豆科綠肥作物害蟲苜蓿葉象甲的鑒定與預(yù)警

孫佳琦 張蕾 侯陽陽 謝殿杰 劉悅秋 江幸福

摘要

苜蓿葉象甲Hypera?postica是我國苜蓿Medicago?sativa上的重要害蟲，主要分布在新疆、甘肅、內(nèi)蒙古等畜牧業(yè)主產(chǎn)區(qū)。作者2023年4月在安徽省蕪湖市南陵縣調(diào)查紫云英Astragalus?sinicus蟲害時，在當?shù)刈显朴⒘舴N田中發(fā)現(xiàn)疑似苜蓿葉象甲嚴重為害紫云英莖葉，對紫云英生長和產(chǎn)量產(chǎn)生嚴重影響。為明確該種害蟲的分類地位，在田間收集了幼蟲并帶回室內(nèi)飼養(yǎng)，在對幼蟲和成蟲形態(tài)學初步鑒定的基礎(chǔ)上，采用DNA條形碼進行了分子鑒定，最終確定為苜蓿葉象甲，且發(fā)現(xiàn)該地區(qū)苜蓿葉象甲種群存在明顯的種內(nèi)分化。結(jié)合苜蓿葉象甲的生物學與生態(tài)學特性，對其在我國的傳播及其對綠肥作物的危害做出了預(yù)警，并提出了防治建議。

關(guān)鍵詞

苜蓿葉象甲;?豆科綠肥;?形態(tài)學鑒定;?分子鑒定;?預(yù)警與防治

中圖分類號：?S?433.5

文獻標識碼：?A

DOI：?10.16688/j.zwbh.2023527

Identification?and?early?warning?of?Hypera?postica?（Coleoptera：?Curculionidae），?a?severe?pest?of?legume?cover?crops

SUN?Jiaqi1#，?ZHANG?Lei1#，?HOU?Yangyang1，?XIE?Dianjie1，?LIU?Yueqiu2，?JIANG?Xingfu1*

（1.?State?Key?Laboratory?for?Biology?of?Plant?Diseases?and?Insect?Pests，?Institute?of?Plant?Protection，?

Chinese?Academy?of?Agricultural?Sciences，?Beijing?100193，?China;?2.?College?of?Landscape?Architecture，?

Beijing?University?of?Agriculture，?Beijing?102206，?China）

Abstract

The?alfalfa?leaf?weevil，?Hypera?postica，?is?an?important?pest?of?alfalfa?crops?in?China，?particularly?in?major?livestock?production?regions?such?as?Xinjiang，?Gansu，?and?Inner?Mongolia.?During?an?investigation?of?pest?causing?damage?to?Astragalus?sinicus?in?Nanling?county，?Wuhu?city，?Anhui?province，?suspected?traces?of?;H.postica?were?discovered?in?local?seed?fields，?where?the?stems?and?leaves?of?A.sinicus?were?severely?damaged?by?the?insect.?To?clarify?the?classification?status?of?this?pest，?the?larvae?were?collected?and?brought?back?to?the?laboratory?for?rearing.?Preliminary?identification?of?both?larvae?and?adults?was?conducted?based?on?morphological?characters，?and?then?molecular?identification?was?performed?using?DNA?barcodes，?confirming?the?insect?as?the?alfalfa?leaf?weevil，?H.postica.?Furthermore，?it?was?found?that?there?were?significant?intraspecies?variations?within?the?local?population.?According?to?the?biological?and?ecological?characteristics?of?H.postica，?a?warning?has?been?issued?regarding?the?potential?spread?of?this?pest?in?China?and?its?detrimental?impact?on?cover?crops，?and?insect?pest?control?suggestions?were?also?proposed.

