錯配修復蛋白3在口腔鱗狀細胞癌中的表達及意義

修小斐 高峰 王曉梅 徐嘉曼 肖雪蘭 王大維

[摘要]?目的?探討錯配修復蛋白3（MutS?homolog?3，MSH3）在口腔鱗狀細胞癌中的表達及意義。方法?采用免疫組化檢測20例正常口腔黏膜和60例口腔鱗狀細胞癌組織中MSH3蛋白的表達。結果?口腔鱗狀細胞癌組織中MSH3的陽性表達低于正常口腔黏膜。其中，高分化和中分化鱗狀細胞癌中MSH3陽性表達高于低分化。與有淋巴結轉移的鱗狀細胞癌患者比較，無淋巴結轉移的患者MSH3陽性表達明顯升高。MSH3表達與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小無相關性。結論?MSH3蛋白表達降低與口腔鱗狀細胞癌的分化程度和淋巴結轉移相關，MSH3可能在口腔鱗狀細胞癌進展過程中發揮重要作用。

[關鍵詞]?錯配修復蛋白3；口腔鱗狀細胞癌；免疫組化；分化程度；轉移

[中圖分類號]?R739.8????[文獻標識碼]?A ????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2024.02.006

Expression?of?MutS?homolog?3?in?oral?squamous?cell?carcinoma?and?its?significance

XIU?Xiaofei1，?GAO?Feng1，?WANG?Xiaomei1，?XU?Jiaman2，?XIAO?Xuelan1，?WANG?Dawei1

1.Department?of?Pathology，?the?Third?Hospital?of?Hebei?Medical?University，?Shijiazhuang?050051，?Hebei，?China;?2.Department?of?Oral?surgery，?the?Third?Hospital?of?Hebei?Medical?University，?Shijiazhuang?050051，?Hebei，?China

[Abstract]?Objective?To?investigate?the?expression?of?MutS?homolog?3?（MSH3）?in?oral?squamous?cell?carcinoma?and?its?significance.?Methods?The?MSH3?protein?expression?was?examined?by?immunohistochemistry?in?20?normal?oral?mucosa?and?60?oral?squamous?cell?carcinoma?tissues.?Results?Our?results?showed?that?MSH3?expression?in?oral?squamous?cell?carcinoma?tissues?was?lower?than?normal?oral?mucosa.?The?MSH3?expression?in?oral?squamous?cell?carcinoma?tissues with?better?differentiation?was?higher?than?that?with?worse?differentiation.?The?positive?MSH3?expression?decreased?from?oral?squamous?cell?carcinoma?patients?without?lymph?nodal?metastasis?to?that?with?metastasis.?MSH3?expression?was?not?related?to?the?patients’?gender，?age，?tumour?location?or?size.?Conclusion?Downregulation?of?MSH3?is?consistent?with?poorly?differentiation?and?nodal?metastasis?in?oral?squamous?cell?carcinoma.?MSH3?may?play?a?significant?role?in?the?malignant?progression?of?oral?squamous?cell?carcinoma.

[Key?words]?MutS?homolog?3;?Oral?squamous?cell?carcinoma;?Immunohistochemistry;?Differentiation;?Metastasis

DNA錯配修復（mismatch?repair，MMR）系統是DNA重組和復制過程中糾正堿基錯配的重要DNA修復途徑，是細胞維持基因組穩定的必要條件，也可以調節腫瘤細胞對放療和化療藥物的敏感性[1]。錯配修復蛋白3（MutS?homolog?3，MSH3）位于5q11-q12染色體上，是MMR系統的重要成員[2]。有研究表明，MSH3的表達降低或缺失可導致多種惡性腫瘤的發生，40%～60%的結直腸癌中出現異常MSH3表達，并與預后不良有關[3]。然而，MSH3的表達與口腔鱗狀細胞癌的關系未見報道。本研究檢測MSH3在正常口腔黏膜和口腔鱗狀細胞癌組織中的表達情況，分析口腔鱗狀細胞癌MSH3蛋白的表達與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、分化程度及淋巴結轉移的關系，為口腔癌的診斷和預后評估提供依據。

1??資料與方法

1.1??標本收集

收集2019至2020年河北醫科大學第三醫院病理科診斷的口腔鱗狀細胞癌標本60例，其中高+中分化41例、低分化19例，術前均未接受放療或化療。患者年齡為52歲（28～81歲）。根據腫瘤部位，舌癌27例、牙齦癌18例、頰癌15例。無淋巴結轉移37例，有淋巴結轉移23例。20例正常口腔黏膜組織為同期牙槽嵴整形手術切除的樣本，經組織學檢查無鱗狀細胞癌和癌前病變。該研究經河北醫科大學第三醫院醫學倫理委員會討論審議并批準（倫理審批號：G2020-007-1）。該研究患者均已簽署知情同意書。

