四季花金花茶花芽分化進程及葉片內(nèi)源激素變化

江海都 孫菲菲 秦惠珍 唐健民 韋霄 柴勝豐

摘 要： ???四季花金花茶（Camellia perpetua）為山茶屬中唯一幾乎全年開花的珍稀瀕危植物。為探究其花芽分化進程及不同花發(fā)育時期和年生長周期葉片內(nèi)源激素變化，該研究通過石蠟切片，觀察四季花金花茶花芽分化進程，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定不同花發(fā)育時期葉片及年生長周期內(nèi)有花芽和無花芽葉片的脫落酸（ABA）、吲哚乙酸（IAA）、赤霉素（GA3）和玉米素核苷（ZR）含量的變化規(guī)律。結(jié)果表明：（1）四季花金花茶花芽分化順序由外向內(nèi)進行，分為6個時期，共歷時35 d，從花芽分化至開花約2個月。（2）花芽形態(tài)分化期葉片ABA、GA3的含量及GA3/ABA、（IAA+GA3）/ZR的比值較高，IAA、ZR的含量及IAA/ABA、ZR/ABA的比值較低。（3）年生長周期內(nèi)有花芽葉片ABA、IAA、ZR的含量整體上高于無花芽葉片；IAA/ZR及（IAA+GA3）/ZR的比值整體上低于無花芽葉片。綜上表明，四季花金花茶花芽分化至開花時間較短；高水平的ABA、GA3及低水平的IAA、ZR有利于花芽分化；較高水平的ABA、IAA及ZR有利于花芽發(fā)育。該研究為該物種持續(xù)開花機理的闡明提供了參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞： ?四季花金花茶， 花芽分化， 持續(xù)開花， 內(nèi)源激素， 瀕危植物

中圖分類號： ??Q945.6

文獻標(biāo)識碼： ???A

文章編號： ??1000-3142（2024）01-0056-12

Flower bud differentiation and leaf endogenous

hormone changes of Camellia perpetua

JIANG Haidu1，2， SUN Feifei1， QIN Huizhen1， TANG Jianmin1，

WEI Xiao1，2， CHAI Shengfeng1，2*

（ 1. Guangxi Institute of Botany， Guangxi Zhuang Autonomous Region and Chinese Academy of Sciences， Guilin 541006， Guangxi， China;

2. College of Tourism and Landscape Architecture， Guilin University of Technology， Guilin 541006， Guangxi， China ）

Abstract： ??Camellia perpetua is the only rare and endangered plant in the genus Camellia that blooms almost all year round. In order to explore the flower bud differentiation process and the changes of endogenous hormones in leaves at different flower development periods and annual growth cycles， the process of C. perpetua flower bud differentiation was observed by paraffin sections. The contents of abscisic acid （ABA）， indole-3-acetic acid （IAA）， gibberellin （GA3） and zeatin nucleoside （ZR） in leaves in different flower development periods and in leaves with flower bud and leaves without flower bud in annual growth cycle were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The results were as follows： （1） The flower bud differentiation sequence of C. perpetua was from the outside to the inside， and it was divided into six periods， which lasted 35 d in total， from the bud differentiation to flowering about two months. （2）The contents of ABA and GA3 [KG0.5mm]and the ratios of GA3/ABA and （IAA + GA3） /ZR were higher in flower bud morphological differentiation period， while the contents of IAA and ZR and the ratios of IAA/ABA and ZR/ABA were lower. （3）The contents of ABA， IAA and ZR in the leaves with flower bud were higher than those in the leaves without flower bud. The IAA/ZR and （IAA + GA3） /ZR ratios were lower than those of the leaves without flower bud. In conclusion， the flower bud differentiation to flowering time of C. perpetua is shorter. High levels of ABA and GA3 and low levels of IAA and ZR are beneficial to flower bud differentiation; higher levels of ABA， IAA and ZR are beneficial to flower bud development. The study provides the reference for clarifying the continuous flowering mechanism of this species.

Key words： ?Camellia perpetua， flower bud differentiation， continuous flowering， endogenous hormones， endangered plant

山茶科（Theaceae）山茶屬（Camellia）金花茶組（Sect. Chrysantha Chang）植物是世界珍稀的觀賞植物和培育茶花新品種的珍貴種質(zhì)資源，是山茶花中唯一具有黃色花的類群，被譽為“茶族皇后”“植物界的大熊貓”和“幻想中的黃色山茶”，具有極高的觀賞價值和科研價值（傅立國，1992）。該類群分布范圍狹窄，資源數(shù)量有限，并且野生資源破壞十分嚴重，該組所有植物都已列入《國家重點保護野生植物名錄》（國家林業(yè)和草原局 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部，2021）。四季花金花茶（Camellia perpetua）為常綠灌木或小喬木，樹型優(yōu)美，花色金黃，花大葉小，分布于廣西崇左局部地區(qū)的石灰?guī)r山坡中上部常綠闊葉林中，四季開花且盛花期在夏季（高繼銀等，2010），是金花茶組植物中極具特色的種類。