Key?words

Hypera?postica;?legume?cover?crops;?morphological?identification;?molecular?identification;?early?warning?and?control

苜蓿葉象甲Hypera?postica是全球苜蓿Medicago?sativa上重要害蟲之一，主要分布在歐洲各國、美國、加拿大、墨西哥和日本等地［12］。1904年美國首次發(fā)現(xiàn)該蟲傳入為害［3］，20世紀60年代苜蓿葉象甲在美國苜蓿上成災(zāi)，造成苜蓿種植面積大幅縮小，僅弗吉尼亞州苜蓿種植面積由1961年的4.25萬?hm2縮減至1967年的1.34萬?hm2?［4］。大發(fā)生年份造成經(jīng)濟損失達25億美元［56］。我國苜蓿葉象甲主要分布在新疆、甘肅和內(nèi)蒙古等地，曾對我國苜蓿生產(chǎn)和畜牧業(yè)造成毀滅性危害［78］。苜蓿葉象甲不僅為害苜蓿，還可取食豆科、十字花科、禾本科、菊科、薔薇科等植物［9］。全球氣候變化與作物種植結(jié)構(gòu)調(diào)整是昆蟲種群分布發(fā)生變化的關(guān)鍵因素［10］。依據(jù)氣候數(shù)據(jù)對我國苜蓿葉象甲的適生區(qū)進行分析發(fā)現(xiàn)，從2010年至2020年苜蓿葉象甲在我國的適生區(qū)出現(xiàn)西擴南移的擴散態(tài)勢［9］。當前，隨著國家土地質(zhì)量提升行動的開展和可持續(xù)農(nóng)業(yè)發(fā)展需求，我國綠肥作物特別是豆科綠肥的種植面積不斷擴大，給苜蓿葉象甲提供了潛在的寄主植物資源［1112］，這也預(yù)示著多食性害蟲對綠肥作物存在潛在危害的風險。

紫云英Astragalus?sinicus是我國重要的豆科綠肥作物，近年來在我國江淮流域和沿江江南等地大力推廣種植，目前在安徽、江蘇、山東等地種植面積超67萬?hm2。長年連續(xù)種植造成病蟲害發(fā)生加劇，特別是在紫云英種子生產(chǎn)田，蟲害是造成其種子減產(chǎn)的重要原因［12］。在國家綠肥產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系支持下，2023年3月作者在安徽省蕪湖市南陵縣弋江鎮(zhèn)調(diào)查紫云英蟲害時，在紫云英留種田中發(fā)現(xiàn)疑似苜蓿葉象甲，且嚴重為害紫云英莖葉，估算為害面積約為66.67?hm2（圖1）。為明確紫云英這一重發(fā)害蟲的分類地位，作者在田間收集了幼蟲并帶回室內(nèi)飼養(yǎng)，通過形態(tài)學和分子生物學（DNA條形碼）對其進行物種鑒定，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1?材料與方法

1.1?供試蟲源

2023年3月25日在安徽省蕪湖市南陵縣弋江鎮(zhèn)（30°51′?N，?118°27′?E）紫云英田采集象甲幼蟲，并將幼蟲帶回實驗室置于（22±1）℃，?相對濕度55%～70%的養(yǎng)蟲室內(nèi)使用紫云英苗飼養(yǎng)。

1.2?形態(tài)鑒定

使用體視顯微鏡（SZX7，?OLYMPUS）對象甲幼蟲和成蟲進行圖像采集，參考《苜蓿病蟲害識別與防治》［13］以及有關(guān)苜蓿葉象甲形態(tài)特征報道的文獻等資料，對幼蟲和成蟲的形態(tài)進行比對鑒定，以初步確定物種名稱。

1.3?DNA條形碼鑒定

使用EasyPureGenomic?DNA?Kit（EE10112，?北京全式金生物技術(shù)股份有限公司），按照說明書單頭提取象甲幼蟲的基因組DNA，共提取3頭。提取后使用NanoDrop?One/OneC?（Thermo）超微量紫外分光光度計檢測DNA的濃度和純度，以保證提取的DNA質(zhì)量完好，DNA樣品-20℃保存用于后續(xù)PCR擴增。采用COⅠ基因通用引物LCO1490（5′

GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG3′）和

HCO2198

（5′TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA3′）擴增長度為658?bp的COⅠ基因部分片段［14］。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

PCR反應(yīng)體系為：2?×?EasyTaq?PCR?SuperMix?12.5?μL，20?μmol/L上下游引物各0.5?μL，DNA模板1?μL，超純水10.5?μL。擴增條件為：95℃?5?min;94℃?40?s，50℃?45?s，72℃?1?min，共35個循環(huán);72℃?10?min。PCR產(chǎn)物使用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，挑選具有單一條帶的PCR產(chǎn)物使用上下游引物進行雙向測序，測序由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。測序結(jié)果由SeqMan軟件進行拼接并手工校正后在NCBI數(shù)據(jù)庫中BLAST以確定序列為目的基因序列并完成物種鑒定。

