黃芪多糖對斑點叉尾的藥效學及安全性臨床評價

程安達，艾曉輝，于 江，楊移斌

(1.中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所，武漢 430223；2.北京生泰爾科技股份有限公司，北京 102600；3.赤峰市農(nóng)牧業(yè)綜合檢驗檢測中心，內蒙古赤峰 024000)

黃芪多糖(Astragaluspolysaccharides，APS)是從黃芪植物的根部提取的多糖成分，包括葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等，具有免疫調節(jié)作用[10]，能夠廣泛提高機體免疫功能，而其同時又具備自然資源豐富、價格低廉、毒性弱及無殘留等優(yōu)勢[11]，因此常作為免疫增強劑應用于醫(yī)療、畜牧行業(yè)。目前，很多研究顯示，黃芪多糖可以有效激活水生動物如中華鱉(Pelodiscussinensis)、雜交鱧(Channamaculate♀×Channaargus♂)及齊口裂腹魚(Schizothoraxprenanti)等[12-14]非特異性免疫，增強其抗感染能力。因此，本研究擬開展黃芪多糖對斑點叉尾的藥效學及安全性臨床評價，為其在斑點叉尾中的應用打下堅實的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗藥物：黃芪多糖(APS)，由愛迪森(北京)生物科技有限公司提供，獸藥生產(chǎn)批準文號：獸藥字(2009)010125236，生產(chǎn)批號：1108071；含量：每1 g含黃芪多糖應不少于450 mg。

對照藥物：芪參散(Qishen San，Qs)，購自成都通威三新藥業(yè)有限公司，批準文號：獸藥字(2007)220309219 ，生產(chǎn)批號：11071502。

1.2 方法

1.2.1 含黃芪多糖和芪參散飼料的制作

按試驗設計的劑量準確稱取各組試驗和對照藥物，分別加入到適量潔凈水中，用玻璃棒攪拌混合均勻，轉移至小型噴壺中；稱取正常斑點叉尾膨化顆粒飼料(武漢通威股份有限公司提供)，均勻鋪在預先準備好的塑料薄膜上，使飼料在塑料薄膜上呈薄薄的一層。將配制好的藥液噴灑在飼料表面，并充分混勻，在陰涼避光處風干；將制作好的藥飼每組分成7等份，4 ℃冰箱中保存，待試驗魚馴化至吃食正常后每4 d使用1份。

1.2.2 II期臨床實驗

(1)試驗設計及分組

將馴養(yǎng)1周體質量(20.00±0.56)g的規(guī)格一致、體格健壯、采食活躍、無病無傷的斑點叉尾隨機分為6個組，即空白對照組、對照藥物組和4個劑量試驗組，每組各設置3個平行，每個平行30尾。空白組對照組投喂正常日糧，對照藥物組投喂添加芪參散(1 kg魚體重添加0.1g)的日糧，試驗組按每千克魚體重添加5、10、20及40 mg黃芪多糖。試驗周期為28 d，每天投喂2次，每次按魚體重3%～5%進行投喂。

(2)血樣采集

對照組和試驗組連續(xù)投喂7 d，在第7、14、21、28 d進行尾靜脈采血，取樣時分別從各組隨機取3尾魚，從尾靜脈取血。將所得的血液分為2份，其中1份以1%肝素抗凝，用于血液白細胞吞噬活性的測定，另1份于4 ℃條件下以4 000 r/min離心10 min，收集血清，用于測定血清中總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過氧化氫酶(CAT)、溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)。

(3)吞噬原準備及白細胞吞噬活性的測定

將華中農(nóng)業(yè)大學贈送的金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)接種在FWA培養(yǎng)基(淡水魚類瓊脂)中，37 ℃下培養(yǎng)24 h后，2 500 r/min離心5 min集菌，然后在金黃色葡萄球菌菌液中加入終濃度為0.5%的福爾馬林，37 ℃下滅活24 h。經(jīng)過平皿法證實此菌已被徹底滅活，用滅菌生理鹽水清洗3次，并調成濃度為1.0×105CFU/mL的菌懸液，即為福爾馬林滅活的金黃色葡萄球菌菌體(formalin killedS.aureus，F(xiàn)-SA)，置4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