植物多季開花的特性是由花芽分化類型決定的，主要表現(xiàn)在一年四季或三季連續(xù)開花或者兩次開花（王榮和成仿云，2007），這種現(xiàn)象有可能是由內(nèi)源激素信號與外源環(huán)境信號相互協(xié)調(diào)的結(jié)果（Yi et al.， 2022），以使植物的生長和繁殖與適當(dāng)?shù)募竟?jié)相互適應(yīng)（Romera-Branchat et al.， 2014）。

植物內(nèi)源激素是植物內(nèi)部重要的調(diào)節(jié)物質(zhì)，同時也具有信號傳導(dǎo)功能，對植物花形態(tài)建成具有調(diào)控作用（Buban & Faust， 1982；Yan et al.， 2019），并且這種調(diào)控作用是由多種激素參與調(diào)節(jié)而產(chǎn)生（Zhang et al.， 2014；Guo et al.， 2022）。朱章順等（2021）研究表明，木芙蓉（Hibiscus mutabilis）在花芽分化期葉片中較高含量的脫落酸（ABA）、細胞分裂素（CTK）和赤霉素（GA3）可促進花芽分化，初花期以后葉片中較高含量的赤霉素、ABA和乙烯（ETH）可促進其開花，加速花的衰敗。油茶（Camellia oleifera）在花芽分化后期，高含量的赤霉素在子房和花藥形成期起到較大作用，較低含量的吲哚乙酸（IAA）和較高含量的ABA可能對雌雄蕊成熟期有促進作用，可能促進油茶花芽成熟和開花（黃潤生等，2021）。毛竹（Moso bamboo）在成花期和揚花期高水平的ABA、玉米素核苷（ZR）和赤霉素及低水平的IAA可能促進毛竹花的發(fā)育（齊飛艷等，2013）。此外，棗（Ziziphus jujuba）花形成過程中高的ABA/GA3比值對花芽孕育和花發(fā)育均有利，ABA/IAA比值增大，IAA/GA3比值減小，可促進花芽的孕育，有利于花芽形成（牛輝陵等，2015）。因此，研究植物成花過程中內(nèi)源激素含量及比值的變化規(guī)律，對于了解其開花生理基礎(chǔ)及揭示植物成花過程中激素調(diào)控具有重要意義（Chi et al.， 2020）。

目前，有關(guān)金花茶組植物花芽分化及內(nèi)源激素動態(tài)的相關(guān)研究，主要集中在金花茶（Camellia nitidissima）（漆小雪等，2013；孫紅梅等，2017；喇燕菲等，2021）和東興金花茶（C. tunghinensis）（郭辰等，2016；唐健民等，2017）上，四季花金花茶作為金花茶組植物中幾乎全年開花的特殊類群，花芽分化相比于其他金花茶種類可能更快，持續(xù)花芽分化可能與某些內(nèi)源激素有關(guān)，關(guān)于其花芽分化與內(nèi)源激素動態(tài)的相關(guān)研究還未見報道。為此，本研究以四季花金花茶為試驗材料，通過石蠟切片技術(shù)觀察花芽分化不同階段形態(tài)結(jié)構(gòu)，采用酶聯(lián)免疫吸附法對四季花金花茶同一時間不同花發(fā)育時期葉片及年生長周期有花芽和無花芽葉片內(nèi)源激素含量進行測定，擬探討以下問題：（1）四季花金花茶花芽分化進程如何；（2）葉片內(nèi)源激素含量與花發(fā)育之間存在何種關(guān)系。本研究結(jié)果可為該物種持續(xù)開花機理的闡明提供參考依據(jù)。同時，該物種可以在同一個時間點取不同花發(fā)育階段的材料，確保環(huán)境因子一致，對于花器官發(fā)育與葉片內(nèi)源激素關(guān)系的探討更具有參考意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗地位于中國科學(xué)院桂林植物園金花茶種質(zhì)資源圃（110°18′1″ E、25°4′12″ N ），該區(qū)域?qū)儆谥衼啛釒Ъ撅L(fēng)氣候，年平均溫度為19.12 ℃，年均降水量為1 890 mm，年日照時數(shù)平均為1 487 h。上層喬木樹種主要有馬尾松（Pinus massoniana）、三角楓（Acer buergerianum）和中華杜英（Elaeocarpus chinensis）等。試驗材料為引種栽培的四季花金花茶成年植株，15～20年生，長勢良好。四季花金花茶一年都有花芽分化，其中3—5月（花芽分化主要集中在頂芽）和7—8月（花芽分化主要集中在側(cè)芽）為2個花芽分化較為集中階段，以3—5月分化的花芽數(shù)最多，11月至翌年2月可見零星花芽。選擇苗圃內(nèi)生長健壯、樹勢一致、無病蟲害的10株四季花金花茶作為觀測和采樣對象，每株分別選取東、南、西、北4個不同方位具有代表性的枝條，對枝條上的頂芽和側(cè)芽進行掛牌標(biāo)記，觀察其發(fā)育過程，并應(yīng)試驗要求進行采樣。

