定時(shí)人工授精對(duì)湖羊受胎率的影響

高 慧,金慧佳,武利恒,趙麗莉,王爭(zhēng)光*

(1.浙江省畜牧技術(shù)推廣與種畜禽監(jiān)測(cè)總站,浙江 杭州 310021;2.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院;3.浙江華欣牧業(yè)有限公司;4.衢州市畜牧業(yè)發(fā)展中心)

湖羊是中國獨(dú)有的、歷史悠久的多胎綿羊品種,主要分布在浙江嘉興地區(qū)和太湖周邊。被列入《國家畜禽遺傳資源保護(hù)名錄》,因其宜圈養(yǎng)特性,在我國羊產(chǎn)業(yè)集約化發(fā)展中具有十分重要的地位。但由于過分追求生產(chǎn)利益,湖羊產(chǎn)業(yè)中出現(xiàn)了近親繁殖、種質(zhì)退化等問題,迫切需要擴(kuò)繁優(yōu)秀純種湖羊群體。人工授精是促進(jìn)家畜繁殖和育種的關(guān)鍵技術(shù),能夠加快純種擴(kuò)繁速度,從而提高家畜繁殖力。而家畜的繁殖過程嚴(yán)格受到各種生殖激素的協(xié)調(diào)控制。通過體外不同激素的刺激,如前列腺素、孕激素、促性腺激素釋放激素或其類似物等可以人為地改變母畜的生殖周期。母羊排卵發(fā)生在情期結(jié)束前后,人工授精一般在排卵之前或排卵過程中進(jìn)行。作為人工授精的輔助手段,定時(shí)發(fā)情可以有效調(diào)控母畜的發(fā)情周期,在特定時(shí)間段內(nèi)實(shí)現(xiàn)母畜的同時(shí)發(fā)情、統(tǒng)一配種和同步妊娠,便于生產(chǎn)管理,從而提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。定時(shí)人工授精技術(shù)在母羊定時(shí)發(fā)情的基礎(chǔ)上,不僅能夠使優(yōu)良種公畜的繁殖性能得到充分發(fā)揮,而且也降低發(fā)情鑒定所需要的人力成本,從而提高畜牧業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。定時(shí)人工授精技術(shù)已經(jīng)成為家畜繁殖技術(shù)研究的熱點(diǎn)。本研究通過改進(jìn)陰道栓法的一些技術(shù)環(huán)節(jié)和方法,優(yōu)化湖羊定時(shí)發(fā)情控制技術(shù),便于冷凍精液應(yīng)用于大規(guī)模羊場(chǎng),為湖羊定時(shí)人工授精技術(shù)推廣應(yīng)用提供技術(shù)儲(chǔ)備。

1 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)

本試驗(yàn)從2022年4月開始,陸續(xù)開展。試驗(yàn)所用的湖羊均養(yǎng)殖于浙江華欣牧業(yè)有限公司。根據(jù)下述實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),每個(gè)試驗(yàn)組的湖羊在同一欄舍飼養(yǎng)。

2 試驗(yàn)材料

2.1試驗(yàn)動(dòng)物 選擇18-36月齡的健康公羊采集精液,選擇15月齡、體重接近的健康經(jīng)產(chǎn)母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理。

2.2主要試劑 誘導(dǎo)母羊定時(shí)發(fā)情用的主要激素如促卵泡素(FSH)、孕馬血清促性腺激素(PMSG)、氯前列醇鈉注射液(PG)均購自寧波第二激素廠,多胎素、生元導(dǎo)管式棉栓(CIDR)購自河南信南春生物科技有限公司。

3 試驗(yàn)方法

3.1試驗(yàn)分組 本研究共分3組,分別按照以下方案進(jìn)行操作。對(duì)照組:不做處理自然發(fā)情。試驗(yàn)組1(方案1):直接放置 CIDR栓處理12 d,分別在第12 d、第13 d 注射 FSH 50 IU,第14 d去栓并注射PG 0.1 mg,去栓后12 h開始試情。試驗(yàn)組2(方案2):直接放置 CIDR栓處理12 d,同時(shí)試驗(yàn)羊飼喂多胎素。放栓后第11 d注射PMSG 400單位、PG 0.1 mg,分開注射。放栓后第12 d撤栓,停止飼喂多胎素。放栓后第14 d,上午和下午各人工輸精一次。試驗(yàn)?zāi)秆蛟缟喜挥栾曃?僅中午喂食。