血液白細胞吞噬活性的測定參照陳昌福等[15]的方法并加以改進。即將0.2 mL抗凝血加入約0.l mL的金黃色葡萄球菌懸液，充分混勻后置于28 ℃下水浴，孵育45 min。水浴期間每隔10 min搖勻1次。用吸管吸取血細胞涂片，每個血樣涂5片。自然晾干后，滴加甲醇固定3 min，蒸餾水沖洗，瑞士-吉姆薩混合染色5～10 min，迅速用蒸餾水沖洗，晾干。油鏡觀察，按下式分別計算吞噬百分比和吞噬指數(shù)：

吞噬百分比(PP)=(100個吞噬細胞中參與吞噬的細胞數(shù)/100)×100%

吞噬指數(shù)(PI)=吞噬細胞內的細菌總數(shù)/參與吞噬的吞噬細胞數(shù)

(4)血清相關酶指標測定

血清中總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過氧化氫酶(CAT)和溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(AKP)的測定所用試劑盒均購自南京建成生物技術研究所，嚴格按照其說明書進行操作。

1.2.3 III期臨床試驗

(1)試驗地點與試驗分組

分別選擇湖北省仙桃市龍華山辦事處付光明養(yǎng)殖場的4個池塘及湖北省宜都市青林寺清江名優(yōu)魚專業(yè)合作社4個網(wǎng)箱用于試驗，4個池塘及4個網(wǎng)箱的位置、面積、環(huán)境條件基本相似，分別命名為1#、2#、3#及4#與。每個試驗池或網(wǎng)箱相對獨立，1#、2#設為對照藥物組(芪參散，每日按100 mg/kg魚體重的劑量拌飼投喂)，3#、4#設為推薦劑量組(黃芪多糖，每日按20 mg/kg魚體重的劑量拌飼投喂)，其它未用藥池塘或網(wǎng)箱為自然的空白對照組。池塘面積皆為7 333 m2，水深1.4～1.5 m；試驗期間測得各試驗池的水溫22～26 ℃、溶解氧≥5 mg/L、pH 6.8～7.0、氨氮≤0.05 mg/L、亞硝酸鹽≤0.05 mg/L。4口池塘皆主養(yǎng)斑點叉尾1齡魚種，每池投放魚種12 萬尾，平均體重25 g/尾，規(guī)格整齊，無病無傷。

網(wǎng)箱面積皆為4 m×5 m，深3.5 m；試驗期間測得各試驗水體的水溫18～22 ℃、溶解氧≥5 mg/L、pH 7.0～7.2、氨氮<0.05 mg/L、亞硝酸鹽<0.05 mg/L。4只網(wǎng)箱皆單養(yǎng)斑點叉尾1齡魚種，每池投放魚種2 000 尾，平均體重50 g/尾，規(guī)格整齊，無病無傷。

兩個試驗點每組均每天早上9：00 和下午16：00分別飼喂一次，每日按體重的3%～5%進行投喂，以飽食為準。

(2)觀察指標

各組投喂7 d后停止喂食，并連續(xù)觀察至15 d。記錄每天各組受試斑點叉尾的采食量、應激、活動狀態(tài)、癥狀等，在第15 d抽樣測定血清總超氧化物歧化酶(T-SOD)、溶菌酶(LSZ)、堿性磷酸酶(AKP)，取樣及測定方法與1.2.1(4)所述一致，記錄每天的死亡數(shù)。

(3)生產(chǎn)性能指標

試驗開始時抽取30 尾魚測量初體重，試驗結束后抽取30尾魚測定末體重，并計算生產(chǎn)性能。

增重(WG)=FW-IW

增重率(WGR)= WG/IW×100%

特定生長率(SGR)=(lnFW-lnIW)/t×100%

注：IW：初體重，F(xiàn)W：末體重，t：養(yǎng)殖時間。

(4)攻毒試驗

病原菌的準備：實驗所用的嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)購自中科院水生生物研究所，將菌株接種在TSB培養(yǎng)基中，30 ℃下培養(yǎng)24 h后，5 000 r/min離心10 min收集菌體。用0.15 mol/L滅菌生理鹽水稀釋菌體至液體培養(yǎng)原體積，活菌計數(shù)法測定菌液濃度，用滅菌生理鹽水將菌液濃度調至為1.0×108CFU/mL，將菌液保存于4 ℃冰箱。