1.2 試驗方法

1.2.1 花芽分化形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察

石蠟切片法觀察：從2021年2月27日開始，對1年生枝條頂端剛剛開始分化的花芽掛牌標(biāo)記，每7 d采集不同發(fā)育階段的花芽30個，2021年4月3日花芽分化完成后停止采集。采集的花芽放置于裝有FAA溶液（70%乙醇∶福爾馬林∶冰醋酸 = 90∶5∶5）的玻璃瓶中固定24 h以上，后置于4 ℃冰箱保存。參照李和平（2009）的常規(guī)石蠟切片制作方法，首先對采集的樣品進行乙醇逐級脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、展片、粘片及烤片，然后脫蠟、復(fù)水、番紅-固綠染色、脫水、透明、封片，最后使用光學(xué)顯微鏡觀察并拍照記錄。

同時，對花芽分化至花朵開放的時間及枝條上各葉腋的成花規(guī)律進行觀測。

1.2.2 葉片內(nèi)源激素的測定 ?同一時間不同花發(fā)育時期葉片采樣：春季四季花金花茶花芽陸續(xù)開始分化，主要集中在頂芽。于2021年6月15日分別對同一植株枝條頂部著生花芽或花的葉片進行采樣，分為5個時期：（I）前分化期；（Ⅱ）花芽形態(tài)分化期；（Ⅲ）花蕾期；（Ⅳ）開花期；（Ⅴ）凋謝期（圖1），每株采集葉片4～6片，重復(fù)3次。采集的葉片放在冰盒里帶回實驗室，立即用液氮冷凍，存放在-80 ℃超低溫冰箱保存，用于測定內(nèi)源激素含量。

年生長周期有花芽葉片和無花芽葉片的采樣：四季花金花茶成年植株每年10月抽梢，翌年3—4月新生枝條開始著生花芽。試驗于2020年4月至2021年3月每月月初，對同一植株一年生枝條上著生花芽的葉片（有花芽葉片）和相同位置未著生花芽的葉片（無花芽葉片）分別進行采樣，每個處理采集葉片4～6片，重復(fù)3次。采集的樣品放在冰盒帶回實驗室，立即用液氮冷凍，存放在-80 ?℃超低溫冰箱保存，用于測定內(nèi)源激素含量。

葉片內(nèi)源激素的測定：采用酶聯(lián)免疫吸附法測定同一時間不同花發(fā)育時期及年生長周期有花芽和無花芽葉片內(nèi)的脫落酸（ABA）、吲哚乙酸（IAA）、赤霉素（GA3）和玉米素核苷（ZR）含量。試驗步驟如下：（1）準(zhǔn)確稱取存放在-80 ℃超低溫冰箱保存的冷凍樣品0.5 g，加入2 mL 80%甲醇溶液，在冰浴條件下研磨成勻漿，轉(zhuǎn)入10 mL的離心管，用1 mL提取液將研缽沖洗干凈，一并轉(zhuǎn)入離心管中搖勻，4 ℃靜置提取4 h，3 500 r·min-1離心8 min，取上清液。沉淀中再次加入1 mL提取液，搖勻，4 ℃靜置提取1 h，3 500 r·min-1離心8 min，合并兩次的上清液，并記錄總體積。（2）上清液過C-18固相萃取柱，將過柱后的樣品轉(zhuǎn)入5 mL離心管，氮氣吹干后，用樣品稀釋液定容至2 mL。（3）樣品測定步驟按照ELISA試劑盒說明書操作，用酶標(biāo)儀（Bio Tek ELX 808）測定標(biāo)準(zhǔn)品和各樣品在450 nm處的光密度（optical density，OD）值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各樣品內(nèi)源激素含量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

利用 Microsoft Excel 2010及Origin 2015軟件進行數(shù)據(jù)處理及作圖， 采用單因素方差分析法比較不同花發(fā)育階段葉片內(nèi)源激素含量的差異，并進行多重比較（Duncan法）。

2 結(jié)果與分析

2.1 花芽分化形態(tài)解剖特征

采用石蠟切片法觀察四季花金花茶花芽分化過程，可分為6個時期，即前分化期、分化初期、萼片分化期、花瓣分化期、雌雄蕊分化期、子房形成期（圖2），共歷時35 d。

前分化期：營養(yǎng)生長錐體積較小，生長點為尖形，此時花芽生長點的頂端分生組織細胞比較小、排列緊密，隨著營養(yǎng)生長錐的進一步分化，其形態(tài)也有所變化，從外觀和解剖結(jié)構(gòu)進行觀測，此階段較難區(qū)分是葉芽還是花芽。

分化初期：花芽生長點逐漸生長，基部加寬，花芽形態(tài)較小，但從外觀上可區(qū)分花芽。石蠟切片顯示，生長錐明顯加寬，基部膨大，出現(xiàn)花萼原基，此后花芽橫向分裂加快，生長點體積增大。

萼片分化期：花芽生長點下方生長錐附近細胞分裂加速，生長點頂端繼續(xù)生長，在外圍開始出現(xiàn)花萼原基小突起，逐漸分化成萼片，并覆蓋住生長點，花萼分化結(jié)束。

花瓣分化期：花萼原基內(nèi)側(cè)花瓣原基小突起，花芽開始進入花瓣分化期，生長點頂端繼續(xù)生長變平，之后花瓣原基以不同的速度向上生長，縱向生長比橫向生長快，頂端為半橢圓形狀，最后分化成花瓣。

