DNA無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)及彩色多普勒超聲檢查在高危孕婦胎兒染色體異常篩查中的應(yīng)用價(jià)值

成 艷,馬 雯,權(quán)秋寧,于 青,杜小云

寶雞市婦幼保健院遺傳室,陜西寶雞 721000

胎兒出生缺陷、畸形多與染色體異常有關(guān),目前對(duì)染色體異常尚無(wú)有效的治療手段,產(chǎn)前篩查是診斷識(shí)別胎兒染色體異常的有效方式[1]。羊水細(xì)胞染色體核型分析是產(chǎn)前診斷胎兒染色體異常的金標(biāo)準(zhǔn),但羊水穿刺是有創(chuàng)操作,會(huì)導(dǎo)致0.2%～2.0%的孕婦流產(chǎn)、早產(chǎn)[2-3]。而傳統(tǒng)血清學(xué)篩查存在假陽(yáng)性、假陰性檢出情況,在診斷產(chǎn)前胎兒染色體異常方面存在漏診、誤診風(fēng)險(xiǎn)[4]。隨著超聲檢查技術(shù)與無(wú)創(chuàng)診斷技術(shù)的發(fā)展,超聲檢查可檢出胎兒微小的結(jié)構(gòu)異常,是目前臨床常用的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查方式,而DNA無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)(NIPT)是一項(xiàng)檢測(cè)胎兒非整倍染色體疾病的無(wú)創(chuàng)技術(shù),在臨床上已得到廣泛應(yīng)用,但針對(duì)無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)陽(yáng)性診斷情況能否完全取代介入性產(chǎn)前檢測(cè)還需進(jìn)一步研究[5]?；诖?本研究探討NIPT及彩色多普勒超聲(簡(jiǎn)稱彩超)檢查在高危孕婦胎兒染色體異常篩查中的應(yīng)用價(jià)值,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月至2022年12月于本院接受產(chǎn)前檢查的5 862例高危孕婦作為研究對(duì)象,高危孕婦主要包括高齡(35歲以上)、血清學(xué)篩查高風(fēng)險(xiǎn)、不良孕產(chǎn)史、超聲檢查提示胎兒結(jié)構(gòu)異常、NIPT高風(fēng)險(xiǎn)、父母一方染色體異常等。年齡20～45歲,平均(32.41±4.78)歲;孕周12～27周,平均(19.14±2.37)周。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)均接受NIPT、彩超檢查;(2)均為單胎妊娠。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)孕婦1年內(nèi)接受過異體輸血者;(2)自身染色體異常者;(3)既往接受過移植術(shù)、干細(xì)胞治療者;(4)孕4周內(nèi)接受過免疫治療者;(5)伴有妊娠期高血壓、糖尿病者;(6)羊膜腔穿刺術(shù)禁忌證者;(7)合并惡性腫瘤者。所有研究對(duì)象均知情同意并簽署知情同意書。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(2024-003)。

1.2方法 彩超檢查:采用彩色多普勒超聲診斷儀,頻率1.6～4.5 MHz,設(shè)11～13+4周胎兒相關(guān)超聲檢查,產(chǎn)婦排光膀胱,取仰臥位,根據(jù)國(guó)際產(chǎn)婦超聲協(xié)會(huì)制定的相關(guān)指南[6]嚴(yán)格操作,采集圖像、分析,由2名資深產(chǎn)前篩查醫(yī)生進(jìn)行圖像質(zhì)量控制,若因腹壁較厚等造成腹部圖像質(zhì)量欠佳,則行陰道超聲檢查,頻率5～9 MHz。測(cè)量包括胎盤厚度、胎心率、胎兒頭臂長(zhǎng)等相關(guān)指標(biāo),并對(duì)胎兒心臟、顱腦、四肢、腹腔等相關(guān)部位進(jìn)行觀察。彩超檢查判斷胎兒染色體異常標(biāo)準(zhǔn),包括彩超檢查顯示胎兒結(jié)構(gòu)異常、軟指標(biāo)異常及其他與染色體異常相關(guān)的指標(biāo)。NIPT:產(chǎn)婦完成彩超檢查后,均采集外周靜脈血5 mL,置于4 ℃條件下以3 000 r/min離心10 min,分離血漿提取游離DNA,保存于-20 ℃冰箱待檢。設(shè)計(jì)引物序列DYSI4F:5′-GGGCCAATGTTGTATCCTTCTC-3′;設(shè)計(jì)引物序列DYSI4R:5′-GCCCATCGGTCACTTACACTTC-3′;探針序列:5β-(FAM)TCTAGTGGAGAGGTGCTC(TAMRA)-3′。PCR擴(kuò)增提取DNA溶液,獲得對(duì)應(yīng)標(biāo)本的DNA文庫(kù),采用高通量檢測(cè)技術(shù)測(cè)序,進(jìn)行生物學(xué)信息分析。計(jì)算測(cè)試標(biāo)本序列與人類基因參考序列比例之差,除以待測(cè)染色體的方差,得到Z值,當(dāng)Z值>3時(shí)為異常。染色體異常診斷標(biāo)準(zhǔn):彩超檢查引導(dǎo)定位下無(wú)菌操作,羊膜腔穿刺抽取2～5 mL羊水丟棄,再抽取20 mL羊水,立即送檢進(jìn)行羊水細(xì)胞培養(yǎng),在細(xì)胞分裂中期,制片、染色處理,進(jìn)行計(jì)數(shù)、核型分析。將接受羊水穿刺染色體檢查孕婦的染色體核型分析結(jié)果作為異常診斷金標(biāo)準(zhǔn),將不接受羊水穿刺染色體檢查的孕婦,以分娩結(jié)局(新生兒娩出后兒科醫(yī)生檢查結(jié)果)作為異常診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。兒科檢查:兒科醫(yī)生根據(jù)新生兒臨床癥狀和體征做初步篩查,結(jié)合染色體檢查加以診斷。

