血清miR-221在慢性心力衰竭中的表達(dá)及與心肌重塑、心功能的關(guān)系

呂哲 宋丹 李鵬鵬 張國魯

慢性心力衰竭作為一類多種心臟疾病的終末期綜合征，近年來隨著社會(huì)的不斷發(fā)展，該病的發(fā)病率不斷升高，或在疾病進(jìn)展期間伴隨出現(xiàn)諸多并發(fā)癥，并伴隨動(dòng)脈硬化的出現(xiàn)，具有較高的死亡率，對(duì)患者的生命健康造成了較大的影響[1]。不過在當(dāng)前臨床工作中針對(duì)慢性心力衰竭的疾病診斷率并不高，這也非常有可能給患者帶來較高的治療難度[2]。有臨床資料顯示，心肌重塑被認(rèn)為是導(dǎo)致心力衰竭出現(xiàn)的重要作用機(jī)制，這也使得在對(duì)慢性心力衰竭進(jìn)行研究時(shí)對(duì)心肌重塑過程引起足夠的關(guān)注具有重要的臨床意義[3]。微小RNA（microRNA，miRNA）作為一種具有較強(qiáng)調(diào)控作用的非編碼RNA，通常由21 ～23 個(gè)核苷酸所構(gòu)成，其作用機(jī)制在于通過利用靶基因的3’非翻譯區(qū)結(jié)合而發(fā)揮較強(qiáng)的負(fù)性調(diào)控作用。近年來，隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)越來越多的miRNA與心肌重塑及慢性心力衰竭的發(fā)生具有密切的關(guān)系，或可產(chǎn)生一定的調(diào)控作用。miR-221 作為miRNA 當(dāng)中的重要一員，可在人體內(nèi)廣泛存在，既往臨床研究報(bào)道證實(shí)，該指標(biāo)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有密切的關(guān)系，與心腦血管疾病也具有一定的聯(lián)系，但其是否參與了慢性心力衰竭的心肌重塑過程或與心功能密切相關(guān)性仍然值得研究及分析，尚無定論[4-5]。本研究就血清miR-221 在慢性心力衰竭中的表達(dá)水平及與心肌重塑、心功能的關(guān)系與臨床意義進(jìn)行探討，旨在為疾病接下來的診斷及治療提供可靠依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取聊城市第四人民醫(yī)院2020年3月—2022年2月收治的110 例慢性心力衰竭患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：全部患者均符合《中國心力衰竭診斷和治療指南2018》[4]中診斷標(biāo)準(zhǔn)；臨床上可表現(xiàn)出不同程度的休息或運(yùn)動(dòng)時(shí)呼吸困難、乏力、雙下肢水腫、納差等癥狀，在疾病進(jìn)展期間多以勞力性氣促以及浮腫等為主要表現(xiàn)；具有清晰的意識(shí)以及認(rèn)知功能；知情同意本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并存在急性冠脈綜合征；合并存在甲狀腺功能亢進(jìn)性心臟病、圍產(chǎn)期心肌病以及心肌致密化不全等疾?。缓喜⒋嬖趪?yán)重瓣膜性心臟疾病者；合并存在感染性疾病者；合并存在肝腎功能不全者；因各類原因?qū)е碌呐R床資料缺失者。按照紐約心臟病協(xié)會(huì)（New York Heart Association，NYHA）分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)將該組患者分為Ⅰ～Ⅱ級(jí)組（n＝38）、Ⅲ級(jí)組（n＝35）及Ⅳ級(jí)組（n＝37），同時(shí)選擇來聊城市第四人民醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的30 名健康人作為對(duì)照組，4組人員的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

全部人員均接受了彩色多普勒超聲檢查診斷，同時(shí)測(cè)量血清miR-221 的表達(dá)水平。

1.2.1 彩色多普勒超聲檢查診斷

全部參與人員均需要進(jìn)行二維以及三維超聲心動(dòng)圖檢查，檢查時(shí)嚴(yán)格按照美國超聲心動(dòng)圖學(xué)會(huì)推薦的方法進(jìn)行，測(cè)量指標(biāo)包括左室舒張末內(nèi)徑（left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD）、左心房內(nèi)徑（left atrial diameter，LAP）、左心室后壁厚度（left ventricular posterior wall thickness，LVPW）、左室質(zhì)量指數(shù)（left ventricular Mass index，LVMI）、左室重構(gòu)指數(shù)（left ventricular remodeling index，LVRI）、心排出量（cardiac output，CO）和左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）。

