新疆和田地區人源腸道乳酸菌的篩選及其體外益生特性分析

李建軍，古麗拜克熱木·艾比卜拉，倪永清，李 谞

（石河子大學食品學院，新疆石河子 832003）

腹瀉是兒童疾病中的一種常見類型，腹瀉類型包括胃源性腹瀉、腸源性腹瀉以及感染性腹瀉，在這三種類型中感染性腹瀉最為常見[1]。據報道，沙門氏菌、致病性大腸桿菌和彎曲桿菌等致病菌引起的感染性腹瀉是嬰兒生病甚至死亡的主要原因[2]。益生菌是指在攝入一定的數量后，可以在人體腸道內存活并定植，進一步影響腸道內已有菌群的生長，從而調節宿主的健康的一類微生物。研究表明，益生菌能夠抑制腸道致病菌的生長和活性，其中最常見的就是利用乳酸菌進行腹瀉的治療[3-4]。

乳酸菌（Lactic acid bacteria，LAB）是一種異質性的革蘭氏陽性細菌，被認為是最常見和最典型的含有益生菌菌株的細菌菌群，其與人類生活息息相關，它們主要調節宿主的內部環境，從而對宿主的健康發揮重要作用[5-6]。乳酸菌的抑菌作用與其代謝產物密切相關，不同乳酸菌的代謝產物不同抑菌效果不同。研究報道，乳酸菌發酵過程產生的有機酸可以與某些成分結合來破壞細胞膜穩定性，達到抑菌作用[7]，如Bergsson 等[8]研究發現，脂肪酸可以穿透致病細胞，并跟其質膜結合，改變膜的通透性，達到抑菌效果；乳酸菌還可以通過其自身在生長繁殖過程中與病原微生物爭奪結合位點和營養物質從而達到抑菌效果[9]。乳酸菌因其抑菌效果被廣泛應用醫藥領域，但是也存在一些問題，如抑菌效果低和抑菌活性不穩定等[10]，篩選具有良好抑菌活性和臨床應用的乳酸菌是開發乳酸菌治療藥物的基礎。

新疆獨特的地理氣候與人文飲食習慣，造就了豐富的益生菌菌株資源，基于此，本研究以新疆和田地區維吾爾族母嬰糞便為樣品源，對其中乳酸菌進行分離鑒定。測定乳酸菌菌株的致病菌抑菌性能，開展抑菌乳酸菌菌株的模擬胃腸液耐受性、抗生素耐藥性、疏水性與自凝聚性、碳水化合物代謝等體外益生特征實驗，從而篩選出具有潛在益生特性的抑菌乳酸菌，以期通過后期體內實驗，為開發適應區域人群的高活性益生乳酸菌及產品奠定相關前期基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗所采集的樣品來自新疆和田地區，有19 對健康的維吾爾族母親及其嬰兒參與了本次研究。在研究開始前，所有成年參與者和所有參與研究的嬰兒的父母或監護人都簽署了書面知情同意書。根據以下入選標準招募的志愿者：a.志愿者近期無胃腸道不適史；b.至少6 個月內未服用抗生素或影響腸道微生物的藥物；c.不服用益生菌產品。提前聯系好志愿者，記錄志愿者年齡、性別、身高體重和飲食習慣等基本信息。在每個無菌糞便容器中收集糞便樣品（3 g 左右），采集樣品后置于-4 ℃車載冰箱保存，采樣結束后快速運回實驗室，置于-20 ℃冰箱保存備用。

指示菌 購買自中國工業微生 物菌種保藏管理中心，見表1；Taq Plus Master Mix（2×）南京諾唯贊生物科技股份有限公司；0.22 μm 微孔濾膜 上海興亞凈化材料廠；抗生素藥片、二甲苯 北京索寶萊科技有限公司；供試碳源 上海源葉生物科技有限公司；胃蛋白酶（500 U/mg）、胰蛋白酶（75 U/mg）、牛膽鹽 北京博奧拓科技有限公司；其余試劑均為分析純或進口試劑。所用培養基配方見表2。

