多花黃精白絹病病原菌鑒定及室內藥劑篩選

摘要：" 為明確多花黃精白絹病病原菌的種類及生物學特性，篩選適宜的殺菌劑，本研究從重慶市南川區采集多花黃精白絹病病株，采用菌核分離法，分離純化得到多花黃精白絹病病原菌菌株BJB，依據柯赫氏法則驗證其致病性，通過形態學及分子生物學鑒定病原菌種類，通過生物學試驗明確病原菌的適宜生長條件，并通過室內藥效試驗篩選適宜殺菌劑。結果表明，本研究分離純化得到的白絹病病原菌菌株BJB為羅耳阿太菌（Athelia rolfsii）。多花黃精白絹病病原菌的適宜生長條件為馬鈴薯蔗糖瓊脂培養基（PSA），溫度25 ℃，pH值4，碳源蔗糖，氮源硝酸鈉，暗培養。多花黃精白絹病病原菌菌絲和菌核的致死溫度分別為45 ℃和55 ℃。殺菌劑戊唑醇對多花黃精白絹病病原菌的抑制效果最好，半抑制濃度（EC50）為0.420 μg/mL；咯菌腈、萎銹靈和嘧菌酯的抑制效果其次，EC50分別為1.750 μg/mL、1.991 μg/mL和2.940 μg/mL。本研究結果為多花黃精白絹病病害的診斷與防治提供依據。

關鍵詞：" 多花黃精；白絹病；病原菌；羅耳阿太菌

中圖分類號：" S435.672""" 文獻標識碼：" A""" 文章編號：" 1000-4440（2024）12-2244-10

收稿日期：2024-03-16

基金項目：重慶市基本科研業務專項（2023JK70-2512）；重慶市技術創新與應用發展專項重點項目（CSTB2024TIAD-KPX0049）；重慶市科衛聯合中醫藥科研項目（2019zy023281）；重慶市衛生健康委員會中醫藥科技項目（zy201702147）

作者簡介：韓" 鳳（1980-），女，重慶人，本科，正高級農藝師，主要從事藥用植物栽培研究。（E-mail）hanfengasdf@126.com

通訊作者：宋旭紅，（E-mail）songxuhong@cqacmm.com

韓" 鳳，黃" 靖，章文偉，等. 多花黃精白絹病病原菌鑒定及室內藥劑篩選［J］. 江蘇農業學報，2024，40（12）：2244-2253.

doi：10.3969/j.issn.1000-4440.2024.12.007

Pathogen identification and indoor fungicide screening of southern blight of Polygonatum cyrtonema

HAN Feng1，" HUANG Jing2，" ZHANG Wenwei1，" LIN Maoxiang1，" XIAO Zhong1，" SONG Xuhong2

（1.Chongqing Institute of Medical Plant Cultivation/Chongqing Engineering Research Center for Standardized Production of Genuine Medicinal Materials， Chongqing 408435， China;2.Chongqing Academy of Chinese Materia Medica， Chongqing 400065， China）

Abstract：" In order to clarify the species and biological characteristics of the pathogen of southern blight of Polygonatum cyrtonema and screen suitable fungicides， the diseased plants of Polygonatum cyrtonema were collected from Nanchuan District of Chongqing City， and the pathogen strain BJB of Polygonatum cyrtonema was isolated and purified by sclerotia separation method. The pathogenicity was verified according to Koch’s rule. The species of pathogenic bacteria were identified by morphology and molecular biology. The suitable growth conditions of pathogenic bacteria were determined by biological test， and the suitable fungicides were screened by indoor efficacy test. The results showed that the strain BJB isolated and purified in this study was Athelia rolfsii. The suitable growth conditions of the pathogen were as follows：potato sucrose agar （PSA） medium， temperature 25 ℃， pH 4， sucrose as carbon source， sodium nitrate as nitrogen source， and dark culture. The lethal temperature of mycelium and sclerotium of the pathogen was 45 ℃ and 55 ℃， respectively. The fungicide tebuconazole showed the best inhibitory effect against the pathogen， and the median effective concentration （EC50） was 0.420" μg/mL. The EC50 values for fludioxonil， triadimefon and azoxystrobin were 1.750 μg/mL， 1.991 μg/mL and 2.940 μg/mL， respectively. The results of this study provide a basis for the diagnosis and prevention of southern blight disease of Polygonatum cyrtonema.