1.4?系統(tǒng)進化分析

從NCBI數(shù)據(jù)庫中搜集前人提交的苜蓿葉象甲COⅠ基因序列（KY796624、MK891455、OL664242、KY796640）和其5個近緣種H.conmaculata?（KC783982）、H.striata?（KM441151）、H.viciae?（KU912420）、H.venusta?（KU912617）、Brachypera?dauci?（KJ964617）的COⅠ基因序列。使用DNAMAN軟件將本研究的苜蓿葉象甲COⅠ基因序列與搜集到的象甲COⅠ基因序列進行比對，獲得各物種間的相似性。使用MEGA?11軟件對所有序列進行比對分析，去除冗余序列后計算遺傳距離，再利用近鄰相接法（neighborjoining，?NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，并設(shè)置bootstrap抽樣1?000次進行檢驗，其余參數(shù)設(shè)為默認值。使用MEGA?11軟件分析本研究苜蓿葉象甲COⅠ基因的核苷酸及其編碼的氨基酸組成。

2?結(jié)果與分析

2.1?形態(tài)學特征分析與鑒定

本研究的幼蟲和成蟲與《苜蓿病蟲害識別與防治》［13］、Pellissier等［15］和Germann［16］報道的苜蓿葉象甲形態(tài)基本一致（圖2）。成蟲：黃褐色，體長4.4～6.6?mm，寬2.0～2.6?mm，頭部黑褐色，喙細長呈管狀，觸角11節(jié)，膝狀，端部膨大。前胸背板有2條

較寬的褐色縱條紋，中間夾有1條細的灰線。鞘翅上有3段深褐色縱條紋，中間的1段縱條紋最長。足細長，腿節(jié)稍粗，上有小齒（圖2a）。老熟幼蟲：體長8～10?mm，深綠色，頭黑色，背部中央具有1條從頭部延伸至尾部的深白色背線，兩側(cè)各有1條淺白色縱線。幼蟲無足，行動是靠腹面剛毛的瘤狀突迅速爬行，幼蟲具假死習性，受驚后蜷縮成“C”形（圖2d）。幼蟲易與三葉草葉象甲H.punctata幼蟲混淆，但三葉草葉象甲幼蟲頭為棕褐色且背部中央白線邊緣有粉紅斑點（圖2g）。

成蟲和幼蟲均可取食為害紫云英。成蟲取食紫云英葉片或莖稈并產(chǎn)卵于莖稈內(nèi)。初孵幼蟲在莖稈中蛀食為害，形成黑色蟲道;2齡時鉆出莖稈取食葉芽和花芽，3齡和4齡為害最為嚴重，大量取食枝葉，僅殘留葉脈，影響紫云英光合作用、干物質(zhì)積累及其固氮效果，使紫云英產(chǎn)量及其生態(tài)效應(yīng)大幅降低（圖1a）。

2.2?DNA條形碼鑒定與分析

對測序的3條序列進行校正，得到長度均為658?bp的序列，在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行BLAST發(fā)現(xiàn)，象甲NL1、NL3與數(shù)據(jù)庫中苜蓿葉象甲的COⅠ基因序列（登錄號：KY796624）相似性為100%;而象甲NL2與數(shù)據(jù)庫中另一個苜蓿葉象甲的序列（登錄號：KY796640）相似性為100%;BLAST結(jié)果進一步證實了本研究中的象甲為苜蓿葉象甲（圖3）。