免疫保護率RPS=[1-(試驗魚死亡率/對照魚死亡率)]×100%

1.2.4 安全性評估

(1)試驗設計及觀察

將馴養(yǎng)1周的規(guī)格一致、體格健壯、采食活躍、無病無傷的斑點叉尾隨機分為4個組，即空白對照組、推薦劑量組(1倍)、3倍推薦劑量組、5倍推薦劑量組，空白組投喂正常日糧，試驗組按劑量添加黃芪多糖，用藥21 d。每個濃度各設3個重復，每個重復20尾。觀察和記錄斑點叉尾的一般健康情況、中毒表現(xiàn)和死亡過程，包括呼吸頻率、外觀體征、行為活動、攝食量等。測定并記錄試驗前及試驗結束時動物體重。用藥停止后4 h(0 d)和第21天進行斑點叉尾血液生理指標、血液生化指標取樣檢驗。血液樣品采集使用一次性無菌注射器尾靜脈抽血，注入添加1%肝素鈉的采血管中，取全血用貝克曼Coulter LH750全自動血細胞分析儀進行血常規(guī)測定，血液生化指標采用日本Sysmex，Chenix-180 多功能生化分析儀。血液生理檢測參數(shù)主要有血紅蛋白(HGB)、紅細胞數(shù)(WBC)、白細胞數(shù)(HTC)、血小板數(shù)(PLT)等；血液生化檢測參數(shù)有總膽固醇(TCH)、肌酐(CRE)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、堿性磷酸酶(AKP)、血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)及血清尿素氮(BUN)等。

(2)剖檢和組織病理學檢查

1.3 數(shù)據(jù)分析及處理

試驗數(shù)據(jù)用SPSS 16.0軟件包進行方差分析、顯著性及相關性檢驗，結果用平均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，P<0.05表示差異顯著，P< 0.01表示差異極顯著，P>0.05表示差異不顯著。

2 研究結果

2.1 II期臨床試驗研究

由圖1可知，在7、14、21 d添加5 mg/kg黃芪多糖對白細胞吞噬百分率(PP)和吞噬指數(shù)(PI)差異不顯著；添加10 mg/kg黃芪多糖的實驗組在各時間點對白細胞吞噬百分率(PP)和吞噬指數(shù)(PI)差異顯著高于空白對照組；添加20、40 mg/kg黃芪多糖的實驗組各時間點對白細胞吞噬百分率(PP)和吞噬指數(shù)(PI)差異極顯著高于空白對照組。添加10、20、40 mg/kg黃芪多糖的實驗組各時間點與對照藥物組相比，差異不顯著。

圖1 不同劑量黃芪多糖對斑點叉尾血液中白細胞吞噬活性的影響Fig.1 Effect of each group of drugs on leukocyte phagocytosis activity in blood of I.punctatus

由圖2A可知，添加黃芪多糖的四個實驗組總超氧化物歧化酶的活力都高于空白對照組，其中，實驗至第7、28天時，添加10、20和40 mg/kg組T-SOD活力與空白對照組相比差異顯著；除添加5 mg/kg組T-SOD活力比對照藥物組低以外，其余三個實驗組T-SOD活力與對照藥物組相比差異不顯著。

圖2 黃芪多糖對斑點叉尾血清總超氧化物歧化酶T-SOD、過氧化氫酶CAT和溶菌酶LSZ、酸性磷酸酶ACP和堿性磷酸酶AKP活力的影響Fig.2 Effect of APS on the activities of total superoxide dismutase，catalase，lysozyme，acid phosphatase and alkaline phosphatase in serum of I.punctatus

由圖2B可知，添加黃芪多糖的四個實驗組除5 mg/kg組外，其余三個實驗組過氧化氫酶CAT的活力都高于空白對照組，其中，添加10 mg/kg實驗組在第21天，其CAT活力與空白對照組相比，差異顯著，添加20 mg/kg實驗組在第7、14、21、28天，其CAT活力與空白對照組相比，差異均極顯著，添加5 mg/kg組CAT活力比對照藥物組低，其余三個實驗組CAT活力與對照藥物組相比差異不顯著。

由圖2C可知，四個黃芪多糖添加組溶菌酶活力都比空白對照組有不同程度的提高，實驗至第21天以后各組溶菌酶的活力比第14天前有所提高。實驗至第21、28天時，添加10 mg/kg和20 mg/kg兩個實驗組LSZ活力與空白對照組相比，差異均極顯著，四個實驗組LSZ活力與對照藥物組相比差異不顯著。

由圖2E可知，飼料中添加不同劑量的黃芪多糖在一定程度上提高了斑點叉尾血清堿性磷酸酶的活力，且同一組堿性磷酸酶的活力隨著時間的延長而增加，至用藥后第21天時達到最大，隨后稍微有所降低。至第21天時，添加量為20 mg/kg實驗組AKP活力與空白對照組相比差異顯著，除添加量為5 mg/kg實驗組AKP活力比對照藥物組低以外，添加量為10、20和40 mg/kg 三個實驗組AKP活力與對照藥物組相比差異均不顯著。

