山銀花莖葉化學成分及其抗炎活性研究

蔣小華，韋玉璐，白 軍，顏小捷，李典鵬，盧鳳來?

（1.廣西植物功能物質與資源持續利用重點實驗，廣西壯族自治區中國科學院廣西植物研究所，廣西 桂林 541006； 2.桂林華藝生物科技有限公司，廣西 桂林 541805）

山銀花為忍冬科植物華南忍冬LoniceraconfusaDC.的干燥花蕾，主產于廣西、廣東、江西、海南、湖南等省區，為華南地區“金銀花” 中藥材的主要品種，具有清熱解毒、疏散風熱的功效，被用作解毒劑和清熱藥，其藤和葉也入藥［1-2］。山銀花作為歷史悠久的傳統中草藥，許多學者對其進行化學成分、藥理活性等方面的研究，結果表明，化學成分主要為環烯醚萜苷類、黃酮類、咖啡酸衍生物、三萜及三萜皂苷類、甾醇類、揮發油等［3-8］，具有抗菌［9］、抗炎［9-11］、抗氧化［10］、保肝［12］、保護血管、免疫調節［13-16］等作用，但對單體化合物的活性研究較少。為了來年花開得更好，山銀花種植過程中需要進行整形修剪，修剪下大量莖葉常常被丟棄，造成極大的資源浪費。目前山銀花的應用和研究都集中在山銀花的花蕾上，而對莖葉的研究較少［17］。本實驗以山銀花莖葉80%甲醇提取物為研究對象，進行化學成分研究及單體化合物體外抗炎活性評價，以期為山銀花綜合開發利用提供依據。結果從山銀花莖葉分離得到13 個化合物，主要為環烯醚萜苷類、黃酮類等，極大豐富了山銀花的化學多樣性。化合物1 首次從忍冬屬植物中分離得到，化合物3、5、7、9、11、12 首次從山銀花莖葉中發現，化合物2～8，11～13 具有一定的抗炎活性。

1 材料

Avance 500 MHz 核磁共振波譜儀 （德國Bruker 公司）； TBE-300C 高速逆流色譜儀（上海同田生物技術有限公司）； Agilent1200 高效液相色譜儀、Agilent Zorbax SB-C18 色譜柱（美國Agilent公司）； LCMS-IT-TOF 液相色譜質譜聯用儀、LC-2030C 高效液相色譜儀（日本島津公司）； 硅膠薄層板 F254（ 德國 Mercd KGaA 公司）； Diaion HP20SS （ 日本 Mitsubishi Chemical 公司）；Sephadex LH-20 （瑞典GE 公司）； Spark 多功能酶標儀（瑞士Tecan 公司）； 311 型二氧化碳培養箱（美國Thermo Fisher Scientific 公司）； XDS-100 倒置顯微鏡（上海光學儀器廠）。

小鼠巨噬細胞RAW264.7 （中國科學院上海細胞庫）； 胎牛血清（賽業生物科技有限公司）； 高糖培養基（美國Gibco 公司）； CCK-8 試劑盒（美國MedChemExpress 公司）； 脂多糖、吲哚美辛（美國Sigma Aldrich 公司）； 一氧化氮檢測試劑盒（上海碧云天生物技術有限公司）。乙腈、甲醇（色譜純，美國Thermo Fisher Scientific 公司）； CD3OD、DMSO （美國Cambridge Isotope Laboratories 公司）；其他試劑為分析純； 水為超純水。

山銀花莖葉采于廣西桂林市資源縣，經廣西壯族自治區中國科學院廣西植物研究所盧鳳來副研究員鑒定為忍冬科植物山銀花LoniceraconfusaDC.的莖葉。憑證標本（編號LC202109-1） 保存于廣西植物功能物質與資源持續利用重點實驗室。

