超聲彈性成像評分法聯合Ki67診斷三陰性乳腺癌的臨床研究

吳佳慧,黃雪蘭

(佳木斯大學附屬第一醫院 物理診斷科,黑龍江 佳木斯150000)

我國女性乳腺癌發病率占女性惡性腫瘤的17.1%,位居第一位[1],其病理學特征決定臨床治療方向和預后[2]。三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)約占所有乳腺癌的15%～20%,較其他亞型更容易發生轉移,預后更差[3-4]。超聲彈性成像技術是近年來廣泛使用的用來探測腫塊硬度鑒別良性惡性的新技術,Ki67蛋白是一種半衰期短的非組蛋白核蛋白,目前是檢測腫瘤細胞增殖活性可靠的指標之一。本研究通過研究TNBC的超聲彈性成像評分和Ki67的表達,分析超聲彈性評分、Ki67與TNBC臨床特征的相關性及聯合應用的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年10月至2021年10月住院的150名乳腺癌患者作為研究對象,年齡23～67歲,平均年齡(45.67±5.95)歲。病灶大小7～37 mm,平均病灶大小為(15.23±2.74)mm。病理分型:浸潤性導管癌114例,導管內癌15例,浸潤性小葉癌14例,其他7例;組織學分級:1級22例,2級81例,3級47例;腋窩淋巴結轉移71例,未發生轉移79例;腫瘤直徑:≤2 cm 88例,2～5 cm 60例,>5 cm 2例。納入標準:均經病理學金標準確定為乳腺癌;術前完成超聲彈性成像檢查;一側乳腺單發病灶并全身檢查無遠處轉移病灶;女性。排除標準:合并糖尿病、高血壓等全身系統性疾病或者有肝腎等大器官衰竭者;分子分型不明確者;術前進行放化療,靶向治療及內分泌治療者;合并其他惡性腫瘤;處于妊娠期、哺乳期或者乳腺內有假體以及病灶緊鄰部位有瘢痕者;病理標本或資料不完整者。

分子分型標準:根據《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范(2021版)》[5]進行分子分型,具體分為4個類型:Luminal A 型[雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(progestogen receptor,PR)陽性且PR高表達,人表皮生長因子受體-2(Human Epidermal GrowthFactor Receptor 2,HER2)陰性,Ki-67增殖指數低]、Luminal B 型(不滿足 Luminal A 型條件的Luminal 樣腫瘤)、ERBB2+型(HER2 陽性,ER、PR 陰性)、Basal-like型(ER、PR、HER2均是陰性)。其中Basal-like型患者65例納入TNBC組,其他類型患者納入非TNBC組。

1.2 研究方法

1.2.1超聲彈性成像 采用美國飛利浦產超聲診斷儀(飛利浦EPIQ 7),線陣探頭,頻率為8～13 MHZ。患者暴露雙側乳房及腋窩,仰臥位待檢查。先進行常規超聲檢查,觀察并記錄乳腺腫塊大體位置,形態、大小、邊緣、微鈣化、毛刺征、腋窩淋巴結等;再行彩色多普勒檢查,檢測病灶內血流情況;按照Adler半定量分級法評估血供情況;行超聲彈性成像檢查,選擇病灶周圍及周圍正常組織為感興趣區(region of interest,ROI),確定ROI區后調整取樣框大小為病灶范圍的兩倍,用探頭垂直于患者體表進行加壓解壓操作,將壓力與壓放頻率的綜合指標控制在3～4之間,獲得較穩定的彈性圖像采用 5分法進行彈性評分。

血流分級標準:病灶內無血流信號為0級,1～2處點狀血流為Ⅰ級;可見1條主要血管,長度超過病灶半徑或見幾條小血管為Ⅱ級;可見4條以上血管或血管相互連通,交織成網狀為Ⅲ級。

評分標準:患者病灶及周圍呈現均勻的綠色為1分;病灶區藍綠相間,以綠色為主為2分;病灶區藍綠相間,以藍色為主為3分;病灶區完全為藍色為4分;病灶區完全為藍色,并且病灶區周圍少許組織也為藍色為5分。病灶表現為紅綠藍三色相間的為0分,一般為囊性病灶。0～3分為良性病灶,4～5分為惡性病灶。

1.2.2Ki67表達檢測方法 采用免疫組織化學法檢測Ki67表達,檢測試劑盒購自德國羅氏公司。所用的抗體購自美國Santa公司;二氨基聯苯胺(diaminobenzidine,DAB)顯色液購自上海雅吉生物科技公司。所有乳腺癌組織切除后迅速放于福爾馬林溶液中浸泡,然后用常規石蠟包埋。石蠟切片脫蠟,室溫孵育蒸餾水沖洗、PBS沖洗。用山羊血清封閉后室溫孵育10 min。加兔抗Ki67抗體、37℃孵育2小時;PBS沖洗后滴加生物素標記的山羊抗兔IgG工作液后室溫孵育;再進行PBS沖洗滴加辣根過氧化物酶標記的鏈親和素工作液,室溫孵育,PBS再次沖洗。DAB顯色。用自來水反復沖洗、復染、脫水、透明、封片。檢測乳腺癌組織中的Ki67表達情況。判斷標準:Ki67陽性細胞為細胞核著色為棕黃色或棕褐色,陽性細胞采用半定量測定,陽性率=陽性細胞數/癌細胞數×100%。弱陽性(+)為≤14%,陽性(++)為14%～50%,強陽性(+++)為>50%。

