牛細菌性腹瀉病原的分離鑒定與耐藥性分析

熱娜古麗·依明

（新和縣畜牧技術推廣中心 新疆阿克蘇 842100）

近幾年，隨著我國養牛業的發展，其奶牛和肉牛的養殖數量呈現逐年升高的趨勢，河北、陜西、內蒙古、新疆等許多地區奶牛和肉牛的養殖數量較大，已經形成集約化、規模化的養殖模式[1-2]。在牛養殖過程中，牛腹瀉病是成為臨床中重要的及常見的疾病之一，經過統計在規模化牛場及散養牛場中不同階段的腹瀉性疾病發病率一直有增無減，引起腹瀉的因素復雜，各個階段牛容易感染，尤其是犢牛的死亡率較高，該病嚴重影響著養牛業的健康發展，對養牛業造成嚴重的經濟損失[3-5]。相關研究表明，引起規模化養殖場及散養戶中不同階段的牛腹瀉病的病因有許多，主要包括傳染性因素和非傳染性因素，其中傳染性因素有病毒、細菌、寄生蟲等，非傳染性因素有養殖環境衛生、飼養管理方式及外界環境應激等，其中細菌是引起牛腹瀉為最常見的因素之一[6-8]。引起牛細菌性腹瀉的病原主要有大腸桿菌、沙門菌、志賀菌、空腸彎曲桿菌、奇異變形桿菌、產氣莢膜梭菌、鏈球菌等，細菌性腹瀉嚴重影響犢牛的健康生長也是導致犢牛死亡的重要因素之一，且在臨床中常常以混合感染為主[9-10]。目前，臨床中牛細菌性腹瀉主要通過抗生素進行預防與治療，臨床中隨著抗生素的不合理的使用，導致其多種病原產生嚴重的耐藥性，同時降低多種抗菌藥物的治療效果，同時嚴重危害著人們的健康[11-12]。

本試驗于2022—2023 年采集新疆維吾爾自治區阿克蘇地區新和縣規模化養殖場及散養戶中不同階段的患腹瀉牛糞便、肛拭子及內臟病料358 份進行大腸桿菌、沙門菌、志賀菌、空腸彎曲桿菌等細菌性病原菌的分離鑒定，并對其耐藥性進行檢測，為該牛細菌性腹瀉病防治及合理指導臨床用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 病理來源

2022—2023 年采集新疆維吾爾自治區阿克蘇地區新和縣規模化養殖場及散養戶中不同階段的患腹瀉牛糞便、肛拭子及內臟病料358 份。

1.2 細菌分離與培養

對采集的358 份病料進行處理后，無菌接種于7%綿羊脫纖血培養基上，在37 ℃恒溫條件培養18～24 h 后，挑取菌落分別接種于大腸桿菌顯色培養基（大腸桿菌）、沙門菌顯色培養基（沙門菌）、XLD 培養基（奇異變形桿菌）及空腸彎曲菌顯色培養基（空腸彎曲菌顯色）上，在37 ℃培養條件下鑒別培養12～18 h 后，挑取不同的培養基單個菌落接種營養肉湯純化培養后進行鏡檢觀察形態學和生化鑒定。

1.3 生化試驗鑒定

參照革蘭氏陰性菌生化鑒定試劑盒，將分離菌株培養至對數期，調整菌液濃度為0.5 個麥氏濁度，按照要求在無菌的條件接種于革蘭氏陰性菌試劑，37 ℃培養12～18 h 后，參照說明書對分離菌株的生化特性進行比對結果判定，確定其生化特性。

1.4 藥敏試驗

分離菌株的藥敏試驗參照美國臨床實驗室標準化協會（CLSI）2013 年推薦的藥敏試驗法標準進行試驗和藥敏試驗結果判定。

2 結果

2.1 細菌分離培養

疑似大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿的分離菌株分別在大腸桿菌顯色培養基、沙門菌顯色培養基、空腸彎曲菌顯色培養基、XLD 培養基長出典型的菌落形態，通過染色鏡檢觀察其形態學。與《伯杰細菌鑒定手冊》報道的培養特性和形態學基本上一致。

2.2 細菌生化試驗

參照革蘭氏陰性菌試劑盒說明書，對分離菌株進行生化試驗，結果顯示，分離菌株分別被鑒定為大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿菌。 結果如表1 可知，分離到大腸桿菌62 株、沙門菌52 株、空腸彎曲桿菌29 株、奇異變形桿菌28 株，檢出率分別為17.3%、14.5%、8.1%、7.8%，其中大腸桿菌和沙門菌檢出率較高。

表1 分離菌株統計結果

2.3 藥敏試驗

對臨床中分離的大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿進行藥敏試驗并分析其耐藥性，結果由表2 可知：分離的大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿對臨床中常用的藥物產生不同的耐藥性，其中大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、氟苯尼考、恩諾沙星、環丙沙星、林可霉素、硫酸黏菌素等藥物敏感，對其他藥物耐藥。通過藥敏試驗結果可知，臨床分離的大腸桿菌和沙門菌耐藥率均高于空腸彎曲桿菌和奇異變形桿菌耐藥率。

表2 藥敏試驗結果

3 討論

國內外研究表明，牛的細菌性腹瀉是養牛中常見的疾病之一，經過統計在犢牛階段中其發病率在40%～80%之間，犢牛腹瀉性疾病的感染率和死亡率均較高，給養牛生產造成了較大的經濟損失，嚴重影響我國養牛業的發展[5-9]。當犢牛剛出生時免疫力較弱，腸道的消化機能不健全，外界環境中細菌容易進犢牛的體內，并在腸道中定植，尤其是當外界環境改變時導致其免疫力下降，引起犢牛發病[10-12]。本試驗研究表明，從358 份病料樣品中分離到大腸桿菌62株、沙門菌52 株、空腸彎曲桿菌29 株、奇異變形桿菌28 株，檢出率分別為17.3%、14.5%、8.1%、7.8%。說明大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿菌是引起犢牛腹瀉的主要的病原菌。因此，應該注意規模化養殖場及散養戶中牛的飼養管理，消除誘因，減少腹瀉性疾病的發生。

本試驗耐藥性結果表明，分離的菌株對臨床中常用的藥物產生不同的耐藥性，其中大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿菌均對頭孢噻呋、頭孢噻肟、氟苯尼考、恩諾沙星、環丙沙星、林可霉素、多黏菌等藥物敏感，對其他藥物耐藥，臨床分離的大腸桿菌和沙門菌耐藥率均高于空腸彎曲桿菌和奇異變形桿菌耐藥率。因此，規模化養殖場及散養戶應該對牛細菌性腹瀉的綜合防控。 在臨床治療牛細菌性腹瀉時應該根據藥敏試驗結果選擇敏感的藥物交替使用，同時加強飼養管理，注意環境的消毒，才能提高治療效果。■