2.3?分子系統(tǒng)進化分析

苜蓿葉象甲NL1和NL3與Hypera?conmaculata、H.striata、H.viciae、H.venusta、Brachypera?dauci的COⅠ基因核苷酸序列的相似性依次均為90.43%、87.39%、89.67%、87.69%、85.71%，遺傳距離分別均為0.104、0.144、0.112、0.137、0.161;而NL2與這5種近緣種的COⅠ基因核苷酸序列的相似性依次為91.19%、88.45%、90.12%、89.51%和86.47%，遺傳距離分別為0.095、0.129、0.107、0.116、0.152（表1）。而NL1和NL3間的遺傳距離和相似性分別為0和100%，且兩者與NL2的遺傳距離和相似性分別均為0.061和94.22%，NL1、NL2和NL3的兩兩間遺傳距離均遠小于其與5種近緣種的，而相似性均遠大于其與5種近緣種的（表1）。

1）?表中左下數(shù)據(jù)為8個象甲COⅠ基因序列的平均遺傳距離，右上為8個象甲COⅠ基因序列的相似性（%）。

The?data?in?the?lower?left?half?of?the?table?are?the?average?genetic?distance?of?the?COⅠ?gene?sequences?of?eight?weevils.?The?data?in?the?upper?right?half?of?the?table?show?the?similarity?（%）?of?the?COⅠ?gene?sequences?of?eight?weevils.

采用NJ法對本研究中3條苜蓿葉象甲的COⅠ基因序列與NCBI數(shù)據(jù)庫中的4條苜蓿葉象甲COⅠ基因序列和5條近緣種COⅠ基因序列構(gòu)建系統(tǒng)進化樹（圖4）。由系統(tǒng)進化樹可知，本研究的苜蓿葉象甲與同屬的近緣種明顯地區(qū)分開來，本研究的苜蓿葉象甲與其他學者提交的苜蓿葉象甲單獨聚為一大支，這進一步表明本研究的象甲為苜蓿葉象甲。此外，有趣的是本研究的3條苜蓿葉象甲序列聚在不同支上，說明本研究采集的苜蓿葉象甲可能存在明顯的種內(nèi)分化（圖4）。

本研究中3條苜蓿葉象甲COⅠ基因的核苷酸序列比對結(jié)果顯示NL1、NL2、NL3三者間的相似性為98.08%，3條序列間共存在38個單核苷酸多態(tài)性（single?nucleotide?polymorphism，?SNP）位點，所有位點總突變數(shù)為25，其中發(fā)生轉(zhuǎn)換的位點數(shù)為20，發(fā)生顛換的位點數(shù)為5，轉(zhuǎn)換/顛換偏倚率為3.8，所有序列堿基平均含量分別為A?30.9%、G?15.6%、C?16.1%、T?37.4%（圖5）。

本研究中3條658?bp的苜蓿葉象甲COⅠ基因編碼的氨基酸序列比對結(jié)果顯示序列均編碼219個氨基酸，相似性高達99.85%，其中在第166個氨基酸位點出現(xiàn)了變異，NL1與NL3在該位點編碼蘇氨酸（threonine），NL2在該位點編碼丙氨酸（alanine）。

3?討論

3.1?警惕苜蓿葉象甲在我國進一步傳播為害

氣候變化顯著影響苜蓿葉象甲在我國的適生區(qū)變化［9］，2010年苜蓿葉象甲在我國適生區(qū)為西北、東北、華北、華中和西南等大部分地區(qū)，2020年其適生范圍已西擴至西藏中南部，高度適生范圍南擴至33°N，全國非適生區(qū)范圍減少5.02%。作物種植結(jié)構(gòu)也能夠?qū)οx種群分布產(chǎn)生巨大影響［10］。在國家綠肥產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系的大力示范推廣下，南方稻田種植紫云英的面積逐年擴大，這在一定程度上為某些植食性昆蟲提供了食物資源［1112］。盡管周丹等［18］和浦杏琴等［19］分別報道了苜蓿葉象甲為害南方稻田紫云英及其防治方法，但均側(cè)重于防治藥劑的篩選，而忽視了害蟲的物種鑒定與種內(nèi)分化。由于苜蓿葉象甲與同屬的H.temperei、H.postica、三葉草葉象甲等在形態(tài)特征上極為相似，易出現(xiàn)識別錯誤［1617］。特別是目前已有報道均指出我國苜蓿葉象甲主要分布在新疆、甘肅、內(nèi)蒙古等西北牧區(qū)［7，9］。因此，明確南方稻田紫云英上相似物種十分必要。本研究通過形態(tài)學與分子鑒定相結(jié)合的方式首次明確了我國南方稻田紫云英重發(fā)害蟲為苜蓿葉象甲，確定了苜蓿葉象甲已經(jīng)傳入我國南方并嚴重為害綠肥作物，拓展了對我國苜蓿葉象甲地理分布的認識，首次發(fā)現(xiàn)我國南方苜蓿葉象甲存在明顯的種內(nèi)分化。