雌、雄蕊分化期：生長點略向下凹且變得更加寬，生長點上出現(xiàn)雌、雄蕊原基小突起，生長點向四周擴散，中部比較大的突起為雌蕊原基，同期的雄蕊原基圍繞在雌蕊原基生長，后期雌、雄蕊原基縱向生長加速。雌蕊原基形成后，花芽分化過程完成，進入花器官發(fā)育階段。

子房形成期：雌蕊原基和雄蕊原基繼續(xù)伸長，雌蕊原基下部逐漸膨大形成子房，上部合攏形成柱頭，下部為花柱。進入子房形成期表明花芽分化即將完成，進入花器官發(fā)育階段。

四季花金花茶從花芽開始分化至開花的時間約為67 d，并且各葉腋位置上一年內(nèi)可多次開花，有利于其形成持續(xù)開花的模式。

2.2 同一時間不同花發(fā)育時期葉片內(nèi)源激素含量的變化

ABA含量總體呈“V”型變化趨勢，前分化期含量最高，花蕾期最低，花蕾期顯著低于除開花期之外的其他時期（P<0.05）（圖3：A）。IAA含量總體呈“W”型變化趨勢，前分化期含量最高，其次為凋謝期，開花期最低且顯著低于其他時期（P<0.05）（圖3：B）。GA3含量總體呈“N”型變化趨勢，前分化期和開花期含量較低，花芽形態(tài)分化期最高（圖3：C）。ZR含量前期變化比較平緩，在凋謝期急劇上升（圖3：D）。

2.3 同一時間不同花發(fā)育時期葉片內(nèi)源激素比值的變化

IAA/ABA比值呈“W”型，在花蕾期最高，開花期最低（圖4：A）。ZR/ABA比值亦呈“W”型，在花芽形態(tài)分化期最低，凋謝期最高（圖4：B）。GA3/ABA比值呈“N”型，前分化期最低，花芽形態(tài)分化期最高（圖4：C）。IAA/ZR比值呈下降趨勢，前分化期最高，開花期最低（圖4：D）。（IAA+GA3）/ZR比值呈先上升后下降的趨勢，在花芽形態(tài)分化期最高（圖4：E）。

2.4 年生長發(fā)育過程中葉片內(nèi)源激素含量及比值的變化

四季花金花茶年生長發(fā)育過程中有花芽葉片ABA、IAA、ZR的含量整體上高于無花芽葉片，而GA3含量無明顯變化規(guī)律（圖5）；有花芽葉片IAA/ZR、（IAA+GA3）/ZR的比值則低于無花芽葉片（圖6）。

3 討論與結(jié)論

3.1 花芽分化進程

花芽分化是植物從營養(yǎng)生長向生殖生長過渡的重要標(biāo)志，這種轉(zhuǎn)變涵蓋了許多復(fù)雜的形態(tài)和生理變化（朱高浦等，2011；He et al.， 2018）。喇燕菲等（2021）報道3種金花茶花芽分化過程分為未分化期、分化初期、苞片分化期、花瓣分化期、雄蕊分化期、雌蕊分化期和子房形成期，其中金花茶花芽分化期持續(xù)66 d，淡黃金花茶（Camellia flavida）持續(xù)43 d，四季花金花茶持續(xù)30 d。本研究中四季花金花茶的花芽分化時期與3種金花茶基本一致，但與金花茶和淡黃金花茶相比，其花芽分化的時間明顯較快且從花芽分化到開花的時間也更短（四季花金花茶67 d、金花茶253 d、淡黃金花茶126 d）（柴勝豐等，2009；王翊等，2020）；在一年內(nèi)其枝條腋位上的花芽開花凋謝后會重新長出花芽是能持續(xù)開花的重要原因。本研究中四季花金花茶花芽分化的時間長于喇燕菲等（2021）的報道，可能與本研究所在地桂林的春季氣溫低于南寧有關(guān)。

3.2 同一時間不同花發(fā)育時期葉片內(nèi)源激素含量及比值的變化

ABA對植物的生長發(fā)育具有重要的調(diào)控作用。木芙蓉花芽分化期葉片較高水平的ABA有利于花芽分化，初花期以后葉片中較高水平的ABA有利于開花并加速花的凋謝（朱章順等，2021）。研究表明，高水平的ABA有助于花芽分化（艾星梅等，2018；Wang et al.， 2020；范瑾怡等，2022），是促進植物開花的重要激素（Luckwill， 1974）。本研究發(fā)現(xiàn)，四季花金花茶前分化期ABA含量達最高，花芽形態(tài)分化期緩慢下降仍保持較高值，到花蕾期最低，開花期和凋謝期又逐漸升高。這說明高水平的ABA有利于四季花金花茶花芽分化及開花，與對木芙蓉（朱章順等，2021）的研究結(jié)果相一致。