2.2 III期臨床試驗研究

表1 黃芪多糖對斑點叉尾T-SOD、LSZ及AKP活性的影響Tab.1 Effect of APS on T-SOD，LSZ and AKP activities of I.punctatus

表1 黃芪多糖對斑點叉尾T-SOD、LSZ及AKP活性的影響Tab.1 Effect of APS on T-SOD，LSZ and AKP activities of I.punctatus

試驗地點組別T-SODLSZAKP空白對照組72.53±1.723.22±0.4335.30±2.75仙桃市付光明養(yǎng)殖場對照藥物組90.67±1.13*4.08±0.15*38.12±3.10*推薦劑量組97.79±0.92*4.11±0.12*39.33±1.91*空白對照組74.30±1.613.39±0.4234.39±2.36宜都市廖斌遠養(yǎng)殖場對照藥物組93.58±1.28*4.30±0.24*38.12±0.97*推薦劑量組100.71±1.63*4.58±0.61*38.56±1.96*

注：*表示P< 0.05，差異顯著。

由表2可見，與空白對照組相比，黃芪多糖推薦劑量組和芪參散對照藥物組都可以提高斑點叉尾的增重率和特定生長率，其中，推薦劑量組提高斑點叉尾的增重率和特定生長率差異顯著。

表2 黃芪多糖對斑點叉尾生長性能的影響Tab.2 Effect of APS on growth performance of I.punctatus

表2 黃芪多糖對斑點叉尾生長性能的影響Tab.2 Effect of APS on growth performance of I.punctatus

試驗地點組別初始尾重/g終末尾重/g增重率/%特定生長率/(%/d)空白對照組25.36±8.9031.45±7.3224.01±0.121.00±0.12仙桃市付光明養(yǎng)殖場對照藥物組25.83±8.7833.52±7.6029.77±0.231.18±0.21推薦劑量組24.91±7.9233.95±7.8336.29±0.12*1.41±0.11*空白對照組50.56±11.3856.68±10.6412.10±0.110.55±0.23湖北省宜都市青林寺清江名優(yōu)魚專業(yè)合作社對照藥物組50.12±10.6358.95±9.6117.62±0.360.77±0.14推薦劑量組50.42±10.8060.24±9.8619.47±0.12*0.82±0.13*

注：*表示P< 0.05，差異顯著。

從表3可知，在仙桃市付光明養(yǎng)殖場，黃芪多糖推薦劑量組免疫保護率達到88.9%，高于對照藥物組；在湖北省宜都市青林寺清江名優(yōu)魚專業(yè)合作社，黃芪多糖推薦劑量組免疫保護率達到84.2%，也高于對照藥物組。結果表明，在飼料中按每日20 mg/kg魚體重的劑量添加黃芪多糖，可以提高斑點叉尾的免疫力。

表3 黃芪多糖對斑點叉尾的免疫保護率Tab.3 Immune protection rate of APS on I.punctatus

表3 黃芪多糖對斑點叉尾的免疫保護率Tab.3 Immune protection rate of APS on I.punctatus

試驗地點組別死亡數(shù)免疫保護率/%空白對照組18/仙桃市付光明養(yǎng)殖場對照藥物組477.8%*推薦劑量組288.9%*空白對照組19/湖北省宜都市青林寺清江名優(yōu)魚專業(yè)合作社對照藥物組573.7%*推薦劑量組384.2%*

注：*表示P< 0.05，差異顯著。

2.3 安全性研究

2.3.1 臨床觀察結果

實驗期間，4個組實驗魚均未出現(xiàn)死亡，體格健壯、采食活躍、呼吸正常。魚體重結果如表4可知推薦劑量組魚體重增加顯著高于其他劑量組和對照組。隨著劑量倍數(shù)的增加，魚體重增長趨緩，低于空白對照組。

表4 飼喂黃芪多糖的斑點叉尾體質量Tab.4 Weight of I.punctatus after feeding APS

表4 飼喂黃芪多糖的斑點叉尾體質量Tab.4 Weight of I.punctatus after feeding APS

分組0 d體質量/g21d體質量/g對照組54.67±16.9260.84±13.60推薦劑量54.33±17.6266.01±19.01*3倍劑量55.11±14.2659.21±10.315倍劑量54.36±17.6657.42±12.80

