血小板相關(guān)抗體在兒童免疫性血小板減少癥治療效果評估中的臨床價值

劉 娜, 白濤敏, 李 瑞, 韓田田, 馬芳芳, 林博浩

(陜西省人民醫(yī)院兒科, 陜西 西安 710068)

免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia,ITP)為一種出血性疾病,主要以血小板數(shù)量下降、出血時間延長、皮膚黏膜自發(fā)性出血等為臨床表現(xiàn)[1]。臨床對于ITP的治療原則為將血小板數(shù)量維持在安全范圍,避免患兒發(fā)生嚴(yán)重出血。相關(guān)研究認為將血小板計數(shù)(platelet count,PLT)≤30×109L-1作為治療ITP的初始指征,對患兒進行觀察后治療不會對治療效果造成影響[2]。ITP常用的檢測手段包括免疫病相關(guān)病原學(xué)檢查、血常規(guī)等,研究表明ITP患者體內(nèi)血小板抗體水平較健康兒童高,因此臨床將血小板相關(guān)抗體(Platelet associated antibody,PA-Ig)也常作為輔助診斷方式與上述指標(biāo)一起應(yīng)用于臨床[3]。本研究探究ITP患兒治療后的PA-Ig水平,對其在ITP治療效果中的臨床價值進行評估,以期為臨床提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2020年2月至2023年2月醫(yī)院收治的104例ITP患兒以及22例健康兒童作為研究對象。ITP患兒納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合相關(guān)指南中ITP的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：至少兩次血常規(guī)檢查PLT< 100×109L-1且外周血涂片血細胞形態(tài)無顯著異常、骨髓檢查顯示巨核細胞增多或正常伴成熟障礙、脾臟一般不增大;②符合ITP骨髓象特點;③入組前未使用相關(guān)治療藥物者;④患兒家屬知情同意本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①因遺傳性血小板減少癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等其他疾病繼發(fā)的ITP;②不配合本次試驗者;③因風(fēng)濕、藥物等導(dǎo)致的血小板減少。健康兒童納入標(biāo)準(zhǔn)：①健康體檢兒童;②家屬同意本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不配合本次試驗者;②中途退出者。將104例ITP患兒以及22例健康兒童分別納入觀察組與對照組,兩組一般資料比較具體見表1。研究通過倫理委員會審核。

表1 ITP患兒與健康兒童一般資料比較

表2 ITP患兒與健康兒童PA-Ig水平比較

1.2方法：PA-Ig水平檢測：兩組兒童均于清晨、空腹進行檢測,采用含乙二胺四乙酸二鉀(Dipotassium ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA-K2)的真空取血管采集2mL靜脈血,輕輕搖動混勻,離心15min后將上清液轉(zhuǎn)移至流式標(biāo)準(zhǔn)管中,離心3min棄血漿采用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution,PBS)對血小板進行洗滌(3次)并離心3min。采用緩沖液對血小板濃度進行調(diào)整至(5～10)×109L-1,取流式標(biāo)準(zhǔn)管將調(diào)整好的標(biāo)本100 μL裝入3支管中,分別加入20 μLPA-IgG、PA-IgM、PA-IgA抗體并在每個管中加入20 μL抗CD41抗體混勻,靜置15min(室溫避光)。采用PBS緩沖液對檢測標(biāo)本進行洗滌,離心3min并棄上清液,在流式標(biāo)準(zhǔn)管中加入0.5mL緩沖液后上機檢測。ITP治療及療效判定：參照指南[4]給予患兒丙種球蛋白和或腎上腺糖皮質(zhì)激素治療,治療7d后對療效進行評價。判定標(biāo)準(zhǔn)：治療后PLT≥100×109L-1且未出現(xiàn)出血癥狀即為完全反應(yīng);治療后PLT≥30×109L-1且高于基礎(chǔ)PLT水平2倍及以上,未出現(xiàn)出血癥狀即為有效;治療后PLT<30×109L-1或低于基礎(chǔ)PLT水平2倍且出現(xiàn)出血癥狀即為無效,根據(jù)治療結(jié)果將完全反應(yīng)患兒納入完全反應(yīng)組,將治療有效與無效的患兒分別納入有效組與無效組。

2 結(jié) 果

2.1ITP患兒與健康兒童一般資料比較：兩組性別、體質(zhì)量指數(shù)(bodu mess index,BMI)等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

2.2ITP患兒治療效果：觀察組104例患兒中,有85例(81.73%)患兒治療后為完全反應(yīng),11例(10.58%)為有效,其余8例(7.69%)為無效。

2.4不同治療效果的ITP患兒PA-Ig水平比較：完全反應(yīng)組PA-IgG、PA-IgM、PA-IgA水平低于有效組與無效組,有效組PA-IgG、PA-IgM、PA-IgA水平低于無效組,不同治療效果的三組ITP患兒PA-IgG、PA-IgM、PA-IgA水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表3。