低水平的IAA有利于同色兜蘭（Paphiopedilum concolor）（李秀玲等，2021）、番紅花（Crocus sativus）（張衡鋒等，2018）、馬鈴薯（Solanum tuberosum）（艾星梅等，2018）花芽分化。但是，韋靖杰等（2021）研究表明，高水平的IAA有利于陸川油茶（Camellia vietnamensis）花蕾的形態(tài)構(gòu)建，而低水平促使其花凋謝。另外，‘鐵成一號油茶（Camellia oleifera， ‘Tiecheng No.1）開花過程中，IAA對開花的調(diào)控表現(xiàn)為低水平促進開花，而高水平促進花調(diào)謝（喻雄等，2019）。這表明IAA在調(diào)節(jié)不同物種的成花過程中具有較大差異。本研究發(fā)現(xiàn)，前分化期和凋謝期IAA含量較高，而其他3個時期含量較低，說明低水平的IAA有利于四季花金花茶花芽分化和花開放，而較高水平的IAA促使花凋謝。

高水平的GA3有利于棉花（Gossypium hirsutum）（任桂杰等，2002）、菊花（Chrysanthemum morifolium）（潘瑞熾和董愚得，1992）和木芙蓉（朱章順等，2021）花芽分化。從GA3的生理功能角度上來看，GA3可以導(dǎo)致α-淀粉酶的形成，促使淀粉酶水解為還原糖，而還原糖的積累則可以促使花芽的分化（Zhang & Gao， 1991）。本研究發(fā)現(xiàn)，前分化期GA3含量較低，花芽形態(tài)分化期急劇上升至最高，至開花期又降至最低，說明高水平的GA3有利于四季花金花茶花芽分化，而低水平的GA3促使花開放。

ZR對植物細胞的分裂具有促進作用，大多數(shù)研究結(jié)果表明ZR是植物花芽分化的促進因子。如高水平的ZR有利于蘋果（曹尚銀等，2000）、羅漢果（Siraitia grosvenorii）（覃喜軍等，2010）、油橄欖（Olea europaea）（朱振家等，2015）花芽分化。本研究發(fā)現(xiàn)，ZR含量在前分化期至開花期較低且變化比較平緩，在凋謝期急劇上升，說明低水平的ZR有利于四季花金花茶花芽分化和花開放，而高水平的ZR促使花凋謝。本研究結(jié)果與前人研究結(jié)果并不一致，一方面可能與研究植物種類有關(guān)，另一方面可能與本研究是同一時間采樣有關(guān)，其調(diào)控機制還需要進一步深入研究。

植物花形成是各種激素相互作用的結(jié)果。如較低的IAA/ABA、ZR/ABA比值有利于忽地笑（Lycoris aurea）和中國石蒜（L. chinensis）花芽分化（范瑾怡等，2022）；較低的ZR/IAA比值有利于藍莓花芽分化（宋楊等，2014）；較低的GA3/ABA比值有利于棗花（牛輝陵等，2015）、蘋果（曹尚銀等，2000）花芽分化。本研究發(fā)現(xiàn)，四季花金花茶花芽形態(tài)分化期IAA/ABA、ZR/ABA的比值較低，GA3/ABA、（IAA+GA3）/ZR的比值較高，說明較低的IAA/ABA、ZR/ABA比值和較高的GA3/ABA、（IAA+GA3）/ZR比值可促進其花芽分化。

3.3 年生長發(fā)育過程中葉片內(nèi)源激素含量及比值的變化

金花茶盛花期花多植株葉內(nèi)源IAA、ZR和GA3含量高于花少植株或無花植株；花期內(nèi)，有花植株果枝葉IAA/ZR、IAA/ABA、ZR/ABA及GA3/ABA的比值均高于無花植株，而（IAA+GA3）/ZR比值低于無花植株（孫紅梅等，2017）。什錦丁香（Syringa chinensis）花芽分化過程中成花枝條葉片ABA、ZR含量以及ZR/IAA比值均明顯高于未成花枝條葉片（那光宇等，2012）。馬鈴薯成花植株的ZR和ABA含量及ZR/IAA、ZR/GA3的比值始終高于未成花植株，說明高水平的ZR和ABA易促進花原基的形成（艾星梅等，2018）。本研究顯示，四季花金花茶年生長發(fā)育過程中有花芽葉片ABA、IAA及ZR含量整體上高于無花芽葉片；IAA/ZR、（IAA+GA3）/ZR的比值整體上低于無花芽葉片，說明較高水平的ABA、IAA、ZR含量及較低的IAA/ZR、（IAA+GA3）/ZR比值有利于四季花金花茶花芽發(fā)育。本研究結(jié)果與前人研究結(jié)果有相似之處，但也存在一些差異，這可能與研究物種生物學(xué)特性有關(guān)，四季花金花茶一年內(nèi)都有花芽分化和持續(xù)開花，其枝條各腋位一年內(nèi)可多次形成花芽和開花，其激素調(diào)控機制還需要進一步深入研究。

綜上所述，四季花金花茶持續(xù)開花受多種激素的調(diào)控，要深入了解這些激素在四季花金花茶花發(fā)育過程中的作用，還應(yīng)研究激素代謝，借助基因水平和蛋白水平的研究，并開展外源激素調(diào)控的田間實驗，揭示四季花金花茶持續(xù)開花的機理和規(guī)律。

參考文獻：

AI ?XM， HE RY， HU YF， 2018. Flower bud differentiation and their relationships with content changes of endogenous hormones in potatoes ［J］. Acta Bot Boreal-Occident Sin， 38（1）： 87-94. ［艾星梅， 何睿宇， 胡燕芳， 2018. 馬鈴薯花芽分化與內(nèi)源激素動態(tài)變化的關(guān)系 ［J］. 西北植物學(xué)報， 38（1）： 87-94.］

BUBAN T， FAUST M， 1982.Flower bud induction in apple trees： internal control and differentiation ［J］. Hortic Rev， 4（2）： 174-203.