3.2?警惕苜蓿葉象甲對豆科綠肥作物造成危害與損失

苜蓿葉象甲是一種重要的畜牧業(yè)害蟲，主要為害苜蓿、紅三葉草Trifolium?pratense等豆科植物、也可取食禾本科、十字花科、菊科、薔薇科等植物，還能為害玉米Zea?mays和馬鈴薯Solanum?tuberosum等主糧作物［9］。歐洲和美國等西方國家主要指出了苜蓿葉象甲是苜蓿的重要害蟲，很少報道對紫云英的危害。而在日本，1982年發(fā)現(xiàn)苜蓿葉象甲為害紫云英，隨后迅速傳播成為紫云英的重要害蟲，嚴重威脅當?shù)氐姆涿郛a(chǎn)業(yè)［1，20］。根據(jù)浦杏琴等［19］的調(diào)查結(jié)果可知，2022年3月江蘇武進地區(qū)苜蓿葉象甲已嚴重為害紫云英和救荒野豌豆Vicia?sativa等。這恰好與同年3月作者在安徽南陵紫云英田觀察到的現(xiàn)象一致（圖1），表明苜蓿葉象甲已在我國南方綠肥作物田中廣泛分布并取食為害綠肥作物。這警示苜蓿葉象甲可能已成為豆科綠肥作物的重要害蟲，嚴重威脅綠肥生產(chǎn)及其應(yīng)用，生產(chǎn)上需加以重視。

3.3?加強苜蓿葉象甲傳播途徑與監(jiān)測預(yù)警研究

苜蓿葉象甲起源于歐洲、亞洲和非洲等舊大陸，而后通過多種方式引入美洲，現(xiàn)已遍布全球多個國家［2］。依據(jù)線粒體上兩段基因序列（COⅠCOⅡ、CyBND1）的差異，苜蓿葉象甲可以分為Western、Eastern、Egyptian、Xinjiang等4個品系，且品系間難以依靠形態(tài)特征區(qū)分［2122］。美國已分布有Western、Eastern和Egyptian品系，均由歐洲或亞洲引入;日本主要有Western和Egyptian品系，在這些國家中既有單一品系獨存的地域，也有兩個品系共存的地區(qū)［2324］。本研究的系統(tǒng)進化樹表明我國紫云英田苜蓿葉象甲存在明顯的種內(nèi)分化，存在38個SNP位點，其中有25個為突變位點。通過對品系鑒定基因COⅠCOⅡ和CyBND1的測序與比對，我們發(fā)現(xiàn)本研究中NL1和NL3為Western品系，NL2為Egyptian品系（未發(fā)表），由于本次采樣的樣品較少和樣點單一，我國可能還存在未被發(fā)現(xiàn)的品系。值得注意的是，本研究在安徽南陵取樣的苜蓿葉象甲不是我國Xinjiang品系，表明其并非來源于新疆地區(qū)。由于苜蓿葉象甲在我國適生區(qū)廣袤，而這些適生區(qū)中是否存在苜蓿葉象甲及其品系組成等情況均不清楚，導致無法推測我國南方紫云英田中苜蓿葉象甲的來源地，可能源于國內(nèi)其他地區(qū)也可能來源于境外。但依據(jù)Flanders［25］和李新芳等［26］的報道，并結(jié)合近年來我國苜蓿進口量逐年攀升等背景，推測本研究中NL2極大可能是由國外傳入。因此，探明全國適生區(qū)內(nèi)苜蓿葉象甲的種群狀況對掌握該蟲的地理分布與擴散規(guī)律至關(guān)重要。同時要加強苜蓿葉象甲的監(jiān)測預(yù)警，尤其在新疆、甘肅、內(nèi)蒙古等高度適生區(qū)，需要進一步加強對其監(jiān)測預(yù)警體系的建設(shè)。

