chǎng));乙腈(色譜純,美國(guó)Tedia公司);甲醇(色譜純,美國(guó)Tedia公司)。梔子苷對(duì)照品(批號(hào)PS010461,純度99.6%)購(gòu)自成都普思生物科技股份有限公司;西紅花苷-Ⅰ對(duì)照品(批號(hào)111588-201704,純度88.4%)、西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌罚ㄅ?hào)11589-201705,純度92.2%),均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

1.2" 供試材料

梔子樣品包括項(xiàng)目組優(yōu)選并已審定的梔子良種渝梔1號(hào)、渝梔2號(hào)、渝梔3號(hào)無(wú)性系梔子,以及有性繁殖的混雜梔子。經(jīng)重慶市藥物種植研究所胡開(kāi)治研究員鑒定原植物為梔子(Gardenia jasminoides Ellis)。

1.3" 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及樣品采集

所有梔子樣品均采自重慶市南川區(qū)三泉鎮(zhèn)梔子栽培基地(E107.2°,N29.1°),試驗(yàn)點(diǎn)為肥力適中的砂壤土,采用耕地機(jī)松土、整平。按照株行距1.3 m×1.7 m種植,各品系及混合梔子采用相同方法管理,每年人工除草2次,均不噴灑農(nóng)藥和施用化肥。

單一樣品的采集:分別隨機(jī)選取每個(gè)品系無(wú)性系植株5株,每株隨機(jī)摘取20顆梔子果實(shí),混勻作為一個(gè)樣品,3次重復(fù)?;旌蠘悠窞樵耘嗷赜行苑敝车幕祀s梔子,隨機(jī)選取5株有性繁殖的梔子植株,每株隨機(jī)采集20顆梔子果實(shí),再將果實(shí)混勻?yàn)?個(gè)樣品,3次重復(fù)。各梔子樣品均先蒸制13 min [16],再分別采用40、50、60、70、80、90 ℃烘干。烘干過(guò)程中每隔4 h稱(chēng)一次質(zhì)量,同時(shí)記錄各溫度下梔子烘干所需時(shí)間。烘干后,全部粉碎、混勻,過(guò)4號(hào)篩,稱(chēng)樣檢測(cè)梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ含量,每個(gè)樣品稱(chēng)取3個(gè)重復(fù),最后取平均值。

1.4" 各品系梔子樣品農(nóng)藝性狀測(cè)定與描述

樣品采集后立即進(jìn)行外觀(guān)形態(tài)特征描述,測(cè)定鮮質(zhì)量和果實(shí)大小。

1.5" 指標(biāo)成分檢測(cè)方法學(xué)考察及樣品測(cè)定

1.5.1" 色譜條件

梔子苷:色譜柱Diamonsi LC18 (4.6 mm×250 mm,5 μm) ;流動(dòng)相乙腈-水 (15∶85) ;柱溫30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm;流速1. 0 mL·min-1,進(jìn)樣量5 μL。

西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ:色譜柱Diamonsi LC18 (4.6 mm×250 mm,5 μm) ;流動(dòng)相甲醇(色譜純)-水(45︰55) ;柱溫30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)440 nm;流速1. 0 mL·min-1,進(jìn)樣量10 μL。

1.5.2" 對(duì)照品及供試品溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取梔子苷和西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌愤m量,用甲醇(分析純)溶解并定容,制得梔子苷質(zhì)量濃度分別為0.404 g·L-1、0.189 g·L-1及西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ質(zhì)量濃度分別為0.205 g·L-1、0.05 g·L-1的對(duì)照品溶液。

梔子苷供試品溶液的制備:取樣品粉末0.1 g,精密稱(chēng)量,置具塞錐形瓶中,加入73%甲醇(分析純)15 mL,稱(chēng)定質(zhì)量,超聲處理30 min,待錐形瓶外表面干燥后,再稱(chēng)定質(zhì)量,用73%甲醇補(bǔ)足失重,搖勻,過(guò)濾,取續(xù)濾液,即得。

西紅花苷-Ⅰ及西紅花苷-Ⅱ供試品溶液的制備:取樣品粉末0.1 g,精密稱(chēng)量,置具塞錐形瓶中,加入40%乙醇35 mL,稱(chēng)定質(zhì)量,超聲處理20 min,待錐形瓶外表面干燥后,再稱(chēng)定質(zhì)量,用40%乙醇補(bǔ)足失重,搖勻,過(guò)濾,取續(xù)濾液,即得。

1.5.3" 線(xiàn)性關(guān)系考察

分別精密吸取不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液10 μL,在1.5.1條件下測(cè)定,以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),進(jìn)行回歸,得梔子苷、西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ的回歸方程分別為Y=1 393 826.904 1X-424 051.082 2(r=0.998 1);Y=6 427 572.142 9X +6 713.019 0(r=0.999 8);Y=7 517 001.428 6X-13 160.171 4(r = 0.999 6)。表明梔子苷、西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ分別在30~330、4~44、2~22 μg·mL-1范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。色譜圖見(jiàn)圖1。