2 提取與分離

取干燥山銀花莖葉5.0 kg，粉碎，過80 目篩，用10 倍量80%甲醇加熱回流提取3 次，每次3 h，過濾，合并提取液，將提取液濃縮得浸膏202.0 g。浸膏150 g 經HP20SS 大孔樹脂柱色譜分離，以甲醇-水（0 ∶1 ～1 ∶0） 梯度洗脫，經薄層色譜（TLC） 檢測合并得到Fr.A ～Fr.L。Fr.D （6.0 g）經Sephadex LH-20 柱層析純化，以20% 甲醇等度洗脫，經TLC 檢測合并得到Fr.D-1 ～Fr.D-5。Fr.D-2、Fr.D-4 經Agilent 1200 半制備型HPLC 純化，以甲醇（A） -水（B） 梯度洗脫（0 ～30 min，10% ～40% A； 30～50 min，40% ～80% A； 體積流量3 mL/min），得到化合物1 （15.0 mg）、2 （23.0 mg）、3 （64.0 mg）、4 （36.0 mg）、5 （43.0 mg）。Fr.F 經高速逆流色譜純化，以二氯甲烷-甲醇-水（10 ∶7 ∶3） 為溶劑，上相為固定相，得到Fr.F-1～Fr.F-9。Fr.F-7、Fr.F-8 分別經半制備HPLC 純化，以甲醇（A） -水（B） 梯度洗脫（0 ～30 min，10% ～30%A； 30～50 min，30% ～50%A； 體積流量3 mL/min） 得到化合物6 （105.0 mg）、8 （299.0 mg）。Fr.I （7.3 g） 經Sephadex LH-20 柱層析純化，以甲醇洗脫，得到Fr.I-1～Fr.I-6。Fr.I-5 析出沉淀，經20%、100% 甲醇洗滌沉淀得化合物7（126 mg）。Fr.I-4 再經Sephadex LH-20 凝膠柱層析純化，以50%甲醇洗脫，得到Fr.I-4-1 ～Fr.I-4-7。Fr.I-4-4、Fr.I-4-5、Fr.I-4-7 經Sephadex LH-20 凝膠柱色譜純化，以甲醇-水（1 ∶1 ～1 ∶0） 梯度洗脫，再經重結晶及半制備HPLC 純化，以甲醇（A） -水（B） 梯度洗脫（0 ～30 min，10% ～30%A； 30 ～50 min，30% ～50% A），得到化合物9（6.0 mg）、10 （9.0 mg）、11 （13.0 mg）、12（15.0 mg）、13 （30.0 mg）。

3 結構鑒定

化合物1： 白色固體，分子式C19H28O11，HRESI-MSm/z： 431.155 9 ［M - H］－。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：4.39 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1″），4.44 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），4.68 （1H，d，J＝11.8 Hz，H-7b），4.95 （1H，d，J＝11.8 Hz，H-7a），7.29 （1H，m，H-4），7.35 （2H，t，J＝7.4 Hz，H-3，5），7.45 （2H，d，J＝7.1 Hz，H-2，6）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 62.8 （C-6″），69.8 （C-6′），71.6 （C-4′），71.6 （C-4″），72.0 （C-7），75.1 （C-2′），75.1 （C-2″），77.2 （C-3′），77.9（C-3″），78.0 （C-5′），78.1 （C-5″），103.4 （C-1′），104.9 （C-1″），128.7 （C-4），129.2 （C-3，5），129.3 （C-2，6），139.1 （C-1）。以上數據與文獻［18］ 報道基本一致，故鑒定為芐醇-O-β-D-吡喃葡萄糖- （1→6） -β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2： 褐色油狀物，分子式C16H22O9，HR-ESI-MSm/z： 359.124 6 ［M ＋H］＋。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：1.72 （1H，m，H-6b），1.80（1H，m，H-6a），3.18 （1H，m，H-5），4.40 （1H，td，J＝11.8，2.5 Hz，H-7b），4.48 （1H，ddd，J＝11.0，4.2，2.1 Hz，H-7a），4.71 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），5.30 （1H，dd，J＝10.3，1.8 Hz，H-10b），5.34 （1H，m，H-10a），5.57 （1H，dd，J＝13.5，5.9 Hz，H-8），5.59 （1H，dd，J＝13.6，5.9 Hz，H-1），7.62 （1H，d，J＝2.5 Hz，H-3）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 25.9 （C-6），28.4（C-5），43.8 （C-9），62.7 （C-6′），69.7 （C-7），71.5 （C-4′），74.7 （C-2′），77.9 （C-3′），78.4 （C-5′），98.0 （C-1），99.7 （C-1′），106.0 （C-4），120.8 （C-10），133.3 （C-8），153.9 （C-3），168.5（C-11）。以上數據與文獻 ［19-21］ 報道基本一致，故鑒定為獐牙菜苷。