CAO SY， ZHANG JC， WEI LH， 2000. Studies on the changes of endogenous hormones in the differentiation period of flower bud in apple tress ［J］. J Fruit Sci， 17（4）： 244-248. ［曹尚銀， 張俊昌， 魏立華， 2000. 蘋果花芽孕育過程中內(nèi)源激素的變化 ［J］. 果樹科學(xué)， 17（4）： 244-248.］

CHAI SF， WEI X， JIANG YS， et al.， 2009. The flowering phenology and characteristics of reproductive modules of endangered plant Camellia nitidissima ［J］. J Trop Subtrop Bot， 17（1）： 5-11. ?［柴勝豐， 韋霄， 蔣運生， 等， 2009. 瀕危植物金花茶開花物候和生殖構(gòu)件特征 ［J］. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報， 17（1）： 5-11.］

CHI ZH， WANG YQ， DENG QX， et al.， 2020. Endogenous phytohormones and the expression of flowering genes synergistically induce lowering in loquat ［J］. J Integr Agric， 9（9）： 2247-2256.

FU LG，1992. Thered book of Chinese plants 1 rare and endangered plants： Vol. 1 ?［M］. Beijing： Science Press. ?［傅立國， 1992. 中國植物紅皮書一稀有瀕危植物： 第一冊 ［M］. 北京： 科學(xué)出版社.］

FAN JY， ZHANG YT， WU WJ，et al.， 2022. Changes of endogenous hormones in 2 kinds of Lycoris plants at different growth stages ［J］. Mol Plant Breed， 20（19）： 6550-6558. ?［范瑾怡， 張瑩婷， 吳文菁， 等， 2022. 2種石蒜屬植物不同生育期內(nèi)源激素含量變化 ［J］. 分子植物育種， 20（19）： 6550-6558.］

GAO JY， LIU XK， HUANG LD， et al.， 2010. Another major discovery of flowering camellia — Golden tea family in the leader ‘Camellia perpetua ［J］. Chin Flower Bonsai， （1）： 2-4. ?［高繼銀， 劉信凱， 黃連冬， 等， 2010. 四季開花的茶花又一重大發(fā)現(xiàn)——金花茶家族中的佼佼者‘崇左金花茶 ［J］. 中國花卉盆景， （1）： 2-4.］

GUO C， YANG X， YANG GQ， et al.， 2016. Dynamic changes of endogenous hormones in blossomand fruit period of Camellia tunghinesis Chang ［J］. Guangxi Sci， 23（3）： 278-285. ?［郭 辰， 楊 雪， 楊光泉， 等， 2016. 東興金花茶花果期內(nèi)源激素動態(tài)變化 ［J］. 廣西科學(xué)， 23（3）： 278-285.］

GUO YY， AN LZ， YU HY， et al.， 2022. Endogenous hormones and biochemical changes during flower development and florescence in the buds and leaves of Lycium ruthenicum Murr ［J］. Forests， 13（5）： 763.

HE WG， CHEN YC， GAO M， et al.， 2018. Transcriptome analysis of Litsea cubeba floral buds reveals the role of hormones and transcription factors in the differentiation process ［J］. G3-genes Genome Gene， 8（4）： 1103-1114.

HUANG RS， ZHANG H， LIAO BY， et al.， 2021. Difference analysis of endogenous hormones and metabolomics in the late stage of flower buds differentiation of Camellia oleifera ［J］. Non-wood For Res， 39（3）： 99-113. ?［黃潤生， 張 暉， 廖柏勇， 等， 2021. 油茶花芽分化后期內(nèi)源激素與代謝組學(xué)差異分析 ［J］. 經(jīng)濟林研究， 39（3）： 99-113.］

LUCKWILL LC， 1974. A new look at the process of fruit bud formation inapple ［J］. Proc Xix Int Hortic Congr， 3： 327.

LI HP， 2009. Plant microscopy ?［M］. Beijing： Science Press. ?［李和平， 2009. 植物顯微技術(shù) ［M］. 北京： 科學(xué)出版社.］

LA YF， XIAO LM， HUANG H， et al.， 2021. Process of flowering bud differentiation and comparison of morphological characteristics of three species in yellow Camellia ［J］. S Chin J Agric Sci， 34（5）： 977-983. ?［喇燕菲， 肖麗梅， 黃 涵， 等， 2021. 3種金花茶花芽分化進程及形態(tài)學(xué)特征比較 ［J］. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報， 34（5）： 977-983.］

LI XL， FAN JZ， HE JZ， et al.， 2021. Relationship between endogenous hormone changes and flowering in the leaves of Paphiopedilum concolor ［J］. Chin J Tropical Crops， 42（9）： 2638-2644. ?［李秀玲， 范繼征， 何荊洲， 等， 2021. 同色兜蘭葉片內(nèi)源激素變化與開花關(guān)系研究 ［J］. 熱帶作物學(xué)報， 42（9）： 2638-2644.］