表1 致病菌與培養基Table 1 Pathogenic bacteria and culture medium

表2 培養基配方Table 2 Media formula

DG520 厭氧培養箱 英國DWS 公司；Fresco 21 高速冷凍離心機 Thermo Scientific 公司；TP professionalPCR 儀 德國Biometra 公司；PowerPac Universal 水平電泳儀、Gel DOC XR 凝膠成像系統美國BioRad 公司；HX-2Y 細胞破碎儀 天津市歐諾儀器儀表有限公司公司；EON 多功能酶標儀美國Biotek 公司；vortex-6 渦旋儀 其林貝爾儀器制造有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 乳酸菌的分離鑒定 從糞便樣本中分離出候選乳酸菌，為提高應變分離的多樣性，采用直接稀釋法與平板擴散法，將1 g 糞便樣品接種到9 mL MRS肉湯中，使用渦旋儀充分混勻2 min，并用無菌生理鹽水連續稀釋樣品至10-3、10-4、10-5，將不同稀釋度的懸液（100 μL）均勻涂布于LAMVAB 瓊脂培養基，厭氧環境中37 ℃培養24～48 h。根據培養物的形態、大小、顏色、觀察特征，每個平板取8～10 個菌落，每個樣品取25～30 個菌落，鏡檢至純。菌株DNA 的提取依據CTAB 法并稍作修改進行[11]，采用引物Lac-groEL-F（5’-TCCGATTACGAYCGYGAG AAGCT-3’）和Lac-groEL-R（5’-CSGCYTCGGTSG TCAGGAACAG-3’）對分離株按照表3 進行groEL基因的種級PCR 擴增[12]，PCR 反應擴增條件如下：預變性：95 ℃，8 min；變性：95 ℃ 40 s；退火：60 ℃、40 s；延伸：72 ℃，40 s；30 次循環；終延伸：72 ℃，8 min。經瓊脂糖凝膠電泳后得到500 bp 左右的清晰單一條帶。將擴增產物送至江蘇金唯智生物有限公司進行測序，測序結果提交至GenBank 數據庫中進行序列同源性比對（BLAST），比對相似值大于98%初步確定菌種物種。采用MEGA 6.0 軟件構建系統發育進化樹[13]。

表3 基于groEL 基因的種間PCR 擴增Table 3 Interspecific PCR amplification based on groEL gene

1.2.2 具有抑菌活性乳酸菌的篩選 將乳酸菌以2%的接種量接種到 MRS 液體培養基中，在37 ℃下培養18 h 后，離心（4 ℃，10000 r/min，5 min），取上清液。用0.22 μm 微孔濾膜過濾上清液，并將上清液儲存于4 ℃條件備用。將6 種不同的指示菌（表1）按2%的接種量分別接種于對應的PYG 培養基、營養肉汁瓊脂、TSA 培養基中，37 ℃恒溫培養18 h。用牛津杯法測定菌株的抑菌活性[14]，取指示菌100 μL（約108CFU/mL）涂布于對應的瓊脂培養基表面，將無菌牛津杯平行放置于平板中，在牛津杯中加入200 μL 待測樣品，在4 ℃冰箱預擴散6 h 后，37 ℃恒溫培養24 h，觀察抑菌圈大小并測量其直徑。

1.2.3 抑菌乳酸菌的抑菌物質測定 用過濾除菌的NaOH 溶液（1 mol/L）調節發酵上清液 pH 至6.0，相同pH 的MRS 作為對照，在牛津杯中加入200 μL發酵上清液，4 ℃預擴散6 h 后將平板置于37 ℃恒溫培養箱中，培養24 h，觀察并測量抑菌圈直徑。

1.2.4 抑菌乳酸菌的益生特性分析

1.2.4.1 模擬胃腸液耐受性 人工模擬胃腸液需新鮮配制。125 mmol/L NaCl、7 mmol/L KCl、45 mmol/L NaHCO3和3 g/L 胃蛋白酶（500 U/mg），用鹽酸調節pH2.5，經0.22 μm 濾膜過濾后制備成模擬胃液；45 mmol/L NaCl、1 g/L 胰蛋白酶（75 U/mg）、3 g/L牛膽鹽，用1 mol/L NaOH 調至pH8.0，經0.22 μm濾膜過濾后制備成模擬腸液；乳酸菌菌株在37 ℃厭氧培養箱中培養過夜，離心菌液（8000 r/min，5 min，4 ℃），棄上清液留菌體沉淀，重懸于MRS 液體培養基中使其菌液密度調節為1×109CFU/mL，加入等體積人工胃液（3 g/L 胃蛋白酶）或人工腸液（1 g/L 胰蛋白酶、3 g/L 牛膽鹽），37 ℃ 恒溫培養箱中培養0、4 h，培養后進行梯度稀釋，取合適的稀釋液涂布于MRS平板上，37 ℃靜置培養48 h，活菌計數。計算公式如下：

