口蹄疫血清抗體陰性實驗牛篩選方法的探討

張常鎖，曹劍，陳君，劉強德，張金鳳，王馬軍，呂魯杰，賀筍

（1.天康生物制藥有限公司 烏魯木齊 830011；2.北京標馳澤惠生物科技有限公司 北京 102629）

口蹄疫疫苗屬于國家強制免疫疫苗，國家和WOAH 均規定了相應的檢測方法[1]，有些方法操作程序較為復雜，耗時較長。目前國內牛群免疫范圍較廣，普免力度大。在牛、羊口蹄疫疫苗的動物評估過程中，主要使用液相阻斷ELSIA 方法篩選口蹄疫血清抗體≤23 的實驗牛[2-6]。目前國內口蹄疫疫苗生產廠家通常以廠區為中心，購買輻射周邊幾百公里內的實驗牛并運回實驗基地，再采集血清用液相阻斷ELSIA 方法進行大范圍篩選。這種方法篩選實驗牛陰性率不足15%，篩選時間長、成本高，浪費人力、物力。

利用綜合篩選方法，技術人員可先在田間使用膠體金對牛進行口蹄疫抗體初篩[7-8]，初篩呈陰性的牛轉運回實驗基地后，再進行ELISA 復核篩選。既可以快速完成動物評估，又降低了篩選成本。

1 材料

1.1 血清

待檢田間牛血清500 份。

1.2 檢測試劑盒

1）口蹄疫膠體金試劑盒由北京標馳澤惠生物科技有限公司生產，O 型批號為106210415A，A 型批號為107181123。

2）口蹄疫液相阻斷ELISA 試劑盒由蘭州獸研生物科技有限公司生產，O 型批號為20210107101，A 型批號為20210107103。

2 方法

1）利用口蹄疫膠體金試劑盒檢測三組盲采不同來源的田間牛血清共500 份，口蹄疫膠體金檢測方法參照說明書。

2）口蹄疫膠體金檢測結果為：O 型抗體效價≤22.5，A 型抗體效價≤30.3 的牛血清收集備用。

3）利用口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 方法對口蹄疫膠體金法篩選出來的陰性血清進行抗體檢測。液相阻斷ELISA 檢測方法參照說明書。

4）實驗數據比對：根據三次實驗結果分析，用口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 方法檢測口蹄疫膠體金篩選出來的血清合格率。

3 結果與分析

1）判定標準。依據試劑盒說明書將口蹄疫膠體金檢測結果為O 型抗體效價≤22.5 和A 型抗體效價≤30.3 的實驗牛血清判定為口蹄疫抗體陰性；依據農業農村部公告2601 號將口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 檢測結果為O 型和A 型抗體效價均≤23 的實驗牛血清判定為口蹄疫抗體陰性。

2）實驗結果。用口蹄疫膠體金試劑盒檢測500 份田間牛血清，結果如表1：

3）用口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 法檢測3 組口蹄疫膠體金篩選出來的236 份血清，分組檢測結果如表2、表3、表4：

表2 第一組甘肅武威某牛場口蹄疫膠體金篩選合格的74份血清ELISA結果

表3 第二組甘肅武威某牛場口蹄疫膠體金篩選的87份血清ELISA結果

表4 第三組新疆佃壩某牛場口蹄疫膠體金篩選的75份血清ELISA結果

第一組ELISA 法檢測的74 份血清中O 型合格56 份，A 型合格58 份，O 型和A 型均合格的有54 份。

第二組ELISA 法檢測的87 份血清中O 型合格70 份，A 型合格68 份，O 型和A 型均合格的有61 份。

第三組ELISA 法檢測的75 份血清中O 型合格57 份，A 型合格55 份，O 型和A 型均合格的有53 份。

4）用口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 方法檢測口蹄疫膠體金篩選出來的236 份血清合格率見表5：

表5 236份牛血清ELISA法檢測結果

5）實驗結果分析：利用口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 法對口蹄疫膠體金檢測合格的田間牛血清進行復核，3 次實驗結果顯示O 型的平均合格率在77%以上，A 型的平均合格率在76%以上，O 型和A 型的平均合格率在71%以上。

4 討論

通過三次實驗發現利用口蹄疫膠體金檢測法與口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 法組合篩選牛血清的平均合格率在71%以上，而直接用口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 法篩選牛血清的合格率不足15%，根據實驗結果，兩種檢測方法組合篩選實驗牛的方式要高于直接采用口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 法篩選方式。

利用口蹄疫膠體金檢測試劑盒對田間牛血清進行檢測有以下優點：攜帶方便，操作簡單；不需要固定實驗室，可隨時開展檢測；可減少不合格牛的采購、轉運等工作，能有效降低成本；通過本次實驗發現用膠體金法對田間牛進行初篩，再用液相阻斷ELISA 法進行復核篩選，能夠快速篩選出實驗陰性牛，此方法具有一定的可行性。

通過本次實驗說明利用口蹄疫膠體金檢測試劑盒進行實驗牛篩選，再利用口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 試劑盒進行二次復核，既能減少疫苗生產企業篩選實驗動物的時間，又能降低實驗牛篩選成本及運輸成本，利于疫苗生產企業快速開展產品檢驗。

建議各口蹄疫疫苗生產企業采用口蹄疫膠體金檢測法進行遠端初次篩選，利用口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 法進行實驗室復核。■