NA GY， ZHANG SY， GUO N，et al.， 2012. A study on the changes of plant hormones during flower bud differentiation stage in Syringa chinensis ［J］. J Inn Mong Agric Univ （Nat Sci Ed） ， 33（Z1）： 58-61. ?［那光宇， 張姝媛， 郭 娜， 等， 2012. 什錦丁香花芽分化過程中植物內(nèi)源激素的變化 ［J］. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）， 33（Z1）： 58-61.］

NIU HL， ZHANG HW， BIAN Y， et al.， 2015. Flower formation and endogenous hormones dynamic in Chinese jujube ［J］. Acta Hortic Sin， 42（4）： 655-664. ?［牛輝陵， 張洪武， 邊媛， 等， 2015. 棗花分化發(fā)育過程及其內(nèi)源激素動態(tài)研究 ［J］. 園藝學(xué)報， 42（4）： 655-664.］

National Forestry and Grassland Administration， Ministry of Agriculture and Rural Affairs （No. 15 of 2021）. List of Wild Plants under Key State Protection ［EB/OL］. （2023-09-07）［2022-11-31］. http：//www.gov.cn/zhengce/zhengceku/2021-09/09/content_5636409.htm. ?［國家林業(yè)和草原局 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部（2021年第15號）. 國家重點保護野生植物名錄. ［EB/OL］. （2023-09-07）［2022-11-31］. http：//www.gov.cn/zhengce/zhengceku/2021-09/09/content_5636409.htm.］

PAN RC，DONG YD， 1992. Plant physiology ?［M］. Beijing： Higher Education Press. ?［潘瑞熾，董愚得， 1992. 植物生理學(xué) ［M］. 北京： 高等教育出版社.］

QI XX， WEI X， WANG XJ， et al.， 2013. Changes in endogenous hormone content during the Camellia stage ?［J］. Agric Sci Jiangsu， 41 （3）： 141-144. ?［漆小雪， 韋 霄， 王熊軍， 等， 2013. 金花茶花期內(nèi)源激素含量的變化 ［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)， 41（3）： 141-144.］

QI FY， PENG ZH， HU T， et al.， 2013. Changes of endogenous hormones in different organs during the flowering phase of moso bamboo ［J］. For Res， 26（3）： 332-336. ?［齊飛艷， 彭鎮(zhèn)華， 胡陶， 等， 2013. 毛竹花期不同器官內(nèi)源激素含量的變化 ［J］. 林業(yè)科學(xué)研究， 26（3）： 332-336.］

QIN XJ， HUANG XY， JIANG SY， et al.， 2010. Changes in endogenous hormones during floral bud differentiation of Siraitia grosvenorii （Swingle） C. Jeffrey ［J］. Plant Physiol Commun， 49（9）： 936-942. ?［覃喜軍， 黃夕洋， 蔣水元， 等， 2010. 羅漢果花芽分化過程中內(nèi)源激素的變化 ［J］. 植物生理學(xué)通訊， 46（9）： 936-942.］

REN GJ， DONG HZ， CHEN YZ， et al.， 2002. Studies on endogenous hormone changes in the stem terminal of Gossypium hirsutum during flower bud differentiation ［J］. Acta Bot Boreal-Occident Sin， 22（2）： 321-326. ?［任桂杰， 董合忠， 陳永喆， 等， 2002. 棉花花芽分化時期莖尖內(nèi)源激素的變化 ［J］. 西北植物學(xué)報， 22（2）： 321-326.］

ROMERA-BRANCHAT M， ANDRES F， COUPLAND G， 2014. Flowering responses to seasonal cues： whats new？ ?［J］. Curr Opin Plant Biol， 21： 120-127.

SONG Y， DOU LD， ZHANG HJ， 2014. Changes in endogenous hormones during flower bud formation in different blueberry varieties ［J］. Fruit Trees Southern Chin， 43（5）： 106-108. ?［宋 楊， 竇連登， 張紅軍， 2014. 藍莓不同品種花芽形成過程中內(nèi)源激素的變化 ［J］. 中國南方果樹， 43（5）： 106-108.］

SUN HM， LIAO HB， LIU PP， et al.， 2017. Dynamic changes of endogenous hormones in fruit branch leaves of Camellia nitidissima with different flower numbers during blossom and fruit periods ［J］. Guihaia， 37（12）： 1537-1544. ?［孫紅梅， 廖浩斌， 劉盼盼， 等， 2017. 不同成花量金花茶花果期果枝葉內(nèi)源激素的變化 ［J］. 廣西植物， 37（12）： 1537-1544.］

TANG JM， ZOU R， CHAI SF， et al.， 2017. Preliminary study on flower bud differentiation and development of Camellia tunghinensis ［J］. J Green Sci Technol， 11： 15-16. ?［唐健民， 鄒蓉， 柴勝豐， 等， 2016. 東興金花茶花芽分化和發(fā)育的初步研究 ［J］. 綠色科技， 11： 15-16.］

WANG R， CHENG FY， 2007. Studies on multiseason flowering plants and their breeding profiles ?［J］. N Hortic， （9）： 138-141. ?［王榮， 成仿云， 2007. 多季開花植物的研究及其育種概況 ［J］. 北方園藝， （9）： 138-141.］

WANG JX， LUO T， ZHANG H， et al.， 2020. Variation of endogenous hormones during flower and leaf buds development in ‘Tianhong 2 apple ［J］. Hortic Sci： A Publ Am Soc Hortic Sci， 55（11）： 1794-1798.