式中：N1模擬胃液或腸液處理4 h 后的活菌數（CFU/mL）；N 為模擬胃液或腸液處理0 h 的活菌數（CFU/mL）。

1.2.4.2 菌株的疏水性與自凝聚性 通過測定微生物對二甲苯的親和力來評價各菌株的細胞表面疏水性[15-16]。乳酸菌菌株在MRS 中培養16 h 后，離心（6000 r/min，10 min）收集菌體，用pH7.2 的無菌磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌菌體兩次，并在同一緩沖液中重懸。用酶標儀測定懸液的光密度OD600（A0）。然后將1 mL 二甲苯加入到3 mL 乳酸菌懸浮液中，渦旋混合2 min，37 ℃靜置1 h，水相與二甲苯相分離。除去水相，用酶標儀測量水相OD600（A1）。細胞疏水性的百分比按下面公式計算：

乳酸菌菌株在MRS 中培養16 h 后，用PBS（pH7.2）洗滌兩次，重新懸浮在同一緩沖液中并稀釋至OD600=0.6±0.1。取稀釋液200 μL，加PBS 至2 mL，渦旋10 s 后用酶標儀測定OD600（A0）。取2 mL細菌懸液旋渦10 s，隨后于37 ℃恒溫培養，于2、4 h處分別取樣菌懸液上清液200 μL，加PBS 至2 mL，渦旋10 s 后用酶標儀測定OD600（At）。細胞自聚性的百分比按下面公式計算：

式中：At表示分別在2 h 與4 h 處的OD600吸光值，A0表示0 h 處的OD600吸光值。

1.2.4.3 抗生素敏感性試驗 采用紙片擴散法（K-B法）測定抑菌乳酸菌菌株對10 種抗生素的敏感性[17]。吸取100 μL（約108CFU/mL）活化后乳酸菌菌懸液，使用無菌棉簽將其均勻涂布于MRS 瓊脂平板表面，用無菌鑷子將藥片輕輕貼于其上，37 ℃培養24 h，檢測抑菌圈直徑，每種抗生素做3 個平行。結果參照實驗室標準協會（CLSI）進行耐藥性能評估，見表4。

表4 藥敏紙片標準Table 4 Criteria of drug sensitive paper

1.2.4.4 碳水化合物代謝試驗 抑菌乳酸菌活化后以2%接種量接種于MRS 液體培養基中，37 ℃厭氧培養18 h，無菌條件下離心（10000×g，5 min，4 ℃）棄上清液，用無菌生理鹽水將菌體洗滌2 次后，重懸于1 mL 生理鹽水中。以2%的接種量將菌懸液接種到含有不同碳源（葡萄糖、木糖、果糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚異麥芽糖）的改良MRS 液體培養基中，以葡萄糖為陽性對照，不添加碳源為陰性對照，測定0 h 的OD600吸光度值OD1。37 ℃厭氧培養18 h 后測定OD600吸光度值OD2，最終OD600=OD2-OD1。參照王明芳等[18]定義OD600＜0.15 為不生長，0.15≤OD600≤0.35 為有限生長，OD600＞0.35 為生長良好。

1.3 數據處理

所有實驗平行三次，使用軟件Excel 2021 處理實驗數據，結果以平均值±標準偏差表示。使用Origin 2022 繪制圖表并分析。在NCBI 數據庫中使用BLAST 分析基因序列的序列同源性，使用MEGA 6.0 繪制系統發育樹。

2 結果與分析

2.1 乳酸菌的分離鑒定

乳酸菌在自然界中廣泛存在，主要從肉類、發酵食品、土壤和人類和動物腸道等基質中分離出來。然而，與從其他基質中分離出來的乳酸菌相比，來自人類腸道的乳酸菌具有適應胃腸道環境和能夠長時間定殖等優點[19]。表型和基因型相結合的方法已成為鑒定和評估目標微生物群落物種組成的首選方法[20]。本研究對新疆和田地區維吾爾族來源的母嬰糞便中乳酸菌進行分離鑒定，部分菌株菌落形態及鏡檢、革蘭氏染色見圖1，大多數菌落中間是半透明的，邊緣規則，沒有褶皺，少數菌落表面相對暗淡粗糙，邊緣不規則，鏡下檢查菌落形態均勻，細胞形態呈桿狀（長、短）、圓形（橢圓）。提取疑似乳酸菌DNA 后，選擇合適的程序進行PCR 擴增，部分疑似乳酸菌的groEL基因擴增結果如圖2 所示，在500 bp 有明顯條帶，對擴增產物進行測序，通過BLAST 比對測序結果。從19 對母嬰樣本中共分離出113 株乳酸菌，分屬于14 個種，如圖3 所示，其中所占百分比最多的是唾液聯合乳桿菌（Ligilactobacillus salivarius）和香腸伴生乳桿菌（Companilactobacillus farciminis），所占比例分別為15.04%和15.93%，因此，這兩種乳酸菌是母嬰腸道的優勢菌群。部分菌株groEL基因序列構建系統發育樹見圖4。