2.3.2 血液生理指標檢驗結果

由表5可見，與空白對照組相比，在停藥后0 d和21 d，推薦劑量組斑點叉尾HGB、WBC、HCT和PLT都有一定增加，但都屬于正常范圍；3倍推薦劑量組斑點叉尾血液HGB、WBC、HCT和PLT有增有減，差異不顯著；5倍推薦劑量組斑點叉尾HGB、WBC、HCT和PLT都有一定減少，但均在正常范圍內[16]。

表5 添加黃芪多糖后斑點叉尾血液生理指標變化情況Tab.5 Changes of blood physiological indexes of I.punctatus after adding APS

表5 添加黃芪多糖后斑點叉尾血液生理指標變化情況Tab.5 Changes of blood physiological indexes of I.punctatus after adding APS

組別采樣時間HGB/(1012/L)WBC/(109/L)HCT/(g/L)PLT/(109/L)空白對照組0 d2.48±0.096223.65±10.74125.18±3.9424.80±5.3821 d2.52±0.17225.84±5.64126.76±3.6524.81±3.18推薦劑量組0 d2.65±0.30230.25±5.56129.68±2.0928.61±2.1021 d2.75±0.11238.81±7.83128.28±2.2230.15±2.063倍劑量組0 d2.35±0.21220.72±5.68114.07±3.7523.86±1.3121 d2.38±0.25224.50±5.80127.07±3.7522.91±1.485倍劑量組0 d2.26±0.08218.35±16.13110.52±2.8121.33±1.2521 d2.24±0.05213.78±18.07107.93±2.9720.38±0.61

2.3.3 血液生化指標檢驗結果

由表6可見，推薦劑量組和3倍推薦劑量組血清ALT、AST、AKP活性與對照組相比，差異不顯著；5倍推薦劑量組血清ALT、AST、AKP 活性在0d和21d都比對照組有一定提高，但差異不顯著，表明添加推薦劑量和3倍推薦劑量的黃芪多糖對斑點叉尾肝細胞無影響，而5倍推薦劑量對斑點叉尾肝細胞有一定影響，但不顯著。各試驗組的ALB、TP、TCH與對照組相比，差異都不顯著，表明各添加劑量對斑點叉尾肝功能無明顯影響。推薦劑量組和3倍推薦劑量組BUN、CRE與對照組相比，差異不顯著；5倍推薦劑量組CRE在0d和21d都比對照組有一定提高，但差異不顯著，表明添加推薦劑量和3倍推薦劑量的黃芪多糖對斑點叉尾腎功能無影響，而5倍推薦劑量對斑點叉尾腎功能有一定影響，但不明顯。

表6 添加黃芪多糖后斑點叉尾血液生化指標變化情況Tab.6 Changes of blood biochemical indexes of I.punctatus after adding APS

表6 添加黃芪多糖后斑點叉尾血液生化指標變化情況Tab.6 Changes of blood biochemical indexes of I.punctatus after adding APS

組別采樣時間AST/(U/L)ALT/(U/L)AKP/(金氏單位/100mL)BUN/(mmol/L)CRE/(μmol/L)TCH/(mmol/L)ALB/(g/L)TP/(g/L)空白對照組0 d147.00±12.1619.00±0.0029.33±2.080.80±0.1312.00±1.739.35±0.0911.00±0.0029.33±0.5821 d158.67±14.6416.00±1.0042.67±5.861.05±0.0912.33±1.536.08±0.429.00±0.0028.00±2.00推薦劑量組0 d144.35±9.6218.12±2.0529.85±2.310.75±0.1211.63±1.287.35±0.1611.43±0.6829.96±0.8721 d140.67±18.6113.67±0.5845.00±6.080.79±0.05613.67±2.525.89±0.429.00±1.0025.67±0.583倍劑量組0 d149.77±10.0318.95±1.5631.52±1.970.97±0.1112.88±2.548.63±1.5410.38±0.7227.81±1.5721 d169.67±22.9016.33±1.5353.33±2.521.02±0.06413.00±3.608.27±1.369.67±0.5828.00±0.005倍劑量組0 d153.12±11.3420.48±0.8334.26±2.130.88±0.3414.65±1.189.17±2.7110.88±0.9327.13±2.5521 d180.33±22.1417.67±1.5342.86±4.581.06±0.1115.33±2.089.01±2.0410.00±0.0028.00±0.00