化合物3： 白色粉末，分子式C17H24O10，HRESI-MSm/z： 389.144 3 ［M ＋H］＋。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ： 1.74 （1H，td，J＝13.7，2.9 Hz，H-6a），1.89 （1H，ddd，J＝13.6，4.9，1.3 Hz，H-6b），3.54 （3H，s，COOCH3），3.90 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6′a），3.92 （1H，d，J＝1.9 Hz，H-6′b），4.71 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），5.29 （1H，d，J＝1.9 Hz，H-10a），5.31 （1H，d，J＝1.9 Hz，H-10b），5.34 （1H，d，J＝1.5 Hz，H-7），5.54 （1H，dd，J＝13.6，6.3 Hz，H-8），5.58 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-1），7.64 （1H，d，J＝2.4 Hz，H-3）；13CNMR （125 MHz，CD3OD）δ：22.9 （C-5），30.2 （C-6），43.6 （C-9），57.0 （-OCH3），62.7 （C-6′），71.5 （C-4′），74.6 （C-2′），78.1 （C-3′），78.4 （C-5′），98.6 （C-1），100.3 （C-1′），103.3 （C-7），105.4 （C-4），121.0 （C-10），133.4 （C-8），154.5（C-3），167.4 （C-11）。以上數據與文獻［20-22］報道基本一致，故鑒定為表斷馬錢子苷半縮醛內酯。

化合物4： 白色粉末，分子式C17H24O10，HRESI-MSm/z： 389.155 8 ［M ＋H］＋。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：1.50 （1H，qd，J＝13.5，9.2 Hz，H-6b），2.02 （1H，ddd，J＝13.2，4.1，2.6 Hz，H-6a），2.70 （1H，m，H-9），3.58 （3H，s，-OCH3），5.30 （1H，m，H-10b），4.70 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-7），5.35 （1H，m，H-10a），5.52 （1H，m，H-8），5.58 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-1），7.62 （1H，d，J＝2.4 Hz，H-3）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 25.2 （C-5），31.6 （C-6），43.7 （C-9），57.1 （-OCH3），62.7 （C-6′），71.5 （C-4′），74.7 （C-2′），77.9 （C-3′），78.3 （C-5′），97.9 （C-1），99.7 （C-1′），105.1 （C-7），105.4 （C-4），121.1 （C-10），133.0 （C-8），154.1 （C-3），167.6 （C-11）。以上數據與文獻［20-21］ 報道基本一致，故鑒定為馬錢子苷半縮醛內酯。

化合物5： 白色粉末，分子式C16H22O11，HRESI-MSm/z： 389.106 9 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：2.26 （1H，dd，J＝16.7，9.6 Hz，H-6b），2.85 （1H，ddd，J＝9.5，5.6，3.9 Hz，H-9），3.08 （1H，dd，J＝16.7，4.5 Hz，H-6a），3.23（1H，dt，J＝14.6，7.3 Hz，H-5），4.68 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），5.25 （1H，m，H-10b），5.29（1H，d，J＝1.1 Hz，H-10a），5.49 （1H，d，J＝3.8 Hz，H-1），5.66 （1H，dt，J＝17.2，10.0 Hz，H-8），7.51 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-3）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 28.4 （C-5），34.9 （C-6），45.3（C-9），62.7 （C-6′），71.5 （C-4′），74.6 （C-2′），78.0 （C-5′），78.4 （C-3′），97.5 （C-1），99.9 （C-1′），110.2 （C-4），120.5 （C-10），134.6 （C-8），153.6 （C-3），170.2 （C-11），176.3 （C-7）。以上數據與文獻［19］ 報道基本一致，故鑒定為裂環馬錢苷。

化合物6： 白色固體，分子式C17H24O11，HRESI-MSm/z： 403.123 0 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：2.26 （1H，dd，J＝16.6，9.0 Hz，H-6b），2.81 （1H，m，H-9），2.93 （1H，dd，J＝16.5，5.0 Hz，H-6a），3.68 （3H，s，-OCH3），4.65（1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），5.48 （1H，d，J＝3.9 Hz，H-1），5.63 （1H，dt，J＝17.2，10.0 Hz，H-8），7.47 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-3）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 28.6 （C-5），35.1 （C-6），45.3（C-9），51.6 （-OCH3），62.7 （C-6′），71.5 （C-4′），74.6 （C-2′），78.0 （C-3′），78.4 （C-5′），97.6 （C-1），99.9 （C-1′），110.1 （C-4），120.5（C-10），134.5 （C-8），153.6 （C-3），168.9 （C-11），176.3 （C-7）。以上數據與文獻［19］ 報道基本一致，故鑒定為斷氧化馬錢苷。