Key words：" Polygonatum cyrtonema;southern blight;pathogen;Athelia rolfsii

多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua）又名老虎姜、山姜、仙人余糧，是一種多年生草本植物。多花黃精根莖富含糖類、酚類、黃酮類、皂苷類和氨基酸等活性成分及礦質元素，是正品中藥材黃精的來源之一，具有抗氧化、抗疲勞、抗腫瘤、消炎、抗衰老、降血糖和調節免疫等藥理作用。多花黃精生產中常見的病害主要有根腐病、炭疽病、莖腐病、葉枯病和白絹病等。受栽培制度及氣候變化的影響，重慶地區的多花黃精生產中白絹病的危害呈多發、加重趨勢，嚴重影響當地多花黃精藥材的品質和產量。多花黃精白絹病是一種傳染性極強的真菌性病害。田間調查發現，重慶地區一般地塊發病率為5%～12%，而地勢低洼、排水不良的酸性地塊發病率可高達30%以上。每年5-7月為重慶地區多花黃精白絹病的高發期。

引起植物白絹病的病原菌主要是小菌核屬（Sclerotium）病原菌，包括有性型羅耳阿太菌（Athelia rolfsii）和無性型齊整小核菌（Sclerotium rolfsii Sacc.）。鑒于多花黃精白絹病病原菌的鑒定分類和高效防治殺菌劑篩選缺乏研究的現狀，本研究通過采集具有典型白絹病癥狀的多花黃精植株，進行病原菌分離及其致病性檢測，結合病原菌形態特征和內轉錄間隔區（ITS）堿基序列以及SSU、LSU基因堿基序列分析，鑒定多花黃精白絹病病原菌種類，并通過不同培養基、pH、碳源、氮源、光照、溫度對病原菌生長的影響試驗，明確多花黃精白絹病病原菌的生物學特性，并測定不同殺菌劑對該病原菌的抑制效果，以期為多花黃精白絹病的診斷和科學防治提供依據。

1" 材料與方法

1.1" 試驗材料

1.1.1" 培養基及其配制" 馬鈴薯蔗糖瓊脂培養基（PSA）由蔗糖20 g、馬鈴薯200 g、瓊脂20 g、水1 000 mL配制得到；燕麥瓊脂培養基（OA）由燕麥60 g、瓊脂18 g、水1 000 mL配制得到；水瓊脂培養基（WA）由瓊脂20 g、水1 000 mL配制得到；沙氏瓊脂培養基（SDA）由蛋白胨10 g、葡萄糖40 g、瓊脂15 g、水1 000 mL配制得到；玉米瓊脂培養基（CMA）由玉米粉30 g、瓊脂20 g、水1 000 mL配制得到；馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA）由葡萄糖20 g、馬鈴薯200 g、瓊脂20 g、水1 000 mL配制得到；察氏瓊脂培養基（Czapek）由硝酸鈉3.00 g、磷酸氫二鉀1.00 g、硫酸鎂0.50 g、氯化鉀0.50 g、硫酸亞鐵0.01 g、蔗糖30.00 g、瓊脂15.00 g、水1 000 mL配制得到。

1.1.2" 不同濃度藥劑的制備" 供試藥劑包括98%萎銹靈（湖北津樂達化工有限公司產品）、96%嘧菌酯（湖北康寶泰精細化工有限公司產品）、98%咯菌腈（瑞士先正達作物保護有限公司產品）、97%戊唑醇（鄭州凱瑞農化產品有限公司產品）、96%異菌脲（江蘇輝豐農化股份有限公司產品）和98%啶酰菌胺（德國巴斯夫歐洲公司產品）6種。萎銹靈原藥用甲醇溶解，其余5種原藥均用丙酮溶解，配置成質量濃度為1 000 mg/L的母液，于4 ℃保存備用。 為測定6種藥劑室內毒力，對6種原藥進行稀釋，稀釋后各藥劑的質量濃度見表1。