2.3.4 剖檢和組織病理學檢查結果

實驗過程中無死亡個體，解剖后未見明顯組織形態(tài)異常，經(jīng)制作石蠟切片染色也未發(fā)現(xiàn)重要免疫器官頭腎及脾臟出現(xiàn)病理變化，如圖3所示。

圖3 不同劑量的黃芪多糖對斑點叉尾頭腎及脾臟的組織病理學影響Fig.3 Histopathological effect on head kidney and spleen of I.punctatus with different doses of APS

3 討論

目前，關于黃芪多糖對水生動物生長的影響研究較多。向梟等[14]發(fā)現(xiàn)黃芪多糖添加水平為0.04%時，齊口裂腹魚的增重率(WGR)、特定生長率(SGR)、飼料蛋白效率(PER)均達到最大；孫永欣等[17]研究發(fā)現(xiàn)黃芪多糖可明顯提高刺參特定生長率(SGR)，與對照組相比增加了20.94%；黃玉章等[18]發(fā)現(xiàn)各個階段黃芪多糖添加組奧尼羅非魚的絕對增重量都比對照組有所提高；楊移斌等[12]也曾研究發(fā)現(xiàn)黃芪多糖對中華鱉生長有一定的促進作用。以上研究結果均與本研究中飼喂黃芪多糖可提高斑點叉尾增重率及特定生長率結果一致。究其原因可能因為黃芪多糖中含有較多的活性物質，可在一定程度上促進細胞代謝合成[19]，同時也在一定程度上可加強動物胃液分泌及食物消化，參與機體的物質代謝過程，促進腸道益生菌繁殖，加強消化酶分泌，提高動物營養(yǎng)物質消化及蛋白質合成能力，從而提高動物生長速度[20，21]。

非特異性免疫是機體抗感染的重要屏障，而總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過氧化氫酶(CAT)、溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)及白細胞吞噬活性等指標是衡量機體非特異性免疫的重要指標。通過II期及III期臨床試驗發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖可明顯提高斑點叉尾以上指標，以添加量為20 mg/kg魚體重最優(yōu)，故也可提高機體抗細菌感染的能力，這與黃芪多糖可提高雜交鱧抗嗜水氣單胞菌感染的能力研究結果一致[12]。以往研究也顯示黃芪多糖添加水平為0.04%時，齊口裂腹魚堿性磷酸酶(ALP)活性最高，酸性磷酸酶(ACP)活性在黃芪多糖添加水平0.06%時最大[14]，在雜交鱧、黃顙魚及鯉中均得到類似研究結果[12，22，23]。另外，隨黃芪多糖添加水平的升高，黃顙魚吞噬百分比與吞噬指數(shù)顯著上升(P<0.05)[22]，也與本研究結果一致。曹麗萍等[24]利用qPCR技術檢測了黃芪多糖作用于魚類頭腎巨噬細胞后IL-1β的表達情況，發(fā)現(xiàn)其明顯上調，表明黃芪多糖可誘導IL-1β的表達，增強吞噬細胞的吞噬能力，但黃芪多糖調節(jié)魚類免疫機制還需進一步探討。

目前關于黃芪多糖對動物安全性研究不多，僅見昭日格圖等[25]利用黃芪多糖飼喂大鼠30d，發(fā)現(xiàn)5.00、2.50和1.25 g/kg 體重劑量均沒有對動物的身體、臟器的生長發(fā)育及血液生化指標等產(chǎn)生明顯的影響。研究也發(fā)現(xiàn)飼喂50 mg/kg魚體的黃芪多糖，草魚的血常規(guī)指標和血液生化指標與對照組無顯著性差異，而且草魚肝、腎、脾細胞和組織結構上也無異常[26]。本研究也發(fā)現(xiàn)每日按20 mg/kg魚體重投喂黃芪多糖不會對斑點叉尾產(chǎn)生毒性作用，即黃芪多糖安全性較好，具備作為水產(chǎn)免疫增強劑的條件。

4 結論

飼料中添加不同劑量的黃芪多糖在一定程度上可以提高斑點叉尾血液中吞噬百分比(PP)、吞噬指數(shù)(PI)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過氧化氫酶(CAT)、溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)等各項免疫指標值，且效果優(yōu)于芪參散。每日以20 mg/kg魚體重為最優(yōu)添加劑量。

在實際生產(chǎn)條件下，在飼料中按每日20 mg/kg魚體重的劑量添加黃芪多糖，可有效提高斑點叉尾非特異免疫功能，在此劑量下使用對斑點叉尾是安全性，未見不良反應。