1.5.4" 精密度試驗(yàn)

分別吸取梔子苷對(duì)照品5 μL,西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的混合對(duì)照品10 μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積。梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的峰面積RSD分別為0.21%、1.18%和0.74%,表明儀器精密度良好。

1.5.5" 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)定同一樣品,按1.5.2制備供試品溶液6份。梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ樣品按1.5.1的色譜條件進(jìn)樣檢測(cè),記錄峰面積,梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的含量RSD分別為1.54%、1.20%和1.73%,表明該方法重復(fù)性良好。

1.5.6" 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別取梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ供試品溶液1份,在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)行檢測(cè),記錄峰面積。梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的峰面積RSD分別為0.74%、0.39%和0.40%。表明三者供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.5.7" 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ含量的梔子樣品0.05 g,共6份。根據(jù)其含量,分別等量加入梔子苷對(duì)照品0.404 mg,西紅花苷-Ⅰ對(duì)照品0.615 mg和西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌?.120 mg,在1.5.1色譜條件下進(jìn)行檢測(cè),測(cè)得梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的平均回收率分別為98.95%、99.92%、99.44%;RSD分別為1.02%、1.12%和1.33%。

1.5.8" 樣品含量測(cè)定

取各供試梔子樣品的供試品溶液,按1.5.1項(xiàng)條件進(jìn)行檢測(cè),梔子苷檢測(cè)進(jìn)樣5 μL,西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ檢測(cè)進(jìn)樣10 μL,測(cè)定相應(yīng)的峰面積,計(jì)算含量。

1.6" 數(shù)據(jù)處理

采用IBM SPSS Statistics 21軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析和顯著性比較;采用LSD法在p<0.05水平上進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn),并利用Excel繪圖。

2" 結(jié)果與分析

2.1" 各品系梔子樣品農(nóng)藝特征描述

經(jīng)檢測(cè),各品系梔子鮮樣品形態(tài)特征存在一定差異,具體描述見(jiàn)表1。渝梔1號(hào)鮮果為橢圓形、橙黃色,渝梔2號(hào)、渝梔3號(hào)為卵圓形、橙紅色。平均縱、橫徑和單果質(zhì)量趨勢(shì)一致,由大到小分別為渝梔3號(hào)>渝梔2號(hào)>渝梔1號(hào)。

2.2" 烘干溫度對(duì)梔子烘干時(shí)間的影響

如圖2所示,各品系及混合梔子樣品烘干溫度與烘干所需時(shí)間變化趨勢(shì)基本一致。烘干時(shí)間與烘干溫度呈負(fù)相關(guān),在40~90 ℃范圍內(nèi)烘干溫度越高,烘干所需時(shí)間越短。渝梔1號(hào)、渝梔2號(hào)和混合梔子在40 ℃和50 ℃下烘干時(shí)間變化平緩,差異不大,而渝梔3號(hào)則差異較大。當(dāng)烘干溫度由50 ℃逐漸升至90 ℃時(shí),各樣品烘干所需時(shí)間急劇減少。

2.3" 烘干溫度對(duì)不同品系梔子的梔子苷含量影響

不同干燥溫度下不同品系梔子中梔子苷含量見(jiàn)圖3。結(jié)果顯示,試驗(yàn)所用梔子品系渝梔1號(hào)、渝梔2號(hào)、渝梔3號(hào)及混合梔子樣品的梔子苷含量均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)(>1.8%),不同品系梔子在不同的干燥溫度下其梔子苷含量差異顯著;不同品系梔子的梔子苷含量最高時(shí)烘干溫度不同,品系渝梔1號(hào)、渝梔2號(hào)、渝梔3號(hào)和混合梔子分別在烘干溫度40、40、50和40 ℃下烘干的梔子苷含量最高。

2.4" 烘干溫度對(duì)不同品系梔子西紅花苷-Ⅰ含量的影響

不同干燥溫度下不同品系梔子中西紅花苷-Ⅰ含量見(jiàn)圖4。結(jié)果顯示,不同品系梔子在不同的干燥溫度下其西紅花苷-Ⅰ含量差異顯著;品系渝梔1號(hào)、渝梔2號(hào)、渝梔3號(hào)和混合梔子分別在烘干溫度40、40、50和40 ℃下烘干西紅花苷-Ⅰ含量最高。隨著烘干溫度升高,西紅花苷-Ⅰ含量呈總體下降趨勢(shì)。說(shuō)明高溫烘干可能會(huì)導(dǎo)致西紅花苷-Ⅰ揮發(fā)或降解。