表3 不同治療效果的ITP患兒PA-Ig水平比較

2.3ITP患兒與健康兒童PA-Ig水平比較：觀察組PA-IgG、PA-IgM、PA-IgA水平高于對照組(P<0.05),見表2。

3 討 論

ITP發(fā)病原因為機體免疫功能紊亂或骨髓巨核細胞分化成熟障礙導(dǎo)致血小板破壞增加與生成減少[5]。相關(guān)研究表明ITP的發(fā)生機制與遺傳易感性、感染、免疫反應(yīng)等存在一定相關(guān)性[6],另有研究顯示ITP的發(fā)生同樣與自身免疫性淋巴細胞增多綜合征、普通多變型免疫缺陷病密切相關(guān),由此可見ITP為一種多步驟、多靶點、多環(huán)節(jié)異常所致的獲得性疾病[7]。PA-Ig包括PA-IgG、抗同種血小板抗體、PA-IgM、PA-IgA、特異性糖蛋白自身抗體等,為一種免疫球蛋白(結(jié)合于血小板膜表面抗原)[8]。隨著研究的不斷深入已將PA-Ig作為ITP診斷的實驗室輔助指標(biāo)之一,ITP患者體內(nèi)的PA-Ig不僅對血小板數(shù)量造成影響,還可影響血小板功能,為使患者治療效果獲顯著提升,本研究將對PA-Ig在兒童ITP治療效果評估中的臨床價值進行分析[9]。

本研究采用同一方案對ITP患兒進行治療,結(jié)果顯示：觀察組104例患兒中,有85例(81.73%)患兒治療后為完全反應(yīng),11例(10.58%)為有效,其余8例(7.69%)為無效,治療有效的原因分析可能與免疫抑制治療后免疫功能紊亂得到一定程度糾正,PA-Ig產(chǎn)生減少,血小板被破壞減少、數(shù)量上升相關(guān)。通過早期治療效果觀察,正常兒童與ITP患兒的PA-Ig水平比較結(jié)果顯示：觀察組PA-IgG、PA-IgM、PA-IgA水平高于對照組。上述三種抗體中,PA-IgM為機體受到抗原刺激后最早產(chǎn)生的抗體,為五聚體結(jié)構(gòu),包含10個Fab段,具有較強的激活補體與結(jié)合抗原的能力,可對血小板進行大量破壞。ITP患兒PA-Ig多為PA-IgG,但對其進行單項檢測存在假陰風(fēng)險,因此需對其他PA-Ig水平進行檢測。不同治療效果的ITP患兒PA-Ig水平比較結(jié)果顯示：完全反應(yīng)組PA-IgG、PA-IgM、PA-IgA水平低于有效組與無效組,有效組PA-IgG、PA-IgM、PA-IgA水平低于無效組,不同治療效果的三組ITP患兒PA-IgG、PA-IgM、PA-IgA水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義,表明患兒血液中的PA-IgG、PA-IgM、PA-IgA水平高表達可對患兒恢復(fù)造成影響,分析可能原因為患兒體內(nèi)存在大量復(fù)雜的PA-Ig時激素免疫調(diào)節(jié)機制未達理想狀況,未能對單核-巨噬細胞系統(tǒng)減少抗體產(chǎn)生與清除血小板進行有效抑制,另外對于該系統(tǒng)的Fc受體,丙種球蛋白未能其進行完全封閉,導(dǎo)致脾臟及其他變異器官仍可對已結(jié)合的自身抗體血小板進行清除進而導(dǎo)致血小板在體內(nèi)的破壞程度無法顯著改善[10]。有研究稱PA-Ig水平與血小板數(shù)量呈負相關(guān),其數(shù)量隨著PA-Ig水平的升高而減少進而對治療效果造成影響[11],與本研究結(jié)果一致,由此可見,當(dāng)患兒體內(nèi)PA-Ig水平高表達或存在2種以上的PA-Ig水平上升時,對于ITP的治療效果不佳,外周血PLT水平未達治療標(biāo)準(zhǔn)。因此,對于常規(guī)治療效果較差的患兒建議盡早改用其他方案或延長治療時間等方式避免患兒發(fā)展為難治性ITP,臨床可將PA-Ig水平作為ITP治療及預(yù)后的參考指標(biāo)之一,預(yù)期療效不佳的患兒重新制定治療方案以改善其預(yù)后。但由于本研究受納入樣本量、觀察指標(biāo)等因素的影響可能致使結(jié)果存在一定局限,后續(xù)將通過大樣本多中心研究對結(jié)果作進一步探究。

綜上所述,對ITP患兒PA-Ig水平進行檢測可對患兒體內(nèi)PA-Ig類型進行了解,有利于臨床針對患兒情況進行個性化治療與早期療效評估,以降低患兒治療風(fēng)險,故PA-Ig在ITP患兒治療效果評估中具有一定評估價值。