抗-Ce、抗-Jka伴抗-Wra抗體聯合檢測致交叉配血困難原因分析*

陳敏潔,楊紅梅,張建偉△

1.江蘇省常州市中心血站,江蘇常州 213000;2.江蘇省常州市臨床輸血重點專科實驗室,江蘇常州 213000

不規則抗體是導致臨床交叉配血不合的主要原因。不規則抗體是指不符合ABO血型系統Landsteiner法則的抗體,包括非ABO血型系統抗體和ABO亞型抗體[1]。引起臨床困難配血最主要的抗體是Rh血型系統不規則抗體,該系統抗體可單獨存在,也可聯合其他抗體存在,尤其是多次輸血患者可能會產生多種不規則抗體,導致鑒定抗體特異性困難。本實驗室在工作中發現1例抗-Ce、抗-Jka和抗-Wra抗體聯合檢測致交叉配血不合,現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者,女,53歲,臨床以消化道出血、紅斑狼瘡、腎功能不全及重度貧血入院,血紅蛋白39 g/L,既往有多次輸血史,有妊娠史,抗體篩查陽性,特配懸浮少白紅細胞4 U,送至本實驗室進行相關檢測。

1.2試劑與儀器 抗-A/B單克隆抗體、抗-C(IgM)抗體、抗-c(IgM)抗體、抗-E(IgM)抗體、抗-e(IgM)抗體、ABO血型反定型紅細胞(上海血液生物醫藥有限責任公司,批號:20201221、20201221、20203002、20203102、20203202、20203301、20225309);多抗試劑、抗-IgG和抗-C3d試劑(上海血液生物醫藥有限責任公司,批號:20205001、20205101、20215201);進口抗篩細胞、進口譜細胞(匈牙REAGENS公司,批號:702205、732205);Sanquin譜細胞(上海起發實驗試劑有限公司,批號:8000455637);Anti-Jka、Anti-Jkb(德國CE公司,批號:OJkaM208-1、OJkbM133-2);抗人球蛋白檢測卡(上海潤普生物技術有限公司,批號:10210801);抗人球蛋白檢測卡(長春博迅生物技術有限責任公司,批號:20210307);酸放散試劑(上海申型醫學科技有限公司,批號:20202101);聚凝胺試劑(珠海貝索生物技術有限公司,批號:A210701)。久保田KA-2200血清學專用離心機;珠海貝索生物技術有限公司2020-2低速離心機;上海鉑溫儀器有限公司37 ℃恒溫水浴箱;長春博研科學儀器有限責任公司FYQ型試劑卡孵育器;長春博研科學儀器有限責任公司TD-A醫用離心機;上海潤普生物技術有限公司TXK4醫用離心機;珠海貝索生物技術有限公司毛細管離心機2403。

1.3試驗方法 采用試管法進行ABO血型鑒定,采用毛細管離心法進行Rh系統鑒定,三介質(鹽水、凝聚胺、抗人球蛋白卡)聯合應用結合多套譜細胞進行抗體特異性鑒定和交叉配血試驗,采用抗人球蛋白卡進行酸放散試驗。全部試驗依據文獻[2]的方法和試劑操作說明書進行。

2 結 果

2.1患者血型 試管法鑒定患者血型:O型RhD陽性。試管法鑒定患者Rh分型:CcEe中C和e抗原呈混合視野2+mf。因患者有輸血史,所以取患者洗滌后的壓積紅細胞轉入2支毛細管,毛細管外側橡皮泥封堵后以毛細管離心機超速離心10 min后即可獲取患者近心端和遠心端紅細胞(封閉端即為遠心端),分別配置成2%～4%紅細胞懸液備用。近心端和遠心端紅細胞分別進行Rh抗原檢測和直接抗人球蛋白試驗。由于患者新鮮紅細胞富集于近心端,根據近心端Rh抗原檢測結果確定患者Rh分型為ccEE。患者近心端直接抗人球蛋白試驗陰性,遠心端多抗和抗-IgG為弱陽性,遠心端富集輸入紅細胞,提示紅細胞因輸入不合血液而致敏,存在IgG類抗體。

2.2抗體篩查試驗 在抗人球蛋白介質中,患者血清與1號和3號篩選細胞有不同強度凝集,1號篩選細胞凝集強度2+,3號篩選細胞凝集強度1+S。2號篩選細胞為-。提示患者血清中含有不規則抗體,根據劑量效應推測存在抗-Ce或合并其他抗體。