化合物7： 淡黃色粉末，分子式C19H30O11，HR-ESI-MSm/z： 433.134 3 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ： 1.64 （1H，ddd，J＝13.9，8.0，4.6 Hz，H-6a），2.07 （1H，dt，J＝13.6，6.6 Hz，H-6b），2.67 （1H，td，J＝9.3，4.7 Hz，H-9），2.91（1H，dd，J＝12.9，6.2 Hz，H-5），3.28 （3H，s，-OCH3），3.30 （3H，s，-OCH3），3.66 （1H，dt，J＝15.1，7.6 Hz，H-6′a），3.70 （3H，s，COOCH3），3.90 （1H，dd，J＝11.9，1.8 Hz，H-6′b），4.49（1H，dd，J＝7.0，4.6 Hz，H-7），4.67 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），5.27 （1H，d，J＝10.5 Hz，H-10a），5.32 （1H，d，J＝17.3 Hz，H-10b），5.50（1H，t，J＝5.8 Hz，H-1），5.73 （1H，ddd，J＝17.4，10.3，8.9 Hz，H-8），7.43 （1H，t，J＝1.8 Hz，H-3）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 29.4（C-5），33.3 （C-6），45.3 （C-9），51.7 （11-OCH3），52.6 （-OCH3），53.9 （-OCH3），62.8 （C-6′），71.6 （C-4′），74.6 （C-2′），78.0 （C-3′），78.4 （C-5′），97.8 （C-1），100.1 （C-1′），104.5（C-7），111.7 （C-4），119.8 （C-10），135.8 （C-8），153.2 （C-3），169.2 （C-11）。以上數據與文獻［22］ 報道基本一致，故鑒定為裂馬錢素二甲基乙縮醛。

化合物8： 淡黃色粉末，分子式C17H20O9，HR-ESI-MSm/z： 367.101 4 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：2.01 （1H，dd，J＝13.5，7.0 Hz，H-6′b），2.18 （3H，m，H-4′，6′a），3.69 （3H，s，-OCH3），3.73 （1H，dd，J＝7.4，3.1 Hz，H-3′），4.13 （1H，dt，J＝6.8，3.3 Hz，H-2′），5.27 （1H，m，H-1′），6.22 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-α），6.95（1H，dd，J＝8.2，1.9 Hz，H-6），6.78 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），7.04 （1H，d，J＝1.9 Hz，H-2），7.53 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-β）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 38.1 （C-4′，6′），53.0 （C-7′OCH3），70.3 （C-3′），72.1 （C-1′），72.6 （C-2′），75.8 （C-5′），115.1 （C-2），115.1 （C-β），116.6（C-5），123.0 （C-6），127.7 （C-1），146.9 （C-3），147.2 （C-α），149.7 （C-4），168.3 （C-γ），175.4（C-7′）。以上數據與文獻 ［23］ 報道基本一致，故鑒定為綠原酸甲酯。

