血液乙醇樣本保存條件對酒駕認(rèn)定的價值分析

姚鳳娟

周口三川司法鑒定所，河南 周口 466000

根據(jù)《車輛駕駛?cè)藛T血液、呼氣酒精含量閾值與檢驗標(biāo)準(zhǔn)》（GB19522-2010）的規(guī)定，酒后駕車和醉駕被明確定義為血液中酒精濃度（BAC）在20mg/100ml 至80mg/100ml 之間和超過80mg/100ml 的狀態(tài)。目前，中國主要依賴呼氣式酒精檢測儀和頂空氣相色譜法兩種主要方法，來檢測涉嫌酒后駕駛或醉酒駕駛的人員。一般情況下，交通警察會在現(xiàn)場使用呼氣式酒精檢測儀來初步檢測被懷疑醉酒駕駛的司機(jī)的呼氣中的乙醇濃度（Breath Alcohol Concentration，BrAC）。對于經(jīng)測試涉嫌醉酒的人，隨后會采集其血液樣本并送往實驗室，使用頂空氣相色譜法進(jìn)行進(jìn)一步的血液乙醇濃度檢測。

然而，問題在于這兩種檢測方法的結(jié)果往往不一致。部分人的呼氣酒精濃度較低，但血液檢測結(jié)果卻較高。而另一些人的呼氣酒精濃度較高，但血液檢測結(jié)果可能低于80mg/100ml。因此，研究呼氣值與血液檢測值存在的差異對于涉嫌酒后駕駛案件的處理具有重要意義。

一、材料與方法

（一）實驗材料

實驗使用無水乙醇和叔丁醇，都屬于色譜純。乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液包括不同濃度的乙醇（0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00mg/mL），并在4℃冷藏。從99.5%高純度的叔丁醇中取適量，溶解于100mL 容瓶中，加入蒸餾水并混勻，得到5.0mg/mL的對照品標(biāo)準(zhǔn)儲備液。將該儲備液稀釋125 倍，制得40.0μg/mL 的內(nèi)標(biāo)工作液。

實驗使用酒的酒精濃度為45%，從超市購買。采血使用一次性真空采血管，包括不同規(guī)格的管。空白血液源自未服藥者，實驗中使用重蒸餾水作為實驗水［1］。

（二）實驗儀器

實驗所使用的設(shè)備和條件如下：首先，使用島津GC-2010plus 色譜儀，搭配島津HS-20 頂空儀進(jìn)行分析。在色譜柱方面，采用兩種毛細(xì)柱，分別是Rtx-BAC1 和Rtx-BAC2，規(guī)格為30×0.32 毛細(xì)柱。為了維持恒定的溫度，色譜柱設(shè)置在40℃。在進(jìn)樣過程中，進(jìn)樣口的溫度保持在150℃，柱流量為5mL/min，吹掃流量為3mL/min，而分流比則為6.4。血儲容器包括枸櫞酸鈉1∶9 管、肝素鈉管、EDTA-k2 管、氟化鈉-草酸鉀管、枸櫞酸鈉1∶4 管。

采用兩個FID 火焰離子化檢測器檢測化合物，檢測時溫度設(shè)定為250℃。在頂空進(jìn)樣條件下，設(shè)置恒溫爐、樣品流路和傳輸線的溫度分別為65℃、105℃、110℃。樣品瓶在恒溫爐中導(dǎo)入時間為0.8min，導(dǎo)入平衡時間為0.4min，平衡10min，加壓時間為0.3min，加壓平衡時間為0.3min，進(jìn)樣時間為0.5min［2］。

（三）實驗方法

首先，準(zhǔn)備兩個20ml 容量的頂空樣品瓶。接著，在每個瓶子中，分別加入1.00ml 濃度為40.0μg/ml 的叔丁醇內(nèi)標(biāo)溶液，以及0.20ml 待測血液樣品。隨后，密封瓶口并充分混勻，確保內(nèi)標(biāo)和待測血液樣品充分混合。

其次，將兩個密封瓶放入65℃的加熱環(huán)境中，進(jìn)行加熱處理，持續(xù)5min。之后，從每個瓶子中提取1.00ml 的液體上層氣體，提取物將用于進(jìn)行頂空氣相色譜分析。

對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析時，采用Duncan 氏新復(fù)極差法來比較不同處理之間的顯著差異性。這種方法有助于確定各處理組之間是否存在顯著性差異。數(shù)據(jù)分析過程中，借助諸如Excel 和SPSS20.0 等軟件工具，進(jìn)行數(shù)據(jù)整理、圖表繪制和統(tǒng)計分析。這包括使用單因素方差分析和重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析，以進(jìn)一步探究數(shù)據(jù)之間的差異和相關(guān)性［3］。

最后，在統(tǒng)計分析中，設(shè)定顯著性水平（α），通常取0.05。這一水平用于確定結(jié)果是否具有統(tǒng)計顯著性。通常情況下，如果觀察到的概率小于0.05，即認(rèn)為結(jié)果是顯著的，即存在顯著性差異。