WANG Y， LA YF， DAI YQ， et al.， 2020. Observation and comparison on flowering phenology and floral morphological characteristics of nine species of yellow Camellia plants in Nanning City ［J］. J Plant Res Environ， 29（3）： 43-49. ?［王 翊， 喇燕菲， 戴宇琴， 等， 2020. 9種金花茶類植物在南寧的開花物候期及花部形態(tài)特征的觀察和比較 ［J］. 植物資源與環(huán)境學(xué)報， 29（3）： 43-49.］

WEI JJ， PAN XF， QIN Z， et al.， 2021. Change rules of endogenous hormones in main organs of Camellia vietnamensis from budding stage to flowering stage ［J］. Non-Wood For Res， 39（2）： 123-131. ?［韋靖杰， 潘曉芳， 覃 鎮(zhèn)， 等， 2021. 陸川油茶現(xiàn)蕾期至謝花期主要器官中內(nèi)源激素的變化規(guī)律 ［J］. 經(jīng)濟林研究， 39（2）： 123-131.］

YU X， DENG QE， LI JA， 2019. Relationship between endogenous hormones contents and flowering process in Camellia oleifera ‘Tiecheng No.1 ［J］. Non-wood For Res， 37（4）： 149-154. ［喻雄， 鄧全恩， 李建安， 2019. 內(nèi)源激素含量與‘鐵城一號油茶開花過程的關(guān)系 ［J］. 經(jīng)濟林研究， 37（4）： 149-154.］

YAN BB， HOU JL， CUI J， et al.， 2019. The effects of endogenous hormones on the flowering and fruiting of Glycyrrhiza uralensis ［J］. Plants， 8（11）： 519.

YI X， GAO H， YANY Y， et al.， 2022. Differentially expressed genes related to flowering transition between once- and continuous-flowering roses ［J］. Biomolecules， 12： 58.

ZHANG JH， GAO Q， 1991. On the characteristics of physiological metabolism during floral bud differentiation and development of cotton ［J］. J Shanghai Agric Coll， 9（1）： 1-6.

ZHU GP， LI JY， LI XL，et al.， 2011. Morphology and physiological characteristics of flower development in Camellia changii Yean endangered and rare plant ［J］. Guihaia， 31（4）： 507-512. ?［朱高浦， 李紀(jì)元， 李辛雷， 等， 2011. 珍稀瀕危植物張氏紅山茶花的花發(fā)育形態(tài)及生理特性研究 ［J］. 廣西植物， 31（4）： 507-512.］

ZHANG D， REN L， YUE J H， et al， 2014. GA4 and IAA were involved in the morphogenesis and development of flowers in Agapanthus praecox ssp. orientalis ［J］. J Plant Physiol， 71（11）： 966-976.

ZHU ZJ， JIANG CY， SHI YH， et al.， 2015. Variations of endogenous hormones in lateral buds of olive trees （ Olea europaea） during floral induction and flower-bud differentiation ［J］. Sci Silv Sin， 51（11）： 32-39. ?［朱振家， 姜成英， 史艷虎， 等， 2015. 油橄欖成花誘導(dǎo)與花芽分化期間側(cè)芽內(nèi)源激素含量變化 ［J］. 林業(yè)科學(xué)， 51（11）： 32-39.］

ZHANG HF， WEI QC， TANG GG，2018. Changes in the endogenous hormones and carbohydrate contents in Crocus sativus L. during floral bud differentiation ［J］. J Yunnan Agric Univ （Nat Sci Ed）， 33（4）： 684-689. ?［張衡鋒， 韋慶翠， 湯庚國， 2018. 番紅花花芽分化過程中內(nèi)源激素和糖含量的變化 ［J］. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報， 33（4）： 684-689.］

ZHU ZS， WANG QF， LI Q，et al.， 2021. Changes of endogenous hormone content in main organs of Hibiscus mutabilis Linn during the flowering period ［J］. J W Chin For Sci， 50（6）： 16-23. ?［朱章順，王強鋒， 李芹， 等， 2021. 木芙蓉花期不同階段主要器官內(nèi)源激素含量的變化 ［J］. 西部林業(yè)科學(xué)， 50（6）： 16-23.］

（ 責(zé)任編輯 李 莉 ）

收稿日期： ??2023-05-14

基金項目： ??國家自然科學(xué)基金（32060248）； 廣西重點研發(fā)計劃項目（桂科AB21196018）； 桂林市創(chuàng)新平臺和人才計劃項目（20210102-3）。

第一作者： ?江海都（1995-），碩士，研究實習(xí)員，主要研究方向為植物保育生物學(xué)，（E-mail）2889947842@qq.com。

* 通信作者： ??柴勝豐，博士，研究員，研究方向為瀕危植物保育及可持續(xù)利用研究，（E-mail）sfchai@163.com。