1.2" 方法

1.2.1" 病株樣品采集與病原菌分離" 2020年6月于重慶市南川區三泉鎮（29°08′23.36″N，107°13′6.55″E）采集患有白絹病的多花黃精植株，參照王雅等方法進行病原菌分離。用無菌水沖洗病株根莖4～5次，吸干表面水分，將洗凈的病株根莖切成0.5 cm×0.5 cm的小塊，放入帶有無菌濾紙的培養皿中，加入適量無菌水保濕，室溫培養產生菌核。收集菌核并用75%乙醇消毒20～30 s，再用0.1% HgCl2消毒2～4 min，最后用無菌水沖洗5次。將沖洗后的菌核放在無菌紙上吸干表面水分，接入盛有PDA培養基的培養皿中央，在25 ℃條件下暗培養，待菌核萌發產生菌絲后，挑取邊緣菌絲，再接種到PDA培養基上進行純化培養，得到純化病原菌株。

1.2.2" 病原菌致病性測定" 選取3年生、長勢一致的健康多花黃精種苗，參考劉雨等方法，在植株葉片、莖稈、根莖上無傷接種直徑為0.5 cm菌餅，以浸有無菌水的棉球保濕，置于BSG-400型光照培養箱（上海博迅醫療生物儀器有限公司產品）中，培養條件設置為光照時間16 h/d、光照度1 500 lx、溫度25 ℃、相對濕度75%。以接種空白PDA培養基作為對照，每處理分別接種5株。依據柯赫氏法則，待植株發病后，采集病健交界處組織進行再次分離、純化，通過形態鑒定和顯微鏡觀察分離菌株與接種菌株的菌落形態、菌核大小等特征是否一致來確定致病菌。

1.2.3" 病原菌形態學鑒定" 將上述病原菌接種到PDA培養基上， 25 ℃暗培養3 d，采用十字交叉法測量菌落直徑，觀察菌落形態和菌核形成及其顏色變化，統計菌核數量，并在Olympus CX41顯微鏡（日本奧林巴斯株式會社產品）下觀察菌絲形態并進行初步分類。

1.2.4" 病原菌分子生物學鑒定" 病原菌在PDA培養基中培養3 d后，使用D3690真菌基因組提取試劑盒（廣州市百菱生物科技有限公司產品）提取病原菌DNA。選取ITS引物ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCG G-3′）/ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）、SSU引物NS1（5′-CACCTGGTTGTACCTGCCAG-3′）/NS6（5′-AGCTTGATCCTTCTGCAGGTTCACCTAC-3′）、LUS引物LROR（5′-GTACCCGCTGAACTTAAGC-3′）/LR5（5′-ATCCTGAGGGAAACTTC-3′）對病原菌基因組DNA進行PCR擴增。PCR擴增體系20.0 μL：DNA模板1.0 μL，2×Hieff robust PCR master mix10.0 μL，上下游引物各0.5 μL，ddH2O 8.0 μL。擴增程序：94 ℃預變性4 min；94 ℃變性45 s，55 ℃（ITS引物）/ 50 ℃（SSU引物）/50 ℃（LSU引物）退火45 s，72 ℃延伸90 s，共35個循環；72 ℃延伸10 min。引物合成及測序均由重慶擎科生物公司完成。將測序結果上傳NCBI（美國國家生物信息中心），獲得序列號，并在NCBI數據庫（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）中進行BLAST比對；下載近源種的ITS堿基序列、SSU、LUS基因堿基序列，使用MEGA 7.0軟件進行同源性比對，以Diaporthe amygdale（NCBI登錄號分別為KC343019、MN273786、MH875666）為外源，設置自展值（Bootstrap）為1 000，采用鄰接法（Neighbour-joining，NJ）構建系統發育樹，確定多花黃精白絹病菌株的分類地位。

1.2.5" 病原菌生物學特性測定

1.2.5.1" 培養基類型對病原菌生長的影響" 用無菌打孔器取5 mm的菌餅，分別接種于PSA、OA、WA、SDA、CMA、PDA和Czapek培養基（培養皿直徑9 cm）中， 25 ℃培養3 d，用十字交叉法測量菌落直徑。每處理5次重復。

1.2.5.2" 培養基pH值對病原菌生長的影響" 以PDA為基礎培養基，用1 mol/L NaOH和HCl溶液調節培養基pH，得到pH值為3、4、5、6、7、8、9、10的PDA培養基。同樣用無菌打孔器取5 mm的菌餅，分別接種于pH值為3、4、5、6、7、8、9、10的PDA培養基中， 25 ℃培養3 d，用十字交叉法測量菌落直徑。每處理5次重復。