圖1 部分乳酸菌的菌落特征與顯微特征Fig.1 Colony characteristics and microscopic characteristics of lactic acid bacteria

圖2 部分疑似乳酸菌菌株的groEL 基因擴增產物凝膠電泳Fig.2 Gel electrophoresis of groEL gene amplification products of lactic acid bacteria

圖3 維吾爾族母嬰腸道乳酸菌種群組成Fig.3 Population composition of intestinal lactic acid bacteria in Uigur mothers and infants

圖4 基于groEL 基因序列的乳酸菌代表菌株系統發育樹Fig.4 Phylogenetic tree of representative strain of lactic acid bacteria based on groEL gene sequence

2.2 乳酸菌的抑菌活性分析

通過分析從母嬰糞便中分離出的113 株乳酸菌對6 種常見病原體的抑菌活性，共篩選出29 株具有良好抑菌活性的乳酸菌進行后續研究，部分菌株的牛津杯實驗結果如圖5 所示，抑菌菌株的抑菌活性見表5。本次試驗的結果表明所試菌株至少對3 種腸道致病菌有抑制作用，所有菌株均表現出致病菌Escherichia coli10411 和Escherichia coli10421 的抑菌活性，5 株干酪乳酪桿菌HTb17X-5、HTb10D-3、HTb8X4-6、HTb17X-4、HTb8X-8，4 株副干酪乳酪桿菌 HTb28X-10、HTb32D-1、HTb25Xx-9、HTb6X-6，6 株植物乳植桿菌HTb6D8-8、HTb6D8-3、HTb6D8-4、HTb23X-3、HTb23X-4、HTb23X-10，5 株香腸伴生桿菌HTb21D5-10、HTb36X-2、HTb9X1-1、HTb20X6-1、HTb8X-5，1 株鼠李糖乳酪桿菌HTb6X-1，2 株口粘液乳桿菌HTb17D1-3、HTb25Xx-4，1 株格式乳桿菌HTb2X-7，2 株羅伊氏粘液乳桿菌HTb34X5-1、HTb34X5-6，3 株發酵粘液乳桿菌HTb30X-6、HTb19X-3、HTb10D12-2 共29株對使用的所有病原菌均具有抑制活性，其中干酪乳酪桿菌HTb10D-3 對腸道致病菌Escherichia coli10411、Escherichia coli21530、Salmonella entericasubsp.enterica serovar Typhimurium10420 和Salmonella entericasubsp.entericaSM1 的抑菌活性最強。尹楊燕等[7]篩選出植物乳植桿菌GX20200417-1 可作為潛在的益生菌用于動物飼料的生產，菌株對于大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌的抑菌圈直徑分別為16、14、15 mm，低于本研究中菌株的抑菌活性。因此篩選出的具有抑菌活性的菌株可作為潛在的抑菌益生菌。

圖5 干酪乳酪桿菌HTb10D-3 對6 種指示菌的抑制活性Fig.5 Inhibitory activity of Lacticaseibacillus casei HTb10D-3 against 6 indicator bacteria

表5 29 株抑菌乳酸菌的抑菌活性分析Table 5 Antibacterial activity analysis of 29 strains of lactic acid bacteria with antibacterial activity

2.3 抑菌菌株的抑菌物質測定

進入腸道的乳酸菌，可以通過分泌短鏈脂肪酸、丁酸、丙酸等酸類，多糖類和細菌素等物質來抑制腸道致病菌[21]。Yin 等[22]從青貯飼料中分離到1 株干酪乳酪桿菌RS1 對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均有抑制作用，可能是在其生長過程中產生大量酸物質，酸物質使其周圍的培養基pH 較低，達到抑制致病菌的效果，抑菌物質為代謝過程中產生的酸物質。本實驗用篩選得到的抑菌菌株發酵液上清進行抑菌實驗，以驗證其酸代謝物為抑菌物質。抑菌菌株的抗菌活性隨著pH 的增加而降低，表6 結果顯示當上清pH 調到6.0 后29 株抑菌乳酸菌中只有3 株菌對個別致病菌有弱抑菌作用，說明所試乳酸菌的抑菌物質為代謝過程中產生的酸物質。