3.4?加強苜蓿葉象甲的綜合防治

目前，我國南方紫云英已經(jīng)出現(xiàn)苜蓿葉象甲局地暴發(fā)為害的趨勢，因此，豆科綠肥作物亟須進行害蟲監(jiān)測與防治。具體防治方法可參考有關(guān)文獻報道。1）化學防治：在低齡幼蟲發(fā)生高峰期，每667?m2施用10%聯(lián)苯菊酯乳油20?mL，防治效果可達100%［1819］;或者采取2.5%高效氯氟氰菊酯乳油1?500倍、2.5%溴氰菊酯乳油2?000倍、48%毒死蜱乳油1?000倍、4.5%高效氯氰菊酯乳油1?500倍交替噴霧防治［27］。2）生物農(nóng)藥防治：10%多殺霉素懸浮劑噴霧，施藥后3?d防效可達80%以上［28］。3）植物源藥劑防治：30%茶皂素水劑，施藥后3?d防效可達75%以上［28］。注意用藥時間，盡量提前施藥以減少對天敵昆蟲的負面影響［29］，藥劑應(yīng)當交替使用，嚴禁在同一地塊連續(xù)使用同種農(nóng)藥，以減緩抗藥性的產(chǎn)生［30］。

在生物防治方面，雖然有很多苜蓿葉象甲的寄生性天敵和病原菌，如短窄象甲姬蜂Bathyplectes?anurus［15］、苜蓿葉象姬蜂B.?curculionis［15］、姬蜂B.?stenostigma［15］、苜蓿嚙小蜂Oomyzus?incertus［31］、蟲瘟霉Zoophthora?phytonomi［32］、白僵菌Beauveria?bassiana［33］、蘇云金芽胞桿菌Bacillus?thuringiensis［34］等，但苜蓿葉象甲對這些生防因子的抵抗力因品系不同可能截然相反［35］。所以，探明全國苜蓿葉象甲的品系分布對其精準防治具有直接的現(xiàn)實意義。能夠依據(jù)當?shù)剀俎Ｈ~象甲的品系構(gòu)成情況針對性地釋放生防因子，達到節(jié)本增效的目的。

參考文獻

［1］?OKUMURA?M.?Alfalfa?weevil?（Hypera?postica）??a?serious?pest?of?Chinese?milk?vetch?［J］.?Honeybee?Science，?1991，?12：?145150.

［2］?HSIAO?T?H.?Geographic?and?genetic?variation?among?alfalfa?weevil?strains?［M］∥?KIM?K?C，?MCPHERON?B?A.?Evolution?of?insect?pests：?pattern?of?variation.?New?York：?John?Wiley?&?Sons?Inc.，?1993：?311327.

［3］?TITUS?E?G.?The?alfalfa?weevil?［M］.?Bulletin?of?the?Utah?Agricultural?Experiment?Station，?1910，?110：?1772.

［4］?THOMASPATRICK?K.?Population?dynamics，?mortality?factors?and?pest?status?of?alfalfa?weevil?in?Virginia?［D］.?Virginia：?The?University?of?Virginia，?2000：?14.

［5］?IVAN?J?T，?GUTIERREZ?A?P，?LYONS?J?M.?Integrated?pest?management?for?alfalfa?hay?［M］.?California：?University?of?California，?1981：?56．

［6］?EDMINSTER?C，?MILLER?D，?MOUTRY?J.?American?alfalfa?［J］.?Animal?Science?Veterinary?Medicine，?1989，?18（4）：5861.

［7］?張學祖.?新疆苜蓿害蟲及其綜合防治［J］.?新疆農(nóng)業(yè)科學，?1962，?5（4）：?160163.

［8］?張良，?張滋林，?趙莉.?苜蓿葉象甲的生活習性及防治［J］.?新疆農(nóng)業(yè)科技，?2010（6）：?44.

［9］?吳志剛，?倪文龍，?張澤華，?等.?基于CLIMEX的苜蓿葉象甲在我國的適生區(qū)分析［J］.?中國農(nóng)業(yè)大學學報，?2011，?11（6）：?99103.