1.2.5.3" 培養基碳源與氮源類型對病原菌生長的影響" 以Czapek培養基為基礎培養基，用等量甘露醇、葡萄糖、麥芽糖、可溶性淀粉、果糖、乳糖替代培養基中的蔗糖作為碳源，得到不同碳源的Czapek培養基；用等量乙酸銨、甘氨酸、氯化銨、尿素、硫酸銨、硝酸鉀替代培養基中的硝酸鈉作為氮源，得到不同氮源的Czapek培養基。然后，用無菌打孔器取5 mm的菌餅，分別接種于不同碳源的Czapek培養基和不同氮源的Czapek培養基，25 ℃培養3 d，用十字交叉法測量菌落直徑。每處理5次重復。

1.2.5.4nbsp; 溫度對病原菌生長的影響" 用無菌打孔器取5 mm的菌餅，接種于PDA培養基中，分別以5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃和35 ℃條件下培養3 d后，用十字交叉法測量菌落直徑。每處理5次重復。

1.2.5.5" 光周期對病原菌生長的影響" 用無菌打孔器取5 mm的菌餅，接種于PDA培養基中，分別以0 h/d（全暗）、12 h/d（半明半暗）和24 h/d（全明）3種光周期25 ℃恒溫培養3 d，用十字交叉法測量菌落直徑。每處理5次重復。

1.2.5.6" 病原菌致死溫度測定" 采用試管水浴法測定菌絲和菌核的致死溫度。試管中放入10個直徑0.5 cm菌餅，分別置于41 ℃、42 ℃、43 ℃、44 ℃、45 ℃、46 ℃、47 ℃、48 ℃、49 ℃和50 ℃的恒溫水浴鍋中預熱1 min后開始計時，10 min后取出立即冷卻降溫，然后取出菌餅表面消毒后置于PDA培養基中25 ℃培養5 d，觀察菌絲是否生長。同樣，試管中放入大小一致的10個菌核，分別置于45 ℃、47 ℃、49 ℃、51 ℃、53 ℃、55 ℃、57 ℃、59 ℃的恒溫水浴鍋中預熱1 min后開始計時，10 min后取出立即冷卻降溫，然后取出菌核，表面消毒后置于PDA培養基中25 ℃培養5 d，觀察菌核是否生長，進而確定菌絲和菌核的致死溫度。

1.2.6" 室內藥劑毒力測定" 無菌條件下，取1 mL不同質量濃度不同類型殺菌劑藥液（表1）分別加入14 mL PDA培養基，混勻后置于直徑9 cm的無菌培養皿中。然后在不同質量濃度藥劑的PDA培養基中接入直徑0.5 cm的菌餅，以不加藥劑的PDA培養基作對照，25 ℃暗培養3 d后測量各處理的菌落直徑。每處理3次重復。抑制率按下式計算：

抑制率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100%。

1.3" 數據分析

利用Excel 2016軟件進行數據統計以及圖、表繪制，利用SPSS 20.0軟件進行處理間差異顯著性分析及毒力回歸方程的擬合和半抑制濃度（EC50）的計算。

2" 結果與分析

2.1" 多花黃精白絹病癥狀

生產中多花黃精實生苗與根莖繁殖的植株可感染白絹病，主要危害根莖和莖基部。高溫高濕條件下，實生苗感染病害后，葉片由綠色轉變為褐色，葉片表面呈現云紋狀斑點，逐漸擴展到整個葉片，可見褐色的菌核。土壤表面常長出一層白色絹絲狀菌絲體，常形成許多大小不一褐色或棕褐色的菌核或子實體（圖1）。根莖繁殖植株感病后，根莖呈黃褐色斑點，地上葉片開始黃化，隨著病情發展，葉片病斑不斷變大，后期呈黃褐色、不規則的病斑，稍凹陷，葉片從下往上逐漸變黃，莖稈枯萎，菌絲不斷往下侵染根部，最后整個根莖腐爛，全株死亡。