3.2公羊試情方法 選用性欲旺盛、健康無病的公羊作為試情對(duì)象,并在早、晚各進(jìn)行一次試情。為防止偷配,試情公羊需要戴上試情布。同時(shí),試情公羊與母羊應(yīng)當(dāng)遵循1∶15的比例,一旦出現(xiàn)發(fā)情母羊需要立即挑出,降低干擾。因試情耗費(fèi)的時(shí)間較長,如果母羊沒有在10～20 min內(nèi)接受公羊爬跨,理論上記為一次試情結(jié)束。同時(shí),采用人工檢查的方法判斷母羊的發(fā)情情況。若母羊出現(xiàn)嗅聞公羊、接受爬跨等行為,或者表現(xiàn)出外陰有黏液流出、發(fā)紅發(fā)腫等癥狀,均判定為母羊發(fā)情。定時(shí)發(fā)情處理后72 h內(nèi)發(fā)情的母羊均作為定時(shí)處理有效對(duì)待。

3.3公羊采精 本研究采用假陰道法對(duì)公羊的精液進(jìn)行采集。將發(fā)情的母羊固定在采集架上。將集精杯裝入假陰道的一段,另一端涂抹凡士林潤滑,保持內(nèi)胎的溫度在40 ℃左右。把公羊趕到固定的發(fā)情母羊邊上,讓公羊爬跨,迅速將陰莖導(dǎo)入假陰道內(nèi)。公羊射精后,取下采精杯,記錄射精量,快速放入37 ℃水浴中保溫。

3.4精液品質(zhì)檢查、稀釋、冷凍、解凍 精液品質(zhì)檢查主要包括外觀檢查、射精量測(cè)量、精子活力測(cè)定、精子密度測(cè)定和精子形態(tài)學(xué)檢查。采用傳統(tǒng)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定湖羊精子的密度,采用10級(jí)制目測(cè)法進(jìn)行精子活力測(cè)定,通過計(jì)算精子頂體異常率和精子畸形率兩項(xiàng)指標(biāo)對(duì)精子進(jìn)行形態(tài)學(xué)評(píng)估。正常健康的精液在顯微鏡下呈現(xiàn)翻騰的云霧狀,顏色為乳白色。湖羊的正常射精量為0.5～2 mL,每毫升精液中精子的數(shù)量為20億～30億,且精液中不含有尿液等其他成分。精液稀釋、冷凍、保存和解凍均按照之前試驗(yàn)得出的最優(yōu)方案進(jìn)行。

3.5母羊人工授精 采用子宮頸深部輸精方法對(duì)發(fā)情母羊進(jìn)行授精。早上進(jìn)行第一次輸精,間隔10～12 h后進(jìn)行第二次輸精。在輸精過程中,打開內(nèi)窺鏡的光源,將器械插入陰道深部,并通過旋轉(zhuǎn)器械來確定子宮頸位置。然后將輸精器插入子宮頸約1.0 cm深,輕輕往里注入0.1～0.2 mL精液即可。輸精完成后先取出輸精器再抽出內(nèi)窺鏡。同時(shí),母羊需要在原位置停留一段時(shí)間。人工授精過程中使用的器械均需要用生理鹽水沖洗干凈。

3.6定時(shí)發(fā)情效果評(píng)價(jià) 本試驗(yàn)通過以下三項(xiàng)指標(biāo)來評(píng)估不同定時(shí)發(fā)情方法的處理效果:發(fā)情率、定時(shí)發(fā)情時(shí)間分布和處理后人工授精受胎率。進(jìn)行不同處理后,72 h內(nèi)發(fā)情的母羊數(shù)在該處理組總母羊數(shù)中所占的百分率,即定時(shí)發(fā)情率。定時(shí)發(fā)情處理后,發(fā)現(xiàn)母羊有發(fā)情表現(xiàn)的時(shí)刻,即定時(shí)發(fā)情時(shí)間。處理后72 h內(nèi)發(fā)情者均作為同期處理有效對(duì)待。配種后受胎的母羊數(shù)在參與配種母羊數(shù)中所占的百分率,即受胎率。

3.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 所有試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均被整理和記錄于Excel軟件中,采用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以記錄為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,利用one-way ANOVA進(jìn)行各試驗(yàn)組之間的差異比較。

4 結(jié)果與分析

4.1不同處理對(duì)母羊定時(shí)發(fā)情率的影響 由表1可知,對(duì)照組母羊的定時(shí)發(fā)情率平均為21.1%,均低于其他兩個(gè)處理組;試驗(yàn)1 組定時(shí)發(fā)情率平均為77.2%,顯著高于對(duì)照組(P<0.05);試驗(yàn)2組獲得了最高的定時(shí)發(fā)情率87.8%,與對(duì)照組比較差異極顯著(P<0.01)。

表1 不同處理對(duì)母羊定時(shí)發(fā)情率的影響

4.2不同處理對(duì)母羊定時(shí)發(fā)情時(shí)間分布的影響 由表2可知,對(duì)照組發(fā)情時(shí)間集中在48～72 h;試驗(yàn)1組集中在36～60 h;試驗(yàn)2組集中在36～48 h。各處理組的發(fā)情時(shí)間存在差異。試驗(yàn)2組的發(fā)情時(shí)間更加集中,便于后續(xù)的人工授精和管理,且發(fā)情母羊的數(shù)量也明顯高于對(duì)照組和試驗(yàn)1組。