表6 抑菌乳酸菌的抑菌物質分析Table 6 Analysis of antibacterial substances of lactic acid bacteria with antibacterial activity

2.4 抑菌菌株在人工模擬胃腸液中的存活率

益生菌發揮作用必須在通過胃的應激狀態（pH1.5～3.0，3 h）并進入腸道[23]。因此，對胃蛋白酶與胰蛋白酶的耐受性以及對膽鹽的耐受性評估，是乳酸菌菌株作為益生菌食品補充劑開發候選物的選擇標準[24]。抑菌乳酸菌在模擬胃腸液的存活率如圖6所示。圖6（a）結果表明，所有抑菌菌株通過pH2.5的模擬胃液處理4 h 后存活率明顯降低，其中香腸伴生乳桿菌HTb36X-2 的存活率最高，為69.50%。從母嬰糞便中分離的6 株乳酸菌在低pH 條件下有較高的存活率（存活率為50%以上），分別為 HTb9X1-1、HTb34X5-1、HTb23X-3、HTb36X-2、HTb6X-1、HTb6X-6。圖6（b）結果表明通過模擬腸液處理4 h后，試驗菌株存活率下降特別明顯，其中三株菌HTb20X6-1、HTb2X-7 和HTb28X-10 有較高的存活率，存活率分別為7.25%、7.32%和8.00%。抑菌菌株在模擬胃腸液的存活率低于Sui 等[25]研究報道的植物乳植桿菌NF4 在模擬胃液與模擬腸液下4 h的存活率，分別為83.63%與36.98%，但是本研究經模擬胃液或模擬腸液分別處理4 h 后活菌數均大于106CFU/mL。本研究的菌株在模擬胃液下保持一定的存活率，但在模擬腸液條件下喪失生存能力，可能是受到膽鹽和胰蛋白酶的影響，因為高濃度的膽鹽具有溶解膜脂的能力，導致細胞滲漏死亡[26]。此外，菌株對模擬胃腸液的耐受能力表明對酸或膽汁濃度的耐受機制主要取決于特定菌株或物種，并可能對某些細菌蛋白產生抗性[27-28]。

圖6 29 株抑菌乳酸菌經模擬胃液（a）和模擬腸液（b）處理4 h 后的存活率Fig.6 Survival rate of 29 strains of lactic acid bacteria with antibacterial activity after gastric juice (a) and intestinal juice (b)treatment for 4 h

2.5 抑菌菌株的疏水性與自聚性分析

腸道表面的粘附和定殖是益生菌菌株在大腸中發揮有益作用的重要條件，益生菌的自聚集性和疏水性與腸道上皮細胞的粘附性呈正相關，自聚性和疏水性越高，益生菌粘附腸上皮細胞的能力越強，從而促進健康益處[15,29]。因此本實驗對上述具有良好抑菌性能的29 株菌株進行了疏水性和自凝聚實驗評價，圖7 實驗結果表明所有試驗菌株的疏水性都在7%～32%之間，其中菌株HTb34X5-6 和HTb34X5-1 的疏水性最高，分別為31.67%和29.00%（圖7a）。圖7（b）所示，試驗菌株4 h 的自凝聚能力在3%～81%，其中菌株HTb34X5-6 和HTb34X5-1 在4 h 的自凝聚能力最高，分別為 81.32%和70.91%。Wang 等[30]研究表明，干酪乳酪桿菌 ZX633 具有良好的益生特性，可以作為潛在的益生菌，其自聚性與疏水性分別為15.32%與33.48%，本研究中菌株HTb34X5-6 和HTb34X5-11 相比之下表現出更高的疏水性與自聚性。本研究中菌株之間表現出不同的疏水性，可能歸因于其細胞壁中親水性或疏水性成分的變化[15,27]。雖然所有試驗菌株都表現出一定的自聚集能力，但自聚集程度有所不同，且自聚集性隨著時間的推移而增加，這可能與細胞表面的蛋白質成分之間的相互作用有關[31]。

圖7 29 株抑菌乳酸菌的疏水性（a）和自聚性（b）分析Fig.7 Hydrophobicity (a) and auto-aggregation (b) analysis of 29 strains of lactic acid bacteria with antibacterial activity