2.2" 病原菌致病性

將純化好的菌株BJB回接接種到健康的多花黃精植株葉片、莖稈和根莖上，在25 ℃下保濕培養。接種后3 d出現病狀，葉片接種部位出現水漬狀斑，組織表面可見緊貼的白色菌絲；接種后5 d葉片穿孔（圖2A）；接種后7 d莖稈被侵染部位變為褐色（圖2B），中間灰色，凹陷；接種后8 d，根基部呈水漬狀腐爛，褐色（圖2C），有惡臭味，且很容易將植株從花盆中拔起，最后整個植株枯死（圖2D）。癥狀與田間自然病株癥狀相同，而對照植株無明顯病癥（圖2E）。接種后15 d采集病健交接組織和對照進行再次分離、純化病原菌，將分離菌株在25 ℃培養3 d觀測菌落形態特征，其與接種菌株一致，培養10 d菌核形態與接種菌株的也一致，對照處理未獲得菌株。因此，確定菌株BJB為多花黃精白絹病的致病菌。

2.3" 病原菌鑒定

2.3.1" 形態學鑒定" 菌株BJB在25 ℃培養1 d，菌落開始萌發，培養5 d，長滿整個培養基，菌落呈圓形（圖3A），背面白色（圖3B），菌絲呈疏松的白色羽毛狀，從中間向四周輻射狀生長（圖3A），培養7 d形成近球形或橢圓形的白色菌核（圖3C），成熟后菌核呈褐色或棕褐色（圖3D） ，表面具有光澤。每皿培養基可產生大小不一的菌核8～23個，菌核直徑0.4～2.2 mm。顯微鏡下菌絲有橫膈膜（圖3E），直徑5.4～7.2 μm，未見分生孢子。

2.3.2" 分子生物學鑒定" 以菌株BJB基因組DNA為模板，采用ITS引物以及SSU、LSU引物對菌株進行擴增，擴增產物測序后得到的序列上傳至NCBI（美國國家生物信息中心），GenBank登錄號依次為OK337831、OK337681和OK337680。菌株BJB與Althelia rolfsii菌株的同源性較高，菌株BJB的ITS引物以及SSU、LSU引物的擴增序列與Althelia rolfsii菌株的ITS引物以及SSU和LSU引物的擴增序列（登錄號分別為：MH858139、MW617882和MH869724）的相似度分別為100.00%（558/558）、100.00%（1 312/1 312）和99.77%（875/877）。菌株BJB與幾個Althelia rolfsii菌株聚于同一分支（圖4），因此，綜合形態學特征和分子生物學分析結果，本研究認為多花黃精白絹病致病菌BJB為羅耳阿太菌（Athelia rolfsii）。

2.4" 病原菌生物學特性

2.4.1" 培養基對病原菌生長的影響" 不同培養基中病原菌生長速度存在顯著差異（圖5A）。PSA培養基中病原菌生長最快，培養3 d菌落直徑可達72.33 mm，顯著高于其他培養基；其次為PDA培養基，菌落直徑為68.3 mm；再次是SDA培養基和OA培養基，兩者間差異不顯著。WA和Czapek培養基中，病原菌生長較緩慢，培養3 d菌落直徑僅為39.33 mm和33.5 mm，顯著低于其他培養基。

2.4.2" pH值對病原菌生長的影響" 培養基pH值3～10時，病原菌培養3 d菌落直徑均大于接種時的菌斑直徑5 mm，說明培養基pH值3～10范圍內，病原菌均能生長（圖5B）。培養基pH值為4時，病原菌培養3 d菌落直徑達到78.17 mm，顯著大于其他處理。pH為6、5、3和7處理的菌落直徑次之，分別為73.00 mm、72.88 mm、71 mm、70.30 mm，且這4種處理間的差異不顯著。培養基pH 值為9和10時，菌落直徑分別為61.00 mm、59.67 mm，顯著低于其他處理。上述結果說明，偏酸性環境有利于病原菌的生長，堿性環境下，病原菌的生長會受到抑制。

2.4.3" 碳、氮源對病原菌生長的影響" 供試的7種碳源培養基上，病原菌25 ℃培養3 d菌落直徑的變化如圖5C所示。從圖中可以看出，不同碳源培養基中，病原菌均能生長。其中，以蔗糖或甘露醇為碳源時，病原菌培養3 d菌落直徑較大，分別達53.00 mm和52.50 mm，顯著高于其他碳源。其次為果糖、麥芽糖、乳糖、葡萄糖等碳源處理，而以可溶性淀粉為碳源的處理菌落直徑最小，僅為18.17 mm。不同氮源培養基中，病原菌25 ℃培養3 d菌落直徑的變化如圖5D所示。從圖中可以看出，供試的7種氮源培養基中，病原菌均能生長。其中，以硝酸鈉或甘氨酸為氮源時，病原菌培養3 d菌落直徑較大，分別為53.00 mm和50.67 mm，顯著高于其他氮源；其次為氯化銨、硝酸鉀、硫酸銨和尿素等氮源處理，菌落直徑分別為38.00 mm、33.50 mm、32.00 mm、31.17 mm；以乙酸銨為氮源的培養基中，病原菌菌落直徑最小，僅為13.17 mm。上述結果說明不同的碳源和氮源培養基對病原菌菌絲的生長速度有較大的影響，適宜的碳源為蔗糖或甘露醇，氮源為硝酸鈉或甘氨酸，而可溶性淀粉和乙酸銨分別為促生效果較差的碳源和氮源。