化合物9： 淡黃色粉末，分子式C21H20O10，HR-ESI-MSm/z： 431.095 4 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，DMSO）δ： 5.06 （1H，d，J＝7.4 Hz，H-1″），6.44 （1H，s，H-3），6.84 （2H，d，J＝11.9 Hz，H-6，8），6.91 （2H，t，J＝5.8 Hz，H-2′，6′），7.93（2H，t，J＝9.3 Hz，H-3′，5′），12.99 （1H，s，H-5OH）；13C-NMR （125 MHz，DMSO）δ： 60.6 （C-6″），69.6 （C-4″），73.1 （C-2″），76.4 （C-3″），77.2 （C-5″），94.8 （C-8），99.5 （C-6），99.9 （C-1″），102.9 （C-3），105.3 （C-10），116.1 （C-3′，6′），128.6 （C-2′，5′），156.8 （C-4′），161.1 （C-2，9），162.9 （C-5），164.3 （C-7），181.9 （C-4）。以上數據與文獻［24］ 報道基本一致，故鑒定為芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物10： 淡黃色粉末，分子式C21H20O11，HR-ESI-MSm/z： 447.090 6 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ： 5.41 （1H，d，J＝4.7 Hz，H-1″），6.46 （1H，t，J＝3.9 Hz，H-6），6.76 （1H，s，H-3），6.80 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.92 （1H，t，J＝7.4 Hz，H-5′），7.43 （1H，d，J＝2.2 Hz，H-2′），7.46 （1H，dd，J＝8.3，2.3 Hz，H-6′），9.41（1H，s，H-4′OH），10.00 （1H，s，H-3′OH），12.99 （1H，s，H-5OH）；13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6）δ： 60.6 （C-6″），69.6 （C-4″），73.1 （C-2″），76.4 （C-3″），77.2 （C-5″），94.7 （C-8），99.5（C-6），99.9 （C-1″），103.2 （C-3），105.3 （C-10），113.6 （C-2′），115.9 （C-5′），119.2 （C-6′），121.4（C-1′），145.8 （C-3′），149.9 （C-4′），156.9 （C-9），161.1 （C-5），162.9 （C-7），164.5 （C-2），181.9 （C-4）。以上數據與文獻［21-24］ 報道基本一致，故鑒定為木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物11： 淡黃色粉末，分子式C27H30O14，HR-ESI-MSm/z： 577.150 1 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ： 5.24 （1H，d，J＝7.2 Hz，H-1?），5.35 （1H，d，J＝ 6.0 Hz，H-1″），6.80（1H，s，H-6），6.38 （1H，s，H-3），6.87 （1H，s，H-8），6.94 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-3′，5′），7.94（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2′，6′），12.99 （1H，s，H-5OH）；13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6）δ： 18.0 （C-6?），60.5 （C-6″），68.3 （C-5?），69.7 （C-4″），70.4 （C-2?），70.5 （C-3?），71.9 （C-4?），76.3（C-3″），77.0 （C-2″），77.2 （C-5″），94.5 （C-8），97.8 （C-1″），99.3 （C-6），100.4 （C-1?），103.0（C-3），105.4 （C-10），116.1 （C-3′，5′），120.6（C-1′），128.6 （C-2′，6′），157.0 （C-9），161.1（C-5），161.8 （C-4′），162.5 （C-7），164.3 （C-2），181.9 （C-4）。以上數據與文獻［25］ 報道基本一致，故鑒定為野漆樹苷。

化合物12： 淡黃色粉末，分子式為C26H28O15，HR-ESI-MSm/z： 579.129 1 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ： 3.96 （1H，d，J＝9.8 Hz，H-6″），4.19 （1H，d，J＝6.2 Hz，H-1″），5.10 （1H，d，J＝7.4 Hz，H-1″），6.92 （1H，d，J＝8.4 Hz，H-5′），7.45 （1H，d，J＝2.1 Hz，H- 2′），6.46 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.75 （1H，s，H-3），6.80（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），7.49 （1H，dd，J＝8.4，2.1 Hz，H-6′），13.02 （1H，s，H-OH）；13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ： 64.5 （C-5?），67.1 （C-4?），67.6 （C-6″），69.4 （C-4″），70.5 （C-3?），72.4 （C-2?），73.1 （C-2″），75.6 （C-3″），76.1 （C-5″），94.7 （C-8），99.6 （C-6），99.9 （C-1″），103.1（C-1?），103.1 （C-3），105.4 （C-10），113.5 （C-2′），116.0 （C-5′），119.3 （C-6′），121.2 （C-1′），145.8 （C-3′），150.0 （C-4′），157.0 （C-8），161.1（C-5），162.8 （C-7），164.5 （C-2），181.8 （C-4）。以上數據與文獻［21］ 報道基本一致，故鑒定為木犀草素-7-O-α-L-吡喃阿拉伯糖（1→6） -β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物13： 黃色粉末，分子式C27H30O15，HR-ESI-MSm/z： 593.151 2 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ： 1.21 （3H，d，J＝6.2 Hz，H-6?），5.14 （1H，d，J＝1.0 Hz，H-1?），5.26 （1H，d，J＝7.3 Hz，H-1″），6.38 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-6），6.75 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-8），6.76 （1H，s，H-3），6.91 （1H，d，J＝8.3 Hz，H-3′），7.41 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），7.44 （1H，dd，J＝8.4，2.2 Hz，H-6′），13.02 （1H，s，H-OH）；13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6）δ： 18.1 （C-6?），60.5 （C-6″），68.3 （C-5?），69.7 （C-4″），70.4 （C-2?），70.5（C-3?），71.9 （C-4?），76.3 （C-5″），77.0 （C-3″），77.2 （C-2″），94.4 （C-8），97.8 （C-6），99.3 （C-1″），100.5 （C-1?），103.2 （C-3），105.4 （C-10），113.4 （C-2′），116.0 （C-5′），119.2 （C-6′），121.2（C-1′），145.8 （C-3′），150.2 （C-4′），157.0 （C-9），161.2 （C-5），162.5 （C-7），164.5 （C-2），181.8 （C-4）。以上數據與文獻［21］ 報道基本一致，故鑒定為忍冬苷。