二、結(jié)果與分析

（一）-20℃血液乙醇含量穩(wěn)定性隨時間產(chǎn)生的變化

在-20℃條件下，對三種真空抗凝管在4 ～8℃冰箱冷藏下血液乙醇含量的穩(wěn)定性進(jìn)行了詳細(xì)研究。結(jié)果顯示，實驗初期（0d 和3d）枸櫞酸鈉1∶9管、肝素管、EDTA-k2 管的血液乙醇含量分別為108.08±0.21Aa、107.57±0.4Aa，107.65±0.29 Aa、107.26±0.25Aa，107.67±0.37Aa、107.02±0.48Aa，三者相近。

隨時間推移，35d 內(nèi)各管血液乙醇含量保持相似，枸櫞酸鈉1∶9 管為107.06±0.31Aa，肝素管為106.24±0.19Ba，EDTA-k2 管為106.41±0.44 Aa，且無顯著差異。然而，42d 時枸櫞酸鈉1∶9 管和肝素管的含量急劇下降至80.77±0.40Ba 和69.27±0.46Cb，而EDTA-k2 管的含量仍保持相對穩(wěn)定（106.23±0.52Ac）。49d 時，枸櫞酸鈉1∶9管和肝素管的含量進(jìn)一步下降至80.24±1.42Ba和69.29±0.34Cb，而EDTA-k2 管的含量為106.88±0.36Ac。

隨時間推移，枸櫞酸鈉1∶9 管和肝素管的血液乙醇含量顯著下降，而EDTA-k2 管性能相對穩(wěn)定，特別是在長達(dá)49d 的儲存期。因此，在-20℃冰箱冷藏條件下，確認(rèn)EDTA-k2 管為最佳血液乙醇儲存容器，如表1 所示。法律通常要求準(zhǔn)確測量血液乙醇含量，以便判斷酒后駕駛或醉駕。因此，選擇EDTA-k2 管有助于確保法律程序的公正和司法公正［4］。

表1 三種采血管中血液乙醇含量變化

（二）檢測時間對血液樣品中乙醇含量的影響

隨著時間的推移，血液乙醇含量呈逐漸下降的趨勢（見表2）。在最初的3d 內(nèi)，乙醇含量相對穩(wěn)定，保持在約106.32±0.78 的水平。然而，在接下來的一周內(nèi)，即7d 后，乙醇含量開始顯著下降，降至約106.02±0.73。這種下降趨勢在隨后的時間段內(nèi)繼續(xù)，分別為14d、21d、30d、60d 和90d，乙醇含量逐漸減少，分別降至105.79±0.91、105.47±0.88、105.22±0.59、104.92±0.63 和104.68±0.71。

表2 不同保存時間下血液乙醇含量的變化（mg/100ml）

然而，在90d 后觀察到乙醇含量下降速度有所減緩，且變得更為平穩(wěn)。這表明在90d 之內(nèi)，血液乙醇含量保持相對恒定，而超過90d 后，乙醇含量的下降趨勢變得顯著。因此，根據(jù)這些觀察結(jié)果，可以得出結(jié)論，酒駕血液樣本的最佳保存期限為90d。

此外，通過Duncan 氏新復(fù)極差測驗，表明在-20℃冰箱冷藏條件下，血液中乙醇含量的變化幅度最小。這表明在-20℃的低溫環(huán)境中冷藏血液樣本，可以有效減緩乙醇含量的下降速度，延長其有效保存期限［5-6］。

采用回歸分析探究乙醇含量與時間的關(guān)系，通過三次函數(shù)表示樣本失效情況。從圖1 中可以看出乙醇含量隨時間增長逐漸下降，且這種下降速度隨保存時間的延長而逐漸增加。換言之，隨著時間推移，樣本中的乙醇含量逐漸減少，且這一減少趨勢隨樣本保存時間的延長而變得更加顯著。當(dāng)保存時間超過90d 時，測定血液乙醇含量的結(jié)果將不再具有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 -20℃保存溫度下血液乙醇含量的三次函數(shù)回歸方程

綜上所述，這些數(shù)據(jù)和分析結(jié)果明確指出，酒駕血液樣本的最佳保存期限為90d，而在-20℃的低溫條件下冷藏可以延長樣本的穩(wěn)定性。這對于司法和法醫(yī)領(lǐng)域的血液乙醇含量測定具有重要的實際意義。

三、結(jié)論

首先，在-20℃冰箱冷藏條件下，EDTA-k2 管表現(xiàn)出最好的穩(wěn)定性，而枸櫞酸鈉1∶9 管和肝素管的性能在儲存時間延長時顯著下降。這為司法程序中的血液乙醇含量準(zhǔn)確測量提供了重要的指導(dǎo)，特別是在長時間的儲存情況下選擇EDTA-k2管作為血液乙醇儲存容器更為可靠。

其次，乙醇含量在初始的3 天內(nèi)相對穩(wěn)定，然后開始逐漸下降。然而，在90d 內(nèi)，乙醇含量變化幅度有所減緩，維持在相對穩(wěn)定的水平。因此，我們建議酒駕血液樣本的最佳保存期限為90d。此外，在-20℃的低溫環(huán)境中冷藏可以有效延長樣本的穩(wěn)定性和保存期限。

最后，乙醇含量會隨時間的延長而逐漸降低，且在保存時間超過90d 時，測定血液乙醇含量將失去統(tǒng)計學(xué)意義。