2.4.4" 溫度對病原菌生長的影響" 10～35 ℃環境溫度條件下，病原菌的菌落直徑均高于接種時的直徑，且隨著培養溫度的增加，培養3 d的菌落直徑呈先增加后減少的趨勢。其中，25 ℃溫度處理的病原菌培養3 d菌落直徑可達78.17 mm，增加最為顯著；其次為30 ℃溫度處理和20 ℃溫度處理，菌落直徑分別為65.83 mm和56.17 mm；10 ℃溫度處理下，菌落直徑為8.80 mm，5 ℃溫度處理下，菌絲不生長。上述結果說明，25 ℃為病原菌的適宜生長溫度，過高多低的溫度均不利于病原菌的生長（圖5E）。

2.4.5" 光周期對病原菌生長的影響" 不同光周期下25 ℃恒溫培養3 d，病原菌菌落直徑的差異顯著。全暗條件下菌落直徑可達81.83 mm，顯著高于半明半暗（12 h/d）處理的79.83 mm和全光照（24 h/d）處理的77.00 mm，且半明半暗處理的菌落直徑與全光照處理亦存在顯著差異（圖5F）。上述結果說明全暗的環境有利于病原菌菌絲的生長。

2.4.6" 致死溫度" 多花黃精白絹病病原菌經10 min 41～44 ℃恒溫水浴處理后，菌絲在PDA培養基中均能繼續生長，但經10 min 45～50 ℃處理的菌絲不再生長，由此確定菌絲的致死溫度是45 ℃。菌核經10 min 45 ℃水浴處理后，菌核在PDA培養基中能正常萌發，萌發率為87%，隨處理溫度升高，萌發率逐漸下降，51 ℃處理后萌發率降到26%，53 ℃處理后萌發率僅為2.3%，55 ℃和57 ℃水浴處理后未見菌核萌發，表明菌核的致死溫度為55 ℃。

2.5" 室內藥劑毒力測定

6種殺菌劑對多花黃精白絹病病原菌的抑制效果如表2所示。從表中可以看出，6種殺菌劑對多花黃精白絹病病原菌均有一定的抑制作用。其中，戊唑醇對病原菌抑制作用最強，EC50為0.420" μg/mL；其次為咯菌腈，EC50為1.750" μg/mL；再次是萎銹靈和嘧菌酯，EC50分別為1.991" μg/mL和2.940" μg/mL；抑制作用最差的是啶酰菌胺，EC50為126.317" μg/mL。

3" 討論與結論

白絹病病原菌能侵害白術、溫郁金、黃連、玄參和鐵皮石斛等500多種植物。在中國多花黃精種植區，白絹病時常發生，該病可引起植株根腐、莖腐等癥狀，嚴重影響植株生長，導致產量減少。作者在重慶南川多花黃精種植區多年調查發現，白絹病病害有逐年加重的趨勢。2011年，鮑康阜報道了白絹病在安徽黃精種植基地的發生事件，但并未對引起黃精白絹病的病原菌種類進行鑒定。本研究在多花黃精白絹病病株調查的基礎上，對白絹病病原菌進行分離，并結合形態學特征和ITS堿基序列以及SSU、LUS基因堿基序列構建的系統發育進化樹進行鑒定，明確引起多花黃精白絹病的病原菌菌株BJB為羅耳阿太菌（A. rolfsii）。