1.2??免疫組化檢測

石蠟包埋組織切片（4μm）后常規脫蠟至水，在0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（pH值為6.0）中高壓鍋中煮沸10min，室溫靜置30min，磷酸鹽緩沖液（PBS，pH值為7.4）洗滌3次。內源性過氧化物酶的活性在0.5%H2O2甲醇中阻斷10min，4℃下加入MSH3一抗（1：100，英國Abcam公司）孵育過夜。MaxVisionTMHRP試劑（福州邁新生物科技有限公司）在37℃下孵育30min，PBS洗滌，DAB顯色，用蘇木精復染后，中性樹膠封片。

1.3??結果判定

雙盲條件下，由兩位有經驗的病理科醫師對免疫組織化學結果進行評估。MSH3在細胞核呈棕黃色顆粒表達。根據視野下細胞染色強度和陽性率進行評分判定：無著色為陰性；≤5%的細胞呈現不同程度的細胞核著色為弱陽性；5%～25%的細胞呈現強的細胞核著色或≤75%呈現弱或中等強度的細胞核著色為中陽性；>25%的細胞呈現強的細胞核著色或>75%呈現中等強度細胞核著色為強陽性。根據臨床病理特征的相似性，將MSH3陰性、弱陽性染色劃分為陰性表達組，中、強陽性染色劃分為陽性表達組。

1.4??統計學方法

采用SPSS?20.0統計學軟件對數據進行處理分析，采用χ2檢驗進行分析，數據以n（%）表示，以P<0.05為差異有統計學意義。

2??結果

2.1&nbsp;?正常口腔黏膜和鱗狀細胞癌組織中MSH3表達

免疫組化檢測MSH3在正常口腔黏膜上皮和鱗狀細胞癌細胞核表達。在正常口腔黏膜，大部分（95%）MSH3為陽性表達，僅有1例（5%）為陰性表達組。40例（67%）鱗狀細胞癌組織為陽性表達，20例（33%）為陰性表達。口腔鱗狀細胞癌MSH3表達陽性水平明顯低于正常口腔黏膜（χ2=6.22，P=0.013）。見表1、圖1。

2.2??鱗狀細胞癌MSH3表達與臨床病理特征的關系

在41例高+中分化鱗狀細胞癌中，33例（80%）MSH3呈陽性表達。而在19例低分化鱗狀細胞癌中，僅7例（37%）為陽性表達。高+中分化鱗狀細胞癌MSH3陽性表達高于低分化鱗狀細胞癌（P=0.001）。在鱗狀細胞癌患者中，37例無淋巴結轉移患者，MSH3陽性表達為30例（81%）。23例有淋巴結轉移者，僅10例（43%）MSH3為陽性表達。MSH3陽性表達在有淋巴結轉移的鱗狀細胞癌患者比無淋巴結轉移患者明顯下降（P=0.003）。MSH3表達情況與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

3??討論

MSH3是MMR系統的重要組成部分，主要功能是維持基因組的完整性，修復基因復制和重組過程中產生的DNA錯配。MSH3蛋白在結直腸癌、胃癌、膀胱癌、前列腺癌、腎細胞癌和卵巢癌中表達下降[3-9]，研究表明MSH3表達降低在腫瘤發生發展過程中發揮一定的作用。本研究發現MSH3在口腔鱗狀細胞癌中表達較正常口腔黏膜顯著下降，這與其他腫瘤研究結果一致，提示MSH3蛋白在口腔鱗狀細胞癌的發生發展中發揮一定的作用。由于MSH3通過糾正DNA重組和復制過程中的堿基錯配來維持基因組的穩定性，其表達的降低或缺失可能誘導細胞突變，導致癌癥發生。

既往研究表明MSH3表達強度與膀胱癌和腎癌的分化程度密切相關，MSH3蛋白在高級別膀胱癌和腎癌組織中的表達水平明顯低于低級別腫瘤[6，8]。本研究發現分化較好的鱗狀細胞癌中MSH3的陽性表達高于低分化的鱗狀細胞癌，表明MSH3在鱗狀細胞癌組織中的低表達與腫瘤的進展有關，其促進鱗狀細胞癌細胞更具有侵襲性。Ni等[10]發現MSH3蛋白表達水平與結直腸癌淋巴結的轉移情況無關。但在本研究中，發現有淋巴結轉移的口腔癌患者MSH3的陽性表達率低于無淋巴結轉移的患者，這說明MSH3在促進口腔鱗狀細胞癌的轉移中起著重要的作用，與結直腸癌淋巴結轉移情況不同。

綜上，MSH3在口腔鱗狀細胞癌組織中表達降低，且與腫瘤分化程度和淋巴結轉移密切相關，提示MSH3可能在口腔鱗狀細胞癌進展過程中發揮重要作用。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2023–02–03）

（修回日期：2023–11–15）