1.3 統計學方法

采用統計學軟件SPSS22.0進行數據分析,先對計量資料行正態分布和方差齊性檢驗。本組數據均符合正態分布,以均數±標準差表示。兩組間比較行獨立樣本t檢驗。計數資料用率(%)表示,組間比較用χ2表示。采用ROC曲線分析各個指標對TNBC的診斷學價值,并篩選出有診斷學價值者,采用多因素回歸法計算其聯合預測概率,分析指標聯用的最佳敏感度和特異度,以P<0.05為有差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者臨床病理學特征比較

兩組患者年齡、絕經狀態、腫瘤大小、TNM分期、組織學分級、病理分類比較差異均無統計學意義(P>0.05),見表1。

表1 兩組患者臨床病理學特征比較

2.2 兩組患者常規超聲及彈性成像的圖像特征

TNBC組邊界清晰、形態規則及腋窩淋巴結轉移的患者比例大于非TNBC組,微鈣化比例小于非TNBC組,差異有統計學意義(P<0.05);TNBC組超聲彈性評分高于非TNBC組,差異有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 兩組患者超聲圖像特征比較[例(%)]

2.3 Ki67在兩組患者乳腺癌組織中的表達

TNBC組患者Ki67陰性、弱陽性、陽性、強陽性表達為7例、10例、25例、23例;非TNBC組患者Ki67陰性、弱陽性、陽性、強陽性表達為17例、36例、22例、10例,兩組比較差異有統計學意義(P<0.05),見表3。

表3 兩組患者Ki67表達情況表

2.4 超聲彈性成像聯合Ki67的鑒別診斷效能

將邊界清晰(清晰=1,不清晰=0)、形態規則(形態=1,無形態=0)、微鈣化(是=1,否=0)、腋窩淋巴結轉移(是=1,否=0)、超聲彈性評分及Ki67表達分級作為自變量,是否發生TNBC(是=1,否=0)作為因變量,分析TNBC的因素,結果顯示腋窩淋巴結轉移、超聲彈性評分和Ki67表達分級為發生TNBC的獨立危險因素(Exp(B)>1.0,P<0.05)。詳見表4。ROC分析結果顯示,3項獨立危險因素中,對TNBC存在診斷學價值的主要是超聲彈性評分和Ki67,兩者聯合診斷TNBC的最佳敏感度和特異度分別為0.835和0.524,見圖1。

圖1 淋巴結轉移、超聲彈性評分和Ki67表達診斷TNBC的ROC曲線分析

表4 TNBC的危險因素分析結果

3 討論

目前彈性成像評分法應用于臨床診斷三陰性乳腺癌,具有無創便捷重復性強的特點[6]。機體內組織的彈性和硬度與機體的病理狀態有關,當機體發生病變時,腫塊的彈性和硬度與正常組織區別較大,應用彈性成像技術可以對組織的彈性進行分析。外力擠壓機體會發生變形,引起回聲信號移動幅度發生變化,通過彩色圖像中顏色的不同變化反映出來。彈性系數不同,引起的位移幅度不一樣,顏色也不一樣。彈性成像評分法分為五個等級,1～3分多為良性,4～5分多為惡性,有助于臨床更加準確的診斷患者腫塊性質。同時觀察患者彩色圖像血流情況也可以輔助診斷病變程度,病變程度越高,血流越豐富,惡性腫瘤內有大量新生的毛細血管會增加血液循環速度。然而,超聲彈性評分的精確度受操作醫師個人主觀情況影響較大,依靠一種方式來鑒別TNBC容易出現假陽性或假陰性,因此需要綜合運用其他不受主觀影響的指標來配合診斷,以提高準確度。本研究中,TNBC組邊界清晰、形態規則及腋窩淋巴結轉移的患者比例大于非TNBC組,彈性評分4-5分的比例也大于非TNBC組,微鈣化比例小于非TNBC組,說明TNBC與非TNBC在超聲檢查時有明顯差異,可作為診斷鑒別的一項依據。

乳腺癌發生必定會引起炎性因子改變和基因表達異常,進一步促進癌細胞增殖[7-9]。Ki67是反映癌細胞表達和增殖的惡性程度的指標,具有較高靈敏度,可準確反映增殖狀態[10]。癌細胞增殖使腫瘤組織不斷向周圍組織擴散侵襲,并且會導致腫瘤組織硬度增加[11]。白玲嬌[12]等研究發現乳腺組織中 Ki67抗原表達與超聲彈性成像評分有關,也側面證實了可以將兩種診斷方法配合應用。Ki67表達越高,腫瘤惡化程度越高,病情越兇險。本研究中,TNBC組陽性表達率為89.23%,大于非TNBC組的70.59%,與陳莉杰[13]闡述的Ki67表達越高生存率越低的研究相符。本研究對TNBC和非TNBC患者的分析結果顯示,腋窩淋巴結轉移、超聲彈性評分和Ki67表達分級為發生TNBC的獨立危險因素,其中超聲彈性評分和Ki67具有明顯診斷學價值,兩者診斷TNBC的最佳敏感度和特異度分別為0.776和0.705。

綜上所述,超聲彈性成像評分聯合Ki67能夠較為準確的對TNBC進行診斷,可以用其作為評價三陰性乳腺癌的發生發展的重要參考指標。