多花黃精白絹病為土傳病害，病原菌以菌絲體和菌核在土壤、種莖、病殘體、雜草中越冬。當次年溫濕度條件適宜時，菌核以及菌核萌發產生的菌絲可通過直接接觸或傷口入侵的方式侵染寄主。白絹病病原菌菌核在土壤中可存活5～6年。本研究結果表明，多花黃精白絹病病原菌最適宜生長培養基為PSA，與王靜等報道煙草白絹病病原菌的適宜培養基一致；該病原菌在pH 3～10條件下均可生長，對酸堿度適應性較強，且當pH為4時，菌絲生長最快，表明多花黃精白絹病病原菌A. rolfsii喜好酸性土壤環境，這與加拿大一枝黃花白絹病病原菌（最適pH 5）和椒草白絹病病原菌（最適pH 6）的適宜生長pH有一定的差異，這可能是病原菌為適應不同寄主環境而自我調節的結果。因此，生產中可通過施用生石灰和堿性肥料等措施調節土壤的酸堿度，進而實現對多花黃精白絹病的防治。多花黃精白絹病病原菌可利用多種碳源，最適合的碳源為蔗糖，這與唐偉等和王炳文等的研究結果一致；多花黃精白絹病病原菌對可溶性淀粉利用相對較差，可能是可溶性淀粉為大分子化合物不能被病原菌直接吸收。多花黃精白絹病病原菌生長最適合的氮源為硝酸鈉，這草莓白絹病病原菌一致。本研究中多花黃精白絹病病原菌菌絲和菌核的致死溫度分別為45 ℃和55 ℃，表明多花黃精白絹病菌核比菌絲具有更強抗逆性，其原因可能與菌核具有堅硬的致密組織相關。黑暗條件有利于多花黃精白絹病病原菌菌絲的生長，這與王炳文等的研究結果一致，多花黃精白絹病病原菌在10～35 ℃的環境中均能正常生長，最適生長溫度為25 ℃，這與魔芋白絹病病原菌的生長溫度和最適生長溫度基本一致。重慶市南川區位于亞熱帶季風氣候區，5-7月處于梅雨季節，平均氣溫21～32 ℃，平均相對濕度76%左右，這為該地區多花黃精白絹病發生與流行提供了適宜的氣候條件。同時，每年5月份重慶南川區的多花黃精處于生長旺季，植株間通風差，田間土壤濕度大，這也促進了多花黃精白絹病的發生和流行。因此，及時除草、合理密植、雨前減少灌溉，及時處理病株及周圍土壤，是重慶市南川區控制白絹病發生與流行的有效手段。本研究中初步探討了培養基類型、pH、碳氮源、溫度以及光周期對A. rolfsii菌絲生長的影響，但病原菌侵染機制等方面的工作尚有待進一步研究。

目前，生產中常用化學藥劑進行作物白絹病的防治，但由于不同地區、不同中藥材品種的白絹病病原菌對藥劑的敏感性存在差異，因此，篩選合適的藥劑對中藥材白絹病的防治有重要意義。目前，中國登記的白絹病防治藥劑（http：//www.chinapesticide.org.cn/）主要有：戊唑醇等麥角甾醇抑制劑類，萎銹靈、氟酰胺和啶酰菌胺等琥珀酸脫氫酶抑制劑類，嘧菌酯等甲氧基丙烯酰酯類，咯菌腈等吡咯類，異菌脲等二甲酰亞胺類。此外，井岡霉素單劑或者與化學藥劑復配劑也可以用來防治花生等作物的白絹病。本研究選用的6種不同類型的藥劑對多花黃精白絹病病原菌的抑制效果從高到低依次為戊唑醇、咯菌腈、萎銹靈、嘧菌酯、異菌脲和啶酰菌胺。其中，戊唑醇、咯菌腈、萎銹靈和嘧菌酯的抑制作用較強，異菌脲和啶酰菌胺的抑制作用較弱。戊唑醇具有很強的內吸傳導性，殺菌譜廣、持效期長，低毒且對環境污染小，在花生白絹病的防治中亦有較好的效果。萎銹靈和啶酰菌胺同屬琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌劑，但兩者對多花黃精白絹病病原菌的EC50分別為1.991" μg/mL和126.317 μg/mL，差異較大，可能是由2種藥劑的分子結構差異導致的。在進一步的研究中，可利用防治效果較好的戊唑醇、咯菌腈、萎銹靈和嘧菌酯等藥劑開展活體植株試驗和田間試驗，以明確適用于生產的多花黃精白絹病防治藥劑和方法。

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