2.3抗體特異性鑒定 患者血清與進口匈牙譜細胞反應結果見表1,患者血清在抗人球蛋白及凝聚胺介質中與譜細胞有不同程度凝集。患者直接抗人球蛋白試驗呈陽性反應,表明患者紅細胞上吸附有一定量抗體,患者紅細胞經酸放散后放散液與譜細胞反應。根據抗人球蛋白卡中凝集強度劑量效應吻合積分原則(純合子積2分,雜合子積1分,0即為0分),1～11號譜細胞積分分別為5、2、4、3、4、3、5、2、4、4、2分,判斷患者血清中存在抗-C、抗-e和抗-Jka抗體。用毛細管離心法取得的近心端患者紅細胞進行血型分型,患者血型為ccEE、Jk(a-b+),與患者血清中存在相應抗體吻合。考慮患者抗體復雜性,用Sanquin譜細胞再次進行抗體特異性鑒定,結果見表2。根據Sanquin譜細胞劑量效應吻合積分原則,1～16號Sanquin譜細胞積分分別為6、4、2、4、5、0、4、4、2、4、4、0+W、3、4、2、4+Wra(+),進一步判斷患者血清中存在抗-C、抗-e和抗-Jka抗體,且16號譜細胞[ccee,Jk(a+b-),Wra(+)]凝集強度明顯高于4、7、8、10、14號[ccee,Jk(a+b-),Wra(-)],因此判定該患者還存在抗-Wra抗體。

表1 患者血清與進口譜細胞反應格局及結果(REAGENS,732205)

表2 患者血清再次與進口譜細胞反應格局與結果(Sanquin,8000455637)

2.4吸收放散試驗 吸收放散試驗可以驗證抗體特異性。9號Sanquin譜細胞[ccee,Jk(a-b+)]對患者血清進行第1次熱吸收酸放散試驗,放散液格局符合抗-e。9號譜細胞吸收后血清用3號Sanquin譜細胞[ccEE,Jk(a+b-)]進行第2次吸收放散試驗,酸放散液格局符合抗-Jka。2次吸收后的血清用REAGENS譜細胞鑒定格局符合抗-C;且用Sanquin譜細胞鑒定同樣符合抗-C,16號譜細胞出現凝集確定存在抗-Wra抗體。

2.5交叉配血試驗 2022年4月17、4月19、4月20和4月21日4次共計篩選出5袋[ccEE,Jk(a-)]O型2 U懸浮少白細胞紅細胞與患者進行交叉配血。主側在鹽水、凝聚胺、抗人球蛋白介質中均無凝集、無溶血。由于Wra是低頻抗原,且本實驗室沒有購買相應抗體,主側交叉配血試驗陰性確認篩選紅細胞無相應抗原。

3 討 論

Rh血型系統是人類已知紅細胞系統中最復雜和多態的血型系統,具有高度免疫原性及復雜多態性[3]。Rh血型系統免疫原性強度由強到弱依次為D、E、C、c、e[4]。Rh血型系統抗體多為IgG類抗體,多由妊娠及輸血免疫產生。通常情況下醫院輸血科只對D抗原進行檢測并進行匹配性輸注,其他抗原不進行匹配性輸注,導致每一次輸血均有產生同種免疫性抗體的可能。結合患者同時具有輸血史、妊娠史,其C和e抗原均存在混合視野,判斷患者近期可能輸注有C(+)、e(+)的紅細胞,從而產生了抗-C抗體和抗-e抗體。通過毛細管離心法可以區分患者自身紅細胞及獻血者紅細胞,近心端患者自身紅細胞抗原分型為ccEE。通過抗體特異性鑒定、積分制原則及吸收放散試驗確定患者同時存在抗-C抗體和抗-e抗體。根據報道,Rh表型為ccDEE在我國人群的頻率為4.70%～6.46%[5-6],隨機配血相合輸注的血液Rh抗原匹配率只有4%～6%。所以,對于需要反復多次輸血的患者,Rh分型檢測及同型輸注至關重要。

抗-Jka抗體是Kidd血型系統抗體,多為IgG類抗體,通常結合補體且與其他抗體合并存在。長期不受抗原刺激抗體會迅速減少甚至消失,再次輸注抗原陽性血液會迅速引發記憶反應,抗體效價快速升高,結合補體引起嚴重溶血反應[7]。通過劑量效應及吸收放散試驗確認患者含有抗-Jka抗體,并且與患者基因型Jk(a-b+)相吻合,進行輸血時應挑選相應抗原陰性的紅細胞輸注,以免引起嚴重的遲發型溶血性輸血反應,危及患者生命。

Wra是Diego血型系統的低頻抗原,在中國人群中頻率<0.01%[8]。抗-Wra抗體一般合并其他血型系統抗體存在,且隨著進口譜細胞的應用,抗-Wra抗體的檢出率也逐年提高。

隨著醫療技術的提升,臨床上遇到復雜抗體的患者越來越多,特別是需要多次輸血的患者同種抗體產生的風險增加,抗體鑒定困難。不規則抗體篩查應該作為輸血前檢測的一部分,它提供了比交叉配血更為可靠和靈敏的檢測方法(劑量效應等)[9]。在抗體特異性鑒定時出現血清與譜細胞反應強度存在明顯差異時,要充分應用積分制原則和劑量效應,以及應用多組譜細胞,同時考慮多種抗體的存在。尤其是類似Kidd血型系統抗體,該類抗體消失快、恢復快且容易聯合存在,容易造成漏檢而引起嚴重的遲發型溶血性輸血反應。吸收放散試驗能很好地提煉單個抗體,提高抗體鑒定的準確性。

綜上所述,準確鑒定多次輸血患者體內多種抗體特異性尤為重要,漏檢和誤檢均會導致患者輸血效果不佳,以及出現輸血反應。