4 抗炎活性篩選

參照文獻［26-29］ 報道，利用脂多糖（LPS）誘導的RAW264.7 巨噬細胞炎癥模型對各化合物抑制NO 生成作用進行測定，評價其抗炎活性。結果發現陽性藥吲哚美辛及化合物2～8，11～13 在濃度為80 μmol/L 時，細胞存活率均大于90%，較空白對照組無明顯差異，表明吲哚美辛和化合物2～8，11～13 在該濃度值下無明顯細胞毒性。與LPS 組相比，各化合物在20、40、80 μmol/L 濃度下，均表現出不同程度的NO 抑制活性（圖1），且呈現劑量依賴性。各化合物的抑制率在（25.15±3.83）% ～（62.89±0.55）%范圍內，而吲哚美辛的抑制率分別為（41.79±1.59）%、（51.19±1.94）%。

圖1 化合物2～8，11～13 對NO 水平的影響Fig.1 Effects of compounds 2－8，11－13 on the level of NO

5 討論與結論

本實驗從山銀花莖葉80% 甲醇提取物中共分離鑒定出13 個化合物，包括6 個環烯醚萜苷類（化合物2～7）、5 個黃酮類（化合物9～13），2 個其他類（化合物1、8）。獐牙菜苷（2）、表斷馬錢子苷半縮醛內酯（3） 和馬錢子苷半縮醛內酯（4） 等化合物在C-7 和C-11 之間以環氧的形式連接； 而裂環馬錢苷（5） 和斷氧化馬錢苷（6） 在C-7 位以羧酸的形式存在。裂馬錢素二甲基乙縮醛（7） 化合物的C-7 位被2 個甲氧基取代［30］。其中，化合物1 首次從忍冬屬植物中分離得到； 化合物3、5、7、9、11～12 首次從山銀花莖葉中發現。

炎癥是機體對抗各種損傷性刺激所產生的一種防御反應，作為臨床常見的病理過程，與關節炎、精神病、心腦血管病、腫瘤等諸多疾病的發生密切相關［31］。金銀花主要抗炎指標成分除綠原酸和木犀草苷外，還有環烯醚萜類［30］。體外抗炎活性實驗表明，化合物2 ～8，11 ～13 具有一定的抗炎活性，結合化合物結構類型，發現山銀花中主要抗炎成分為裂環環烯醚萜苷類、黃酮類和綠原酸類化合物，此結果與文獻報道一致。現代藥理研究發現，已分離鑒定的環烯醚萜類化合物具有廣泛的抗炎活性，并可通過多個靶點起到良好的抗炎效果。文獻報道馬錢苷可通過NF-κB 依賴性炎癥途徑使NFκB 失活，進而減弱神經炎癥反應［32］； 獐牙菜苦苷具有抗肝損傷和抗炎作用，對caspase-3 具有抑制作用，部分是通過Nrf2/HO-1 途徑實現的，還可通過調節NF-κB/IκB 信號通路傳導抑制關節炎［33］。此類化合物的深入研究將對傳統中醫藥在抗炎方面研發具有長遠的意義。

綜上所述，本實驗結果豐富了山銀花莖葉的化學物質基礎，可為該藥材化學成分研究、生物活性篩選以及綜合開發利用提供理論依據。