2.5" 烘干溫度對(duì)不同品系梔子西紅花苷-Ⅱ含量的影響

不同干燥溫度下不同品系梔子中西紅花苷-Ⅱ含量見(jiàn)圖5。結(jié)果顯示,與西紅花苷-Ⅰ含量變化趨勢(shì)一致,不同品系梔子在不同干燥溫度下其西紅花苷-Ⅱ含量差異顯著;品系渝梔1號(hào)、渝梔2號(hào)、渝梔3號(hào)和混合梔子分別在溫度40、40、50和40 ℃下烘干,西紅花苷-Ⅱ含量最高。隨著烘干溫度升高,西紅花苷-Ⅱ含量總體呈下降趨勢(shì)。說(shuō)明高溫烘干可能會(huì)導(dǎo)致西紅花苷-Ⅱ揮發(fā)或降解。

2.6" 烘干溫度與梔子有效成分的相關(guān)性分析

利用IBM SPSS Statistics 21軟件對(duì)烘干溫度與梔子有效成分含量做Pearson相關(guān)性分析,結(jié)果見(jiàn)表2。除渝梔2號(hào)的梔子苷含量與烘干溫度無(wú)顯著相關(guān)關(guān)系外,其余梔子樣品的梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ含量與烘干溫度均呈極顯著負(fù)相關(guān)(p<0.01)。

3" 討論與結(jié)論

3.1" 討論

梔子苷和西紅花苷是梔子的主要活性成分,其含量的高低直接影響梔子藥材品質(zhì)。梔子產(chǎn)地初加工的主要目的是迅速脫水、殺酶保苷。前人研究表明,蒸制13 min是最佳的前處理方式[16]。本研究采用該方法進(jìn)行殺酶處理,再研究烘干溫度對(duì)梔子有效成分含量的影響。結(jié)果表明,烘干溫度對(duì)梔子有效成分影響較大,不同品系梔子的最適烘干溫度存在差異。因此,在進(jìn)行梔子品系間品質(zhì)比較時(shí)應(yīng)先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn),確定各品系梔子的最適烘干溫度,再進(jìn)行各成分含量比較。

近年來(lái)關(guān)于梔子產(chǎn)地初加工方法的研究偶有報(bào)道,大多是關(guān)于混雜梔子炮制和干燥方法的研究[16-18],對(duì)單一品系梔子進(jìn)行研究的報(bào)道鮮見(jiàn)。中藥材在干燥過(guò)程中受溫度影響極易引起外觀(guān)性狀和有效成分的轉(zhuǎn)變,直接影響到中藥材的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[19]。本研究首次以團(tuán)隊(duì)優(yōu)選出的優(yōu)良單一品系梔子為樣品,探索烘干溫度對(duì)不同品系梔子有效成分的影響,發(fā)現(xiàn)各樣品的梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ含量與烘干溫度均呈極顯著負(fù)相關(guān)(p<0.01);不同品系梔子的最適烘干溫度存在一定的差異。其中渝梔1號(hào)、渝梔2號(hào)和混合梔子樣品的最適烘干溫度為40 ℃,這與《中國(guó)藥典》的規(guī)定一致;而渝梔3號(hào)則在50 ℃烘干時(shí)有效成分含量最高。各品系梔子樣品的最適烘干溫度不同與焦燕翔等報(bào)道的梔子果實(shí)的形態(tài)和大小與果內(nèi)活性成分含量間存在顯著差異的結(jié)論一致[20]。結(jié)合本次研究梔子樣品的外觀(guān)形態(tài)特征來(lái)看,可能是由于渝梔3號(hào)比渝梔1號(hào)和渝梔2號(hào)的縱、橫徑和鮮質(zhì)量都大得多,40 ℃烘干時(shí),渝梔3號(hào)比另外3個(gè)樣品需要更多的時(shí)間才能烘干,增加了渝梔3號(hào)梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的揮發(fā)或降解,從而降低了有效成分含量。而渝梔1號(hào)和渝梔2號(hào)及混合梔子樣品在40 ℃和50 ℃下烘干所需時(shí)間差異不大,因此,與在50 ℃下烘干相比,40 ℃下烘干的梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的揮發(fā)量更少。本研究結(jié)果可為梔子的產(chǎn)地初加工提供一定參考。

3.2" 結(jié)論

烘干溫度對(duì)不同品系梔子有效成分含量影響較大,烘干溫度與各品系梔子有效成分呈極顯著負(fù)相關(guān)。不同品系梔子的最適烘干溫度存在一定差異,渝梔1號(hào)、渝梔2號(hào)及混合梔子的最適烘干溫度為40 ℃,而渝梔3號(hào)在50 ℃下烘干的有效成分含量最高。

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(責(zé)任編輯:敬廷桃)

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