2.6 抑菌菌株的耐藥性分析

菌株耐藥基因可能出現遷移，而耐藥基因向病原菌的遷移會導致超級病菌的出現。因此，為了驗證菌株耐藥性，本研究利用紙片瓊脂擴散法研究了29 株抑菌乳酸菌對常見臨床抗生素的耐藥性（圖8）。從圖中可看出，所試菌株對左氧氟沙星、環丙沙星、慶大霉素、磺胺甲惡唑、苯唑西林具有耐藥性，對青霉素、紅霉素、米諾環素、氨芐西林和克林霉素表現出中度敏感或敏感性，其中副干酪乳酪桿菌HTb6X-6，羅伊氏粘液乳桿菌HTb34X5-6、HTb34X5-1，干酪乳酪桿菌HTb17X-5、HTb17X-4，發酵粘液乳桿菌HTb10D12-2 對5 種抗生素表現出中度敏感或敏感性。總體而言，干酪乳酪桿菌 HTb8X4-6、HTb10D-3、HTb8X-8 對大多數抗生素耐藥。所試菌株表現出對氨基糖苷類（慶大霉素）和喹喏酮類（環丙沙星與左氧氟沙星）均有耐藥，可能歸因于菌株細胞中缺乏特定抗生素的靶位，Delgado 等[32]研究表明，從人類糞便分離的乳酸菌對喹喏酮類（環丙沙星）具有耐藥性，且研究表明大部分乳酸菌對氨基糖苷類耐藥，與本實驗結果一致，細微的差異可以歸因于品系和物種的特異性[33]。雖然普遍認為耐藥性通常是自身內在染色體編碼的、不具有轉移性[34]，但對人體仍存在一定潛在危害，眾多野生型乳酸菌均具有一種或多種抗生素耐受現象，本研究的菌株還對β-內酰胺類（青霉素與苯唑西林）與磺胺類（磺胺甲惡唑）抗生素具有耐藥性。所試菌株對紅霉素、米諾環素、氨芐西林和克林霉素表現出不耐藥，可能是抗生素能抑制乳酸菌細胞壁合成酶活性，從而使菌體破裂死亡[35]。結果表明不同菌株對不同種類抗生素的敏感性不同，證實了其具有一定的安全性，符合益生菌的篩選標準。

圖8 29 株抑菌乳酸菌菌株的抗生素敏感性分析Fig.8 Antibiotic resistance of 29 strains of lactic acid bacteria with antibacterial activity

2.7 抑菌菌株的碳水化合物代謝分析

乳酸菌能利用不同宿主的不同飲食來源的糖類是其能在腸道內定植的主要因素之一。本研究對29株抑菌乳酸菌代謝12 種糖的能力進行了研究（表7）。由表可知，除了麥芽糊精與菊糖外，菌株能在其余10 種糖中生長良好。發酵粘液乳桿菌HTb10D12-2、HTb30X-6，伴生香腸乳桿菌HTb8X-5、HTb6X-1，植物乳植桿菌HTb23X-3、HTb6D8-8、HTb6D8-3，口粘液乳桿菌HTb17D1-3，副干酪乳酪桿菌HTb32D-1、干酪乳酪桿菌HTb8X-8 代謝糖能力最優，能代謝所有的供試糖。Yuan 等[36]從海南黎族、新疆維吾爾族糞便中篩選得到64 株副干酪乳酪桿菌，并研究其碳源利用能力，結果表明同一民族的菌株的糖代謝能力相似，且對于菊粉的代謝能力不強，與本研究的結果一致。菌株能代謝不同碳源可能是其具有能分解糖類的各種酶，具體的機制有待進一步的研究。

表7 抑菌乳酸菌的糖代謝發酵譜Table 7 Sugar metabolism and fermentation of lactic acid bacteria with antibacterial activity

3 結論

本研究對維吾爾族母嬰對樣本中乳酸菌進行分離鑒定，并篩選具有抑菌活性的乳酸菌，對具有抑菌作用的29 株菌株進行益生特性試驗及安全性分析，最終篩選出香腸伴生乳桿菌HTb36X-2，副干酪乳酪桿菌HTb6X-6，干酪乳酪桿菌17X-4、17X-5，羅伊氏粘液乳桿菌HTb34X5-1、HTb34X5-6，發酵粘液乳桿菌10D12-2 共7 株菌株具有良好的抑菌效果、較好的胃腸液耐受性、較強的疏水性與自凝聚能力，可作為潛在益生菌菌株，為新疆特色產品的開發和益生菌的應用奠定理論基礎，但還需要對具有潛在益生特性的菌株進行體內實驗和臨床實驗進一步驗證。