2 結(jié) 果

2.1胎兒染色體異常檢出情況 5 862例高危孕婦中共檢出167例胎兒染色體異常,檢出率為2.85%。167例胎兒染色體異常中羊水穿刺檢出143例,分娩后染色體異常檢出24例。167例胎兒染色體異常中胎兒染色體數(shù)目異常161例,構(gòu)成比為96.41%,其中13-三體15例(9.32%),18-三體29例(18.01%),21-三體88例(54.66%),性染色體數(shù)異常29例(18.01%);胎兒染色體結(jié)構(gòu)異常6例,構(gòu)成比為3.59%,其中缺失2例(33.33%),重復(fù)1例(16.67%),其他3例(50.00%)。

2.2彩超檢查診斷胎兒染色體異常的效能 167例胎兒染色體異常中彩超檢查共診斷出119例孕婦胎兒染色體異常,構(gòu)成比為71.26%。經(jīng)一致性分析,彩超檢查診斷胎兒染色體異常的靈敏度為0.713,特異度為0.884,準(zhǔn)確率為87.96%,Kappa=0.215,P<0.05。見表1。

表1 彩超檢查診斷胎兒染色體異常的效能(n)

2.3NIPT診斷胎兒染色體異常的效能 167例胎兒染色體異常中NIPT共診斷出133例孕婦胎兒染色體異常,構(gòu)成比為79.64%。經(jīng)一致性分析,NIPT診斷胎兒染色體異常的靈敏度為0.796,特異度為0.945,準(zhǔn)確率為94.05%,Kappa=0.408,P<0.05。見表2。

表2 NIPT診斷胎兒染色體異常的效能(n)

2.4彩超檢查聯(lián)合NIPT診斷胎兒染色體異常的效能 167例胎兒染色體異常中彩超檢查聯(lián)合NIPT共診斷出158例孕婦胎兒染色體異常,構(gòu)成比為94.61%。經(jīng)一致性分析,彩超檢查聯(lián)合NIPT診斷胎兒染色體異常的靈敏度為0.946,特異度為0.986,準(zhǔn)確率為98.50%,Kappa=0.775,P<0.05。見表3。

表3 彩超檢查聯(lián)合NIPT診斷胎兒染色體異常的效能(n)

3 討 論

胎兒染色體異常是新生兒缺陷性疾病的常見原因,早發(fā)現(xiàn)和早診斷有利于臨床醫(yī)生建立最佳決策[7]。隨著超聲檢查技術(shù)的發(fā)展,孕早期超聲檢查可對(duì)胎兒細(xì)致情況進(jìn)行篩查,不僅可篩查出絕大多數(shù)畸形,還可指導(dǎo)孕婦進(jìn)一步篩查染色體是否異常,是目前臨床常用的產(chǎn)前無(wú)創(chuàng)影像學(xué)檢查技術(shù)[8]。NIPT是一項(xiàng)新興的無(wú)創(chuàng)檢測(cè)技術(shù),對(duì)胎兒本身沒有傷害,孕早、中、晚期均可在孕婦外周血中發(fā)現(xiàn)胎兒有核紅細(xì)胞,適用范圍較廣,是當(dāng)今臨床研究熱點(diǎn)[7]。因此,本研究分析彩超檢查聯(lián)合NIPT在高危孕婦胎兒染色體異常篩查中的應(yīng)用價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示,5 862例高危孕婦中共檢出167例胎兒染色體異常,檢出率為2.85%,與文獻(xiàn)[9]報(bào)道結(jié)果相似。167例胎兒染色體異常中檢出胎兒染色體數(shù)目異常161例,構(gòu)成比為96.41%,說(shuō)明染色體數(shù)目異常是胎兒高發(fā)染色體疾病。本研究中,產(chǎn)前彩超檢查胎兒染色體異常構(gòu)成比為71.26%,經(jīng)一致性分析,彩超檢查診斷胎兒染色體異常的靈敏度為0.713,特異度為0.884,準(zhǔn)確率為87.96%。胎兒染色體異?？梢鹛浩鞴?、肢體畸形,產(chǎn)前超聲檢查是發(fā)現(xiàn)胎兒畸形的主要手段之一[10-11]。另有研究表明,多項(xiàng)超聲檢查軟指標(biāo)異常可作為判斷胎兒染色體異常的重要參考指標(biāo),其中頸后半透明組織厚度(NT)增厚、鼻骨缺失與染色體異常,尤其是21-三體綜合征關(guān)系密切[12-13]。有研究發(fā)現(xiàn),利用NT增厚篩查21-三體綜合征靈敏度為80.0%,假陽(yáng)性率為5.0%,利用靜脈導(dǎo)管a波異常聯(lián)合NT增厚篩查染色體非整倍異常的靈敏度為93.5%[14]。提示孕早期超聲篩查不僅對(duì)嚴(yán)重結(jié)構(gòu)異常有較好的臨床價(jià)值,對(duì)懷疑是胎兒染色體異常也能及早發(fā)現(xiàn),并且能及時(shí)建議孕婦進(jìn)行進(jìn)一步檢查確診。