表2 不同處理對(duì)母羊定時(shí)發(fā)情時(shí)間分布的影響

4.3不同處理對(duì)母羊情期受胎率的影響 由表3可知,自然發(fā)情的母羊,配種受胎率較低,平均為46.1%,試驗(yàn)組1處理后平均受胎率為59.2%,顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。試驗(yàn)組2獲得的受胎率最高,顯著高于另外二組(P<0.05),效果更明顯。

表3 不同處理對(duì)母羊情期受胎率的影響

5 討論

生殖激素的協(xié)調(diào)作用是母羊正常繁殖的關(guān)鍵。利用生殖激素誘導(dǎo)定時(shí)發(fā)情的方式,可提高湖羊的定時(shí)發(fā)情效率。而陰道栓法就是一種通過人為添加孕激素模擬自然黃體形成的方法。在休情期,通過陰道栓向母羊注入孕激素,可使母羊體內(nèi)的孕激素水平升高,從而形成人工黃體。在預(yù)定的發(fā)情時(shí)間,撤去陰道栓,使母羊體內(nèi)的孕激素水平迅速降低,同時(shí)注射PMSG使母羊體內(nèi)的促卵泡素水平迅速升高,此時(shí)母羊的卵泡開始發(fā)育,表現(xiàn)為發(fā)情狀態(tài)。海綿栓和CIDR配合PMSG等激素都是定時(shí)發(fā)情的有效方法,結(jié)合不同的處理手段呈現(xiàn)出的效果存在差異。周洪剛等采用“孕酮海綿栓+PMSG+PG”定時(shí)發(fā)情方案處理母羊,得到了比其他處理組更高的發(fā)情率,對(duì)發(fā)情母羊進(jìn)行人工授精,受胎率得到顯著提高,可達(dá)95%,這一改進(jìn)措施進(jìn)一步降低了湖羊的繁殖和生產(chǎn)成本,平均每只羊可下降247.5元。在生產(chǎn)中普遍應(yīng)用的羊用陰道栓主要有CIDR和海綿栓兩種類型。張文倩等通過對(duì)比CIDR和海綿栓對(duì)湖羊定時(shí)發(fā)情的效果,發(fā)現(xiàn)采用“CIDR+PMSG+PGF2α”方案處理湖羊,定時(shí)發(fā)情效果明顯更好,發(fā)情率可達(dá)90.74%。CIDR配合應(yīng)用PMSG、PGF2α等激素的處理效果要優(yōu)于海綿栓。成海榮等比較了不同栓劑對(duì)肉羊同期發(fā)情的影響,對(duì)200只肉羊分為四組,分別放置進(jìn)口CIDR栓、進(jìn)口海綿栓、國產(chǎn)海綿栓,以及國產(chǎn)硅膠栓,撤栓后皮下注射330 IU PMSG,24 h開始試情,分別于36 h與48 h開始實(shí)施人工授精。采取“CIDR+PMSG”法處理,發(fā)情率為95.83%,受胎率為89.13%,均高于其他各組,且母羊陰道發(fā)炎率也更低,效果更穩(wěn)定、更好。不同劑量PMSG對(duì)于定時(shí)發(fā)情的效果也存在差異。高峰等發(fā)現(xiàn),應(yīng)用“CIDR+PMSG+PG”處理方案的前提下,針對(duì)1～2歲齡左右的50 kg試驗(yàn)湖羊,PMSG的使用劑量在200～240 IU比較合理。趙曉錕等發(fā)現(xiàn)“孕酮海綿栓+PMSG+PG”定時(shí)發(fā)情方案處理,母羊在撤栓后48 h左右處于發(fā)情和排卵高峰,與撤栓后48 h和56 h兩次定時(shí)人工輸精組合,受胎率達(dá)76%。湖羊定時(shí)發(fā)情技術(shù)與人工授精技術(shù)相結(jié)合,可以極大程度地利用公母羊的繁殖優(yōu)勢(shì),顯著提高母羊的繁殖率,降低羊場(chǎng)的管理成本,可在規(guī)模化湖羊生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。

6 結(jié)論

根據(jù)各種不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),綜合分析得到理想的湖羊定時(shí)發(fā)情處理方案,母羊直接放置 CIDR栓處理12 d,同時(shí)飼喂多胎素,放栓后第11 d分開注射PMSG 400單位、PG 0.1 mg,放栓后第12 d撤栓,同時(shí)停止飼喂多胎素,定期發(fā)情率高達(dá)87.8%,發(fā)情時(shí)間集中在湖羊發(fā)情處理后的36-48 h。在放栓后第14 d的上午和下午對(duì)試驗(yàn)?zāi)秆蚋鬟M(jìn)行一次人工輸精,受胎率最高可達(dá)61.1%。