［10］陸宴輝，?劉楊，?楊現(xiàn)明，?等.?中國農(nóng)業(yè)害蟲綜合防治研究進展：2018年－2022年［J］.?植物保護，?2023，?49（5）：?145166.

［11］曹衛(wèi)東，?包興國，?徐昌旭，?等.?中國綠肥科研60年回顧與未來展望［J］.?植物營養(yǎng)與肥料學報，?2017，?23（6）：?14501461.

［12］江幸福，?劉悅秋，?張蕾，?等.?綠肥害蟲發(fā)生與防控研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢［J］.?植物保護，?2018，?44（5）：?6168.

［13］張澤華，?李彥忠，?涂雄兵，?等.?苜蓿病蟲害識別與防治［M］.?北京：?中國農(nóng)業(yè)科學技術(shù)出版社，?2018.

［14］FOLMER?O，?BLACK?M，?HOEH?W，?et?al.?DNA?primers?for?amplification?of?mitochondrial?cytochrome?coxidase?subunit?Ⅰ?from?diverse?metazoan?invertebrates?［J］.?Molecular?Marine?Biology?and?Biotechnology，?1994，?3（5）：?294299.

［15］PELLISSIER?M?E，?NELSON?Z，?JABBOUR?R.?Ecology?and?management?of?the?alfalfa?weevil?（Coleoptera：?Curculionidae）?in?Western?United?States?alfalfa?［J/OL］.?Journal?of?Integrated?Pest?Management，?2017，?8（1）：?5.?DOI：?10.1093/jipm/pmw018.

［16］GERMANN?C.?Hypera?temperei?Hoffmann，?1958??first?discovery?of?the?western?alpine?element?in?the?Swiss?Alps?with?biological?details，?and?new?morphological?insights?（Coleoptera，?Curculionidae）?［J］.?Alpine?Entomology，?2021，?5：?512.

［17］Department?of?Crop?Sciences.?Insect?factsheets：?alfalfa?weevil?［EB/OL］.?（20150817）?［20231010］.?http：∥extension.cropsciences.illinois.edu/fieldcrops/insects/alfalfa_weevil/.

［18］周丹，?盛玉蓮，?朱龍粉，?等.?固氮作物紫云英苜蓿葉象甲藥劑篩選試驗初探［J］.?現(xiàn)代農(nóng)藥，?2021，?20（2）：?5961.

［19］浦杏琴，?凃榮文，?朱龍粉.?武進地區(qū)苜蓿葉象甲的發(fā)生及防治藥劑篩選試驗初報［J］.?上海農(nóng)業(yè)科技，?2022（6）：?137139.

［20］FAYASHIKAWA?S.?鹿児島県におけるアルファルファダコゾウムシの発生動向［J］.?植物防疫，?1999，?53（10）：?419422.

［21］ERNRY?S?J，?PRUESS?K?P，?DANIELSON?S?D，?et?al.?Molecular?differentiation?of?alfalfa?weevil?strains?（Coleoptera：?Curculionidae）?［J］.?Annals?of?the?Entomological?Society?of?America，?1996，?89（6）：?804811.

［22］BTTGER?J?A?A，?BUNDY?C?S，?OESTERLE?N，?et?al.?Phylogenetic?analysis?of?the?alfalfa?weevil?complex?（Coleoptera：?Curculionidae）?in?North?America?［J］.?Journal?of?Economic?Entomology，?2013，?106（1）：?426436.

［23］BUNDY?C?S，?SMITH?P?F，?ENGLISH?L?M，?et?al.?Strain?distribution?of?alfalfa?weevil?（Coleoptera：?Curculionidae）?in?an?intergrade?zone?［J］.?Journal?of?Economic?Entomology，?2005，?98（6）：?20282032.

［24］KUWATA?R，?TOLUDA?M，?YAMAGUCHI?D，?et?al.?Coexistence?of?two?mitochondrial?DNA?haplotypes?in?Japanese?populations?of?Hypera?postica?（Col.，?Curculionidae）?［J］.?Journal?of?Applied?Entomology，?2005，?129（4）：?191197.

［25］FLANDERS?K?L，?RADCLIFFE?B.?Alfalfa?IPM?［EB/OL］.?（20130304）?［20231010］.?http∥ipmworld.umn.edu/chapters/flanders.htm.