本研究結(jié)果顯示,NIPT共診斷出133例孕婦胎兒染色體異常,構(gòu)成比為79.64%。經(jīng)一致性分析,NIPT診斷胎兒染色體異常的靈敏度為0.796,特異度為0.945,準(zhǔn)確率為94.05%。NIPT是通過提取孕婦外周靜脈血,利用高通量基因檢測(cè)技術(shù)等對(duì)胎兒非整倍染色體疾病進(jìn)行判斷,準(zhǔn)確率高達(dá)99.99%,相對(duì)于傳統(tǒng)血清篩查,有更高的準(zhǔn)確率及極低的假陽(yáng)性率,被廣泛應(yīng)用于臨床中[15]。另外,盡管NIPT的靈敏度高于傳統(tǒng)血清學(xué)篩查,但由于是非直接獲取胎兒遺傳物質(zhì),仍存在假陽(yáng)性、假陰性的風(fēng)險(xiǎn),因而NIPT結(jié)果提示高風(fēng)險(xiǎn),仍需通過進(jìn)一步產(chǎn)前檢查確診。產(chǎn)前常見遺傳病為21-三體、13-三體、18-三體等綜合征,有研究顯示,在高危孕婦羊水細(xì)胞中染色體異常檢出率為2.80%～5.80%[3,16]。本研究發(fā)現(xiàn),產(chǎn)前彩超檢查診斷胎兒染色體異常效能低于NIPT,而二者聯(lián)合檢查診斷胎兒染色體異常的靈敏度為0.946,特異度為0.986,準(zhǔn)確率為98.50%,二者聯(lián)合檢查與介入性產(chǎn)前檢測(cè)有較高的一致性(Kappa=0.775),提示臨床可通過無(wú)創(chuàng)聯(lián)合檢測(cè)替代有創(chuàng)檢測(cè),從而在保障檢測(cè)準(zhǔn)確性的前提下提高產(chǎn)前檢測(cè)的安全性,對(duì)高危孕婦胎兒染色體異常篩查具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值,與盛娟[17]的研究結(jié)果相符。產(chǎn)前超聲檢查雖然能夠顯示胎兒嚴(yán)重的結(jié)構(gòu)異常,但其自身也存在局限性,尤其是對(duì)21-三體綜合征胎兒,超聲檢查缺乏特異性表現(xiàn),對(duì)其結(jié)構(gòu)異常未必可見,因此,對(duì)于染色體異常的篩查還需NIPT輔助[18]。而NIPT對(duì)染色體異常篩查雖有一定優(yōu)勢(shì),可避免產(chǎn)前有創(chuàng)檢查引起的宮內(nèi)感染、流產(chǎn)等不良事件,但也存在局限性,對(duì)多胎妊娠、孕婦自身染色體異常者不適用,并且外周血胎兒游離DNA的因素均可影響結(jié)果[19]。因此,NIPT雖可篩查一部分染色體異常,但對(duì)超聲檢查異常,尤其是超聲檢查軟指標(biāo)異常者,應(yīng)進(jìn)行羊水穿刺確診,對(duì)肥胖、高齡、人工受孕、雙胎、伴有惡性腫瘤的孕婦,即使超聲檢查與NIPT未見異常,也建議孕中期進(jìn)行羊水細(xì)胞染色體核型分析[20]。

綜上所述,彩超檢查與NIPT在診斷高危孕婦胎兒染色體異常方面均有一定的應(yīng)用價(jià)值,但也均具有一定的局限性,二者聯(lián)合檢查可獲得更高的靈敏度、特異度,能有效降低漏診、誤診風(fēng)險(xiǎn),提高臨床診斷的準(zhǔn)確率,值得臨床推廣使用。