1.2.2 血清miR-221 表達(dá)水平測(cè)量

全部參與人員的血清均采用EDTA-K2 真空管于晨間提取空腹靜脈血4 mL，將空腹靜脈血放置在離心機(jī)中做離心處理，離心速度為2 500 r/min，共離心10 min，提取血清后對(duì)血細(xì)胞及血漿進(jìn)行分離，之后將其放置在-80 ℃環(huán)境中保存待測(cè)[6]。采用Trizol 試劑提取總RNA，隨后通過利用miR Base 數(shù)據(jù)庫獲取miR-221 相關(guān)成熟序列，對(duì)引物設(shè)計(jì)，上游引物：5’-GAGCCCAGTAGCCAGATG-3’，下游引物：5’-GAATGACCAGTACCAGAA-3’，擴(kuò)增長度為824 p，退火溫度為50 ℃。采用實(shí)時(shí)熒光定量法對(duì)miR-221 的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，具體操作方法按照眾科技股份有限公司生產(chǎn)提供，采用2-△△Ct法對(duì)樣品當(dāng)中的miR-221 表達(dá)量計(jì)算[7]。

1.3 觀察指標(biāo)

比較不同心功能分級(jí)下慢性心力衰竭患者血清miR-221 的表達(dá)水平以及心功能指標(biāo)的差異性，之后采用Pearson 相關(guān)性分析探討血清miR-221 表達(dá)水平與心功能指標(biāo)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（±s）表示，采用F檢驗(yàn)，組間比較采用獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson 相關(guān)性分析探討血清miR-221 表達(dá)水平與心功能指標(biāo)的相關(guān)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 4 組血清miR-221 表達(dá)水平比較

Ⅳ級(jí)組的血清miR-221 表達(dá)水平高于Ⅲ級(jí)組、Ⅰ～Ⅱ級(jí)組及對(duì)照組（P＜0.05），Ⅲ級(jí)組血清miR-221 表達(dá)水平高于Ⅰ～Ⅱ級(jí)組及對(duì)照組（P＜0.05），Ⅰ～Ⅱ級(jí)組血清miR-221 表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 4 組血清miR-221 表達(dá)水平比較（±s）

表2 4 組血清miR-221 表達(dá)水平比較（±s）

注：Ⅳ級(jí)組血清miR-221 表達(dá)水平分別與Ⅲ級(jí)組、Ⅰ～Ⅱ級(jí)組、對(duì)照組比較，t ＝56.512、22.410、28.514，P ＜0.05；Ⅲ級(jí)組血清miR-221 表達(dá)水平與Ⅰ～Ⅱ級(jí)組、對(duì)照組比較，t ＝56.512、44.378，P ＜0.05；Ⅰ～Ⅱ級(jí)組血清miR-221 表達(dá)水平與對(duì)照組比較，t ＝15.355，P ＜0.05。

組別血清miR-221 表達(dá)水平Ⅰ～Ⅱ級(jí)組（n ＝38）1.12±0.09Ⅲ級(jí)組（n ＝35）2.31±0.10Ⅳ級(jí)組（n ＝37）3.29±0.59對(duì)照組（n ＝30）0.54±0.21 F 值9.621 P 值＜0.001

2.2 不同組別人員心肌重塑及心功能指標(biāo)比較

Ⅳ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI 高于Ⅲ級(jí)組、Ⅰ～Ⅱ級(jí)組、對(duì)照組，LVRI、CO、LVEF 低于Ⅲ級(jí)組、Ⅰ～Ⅱ級(jí)組、對(duì)照組（P＜0.05）；Ⅲ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI高于Ⅰ～Ⅱ級(jí)組、對(duì)照組，LVRI、CO、LVEF 低于Ⅰ～Ⅱ級(jí)組、對(duì)照組（P＜0.05）；Ⅰ～Ⅱ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI 高于對(duì)照組，LVRI、CO、LVEF 低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 4 組心肌重塑及心功能指標(biāo)比較（±s）

表3 4 組心肌重塑及心功能指標(biāo)比較（±s）

注：Ⅳ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI、LVRI、CO、LVEF 與Ⅲ級(jí)組比較，t ＝2.000、4.381、2.764、2.044、2.591、2.177、2.985，P ＜0.05；Ⅳ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI、LVRI、CO、LVEF 與Ⅰ～Ⅱ級(jí)組比較，t ＝42.585、10.610、6.137、2.974、3.501、4.215、7.225，P ＜0.05；Ⅳ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI、LVRI、CO、LVEF 與對(duì)照組比較，t ＝19.598、12.451、8.536、3.544、5.653、5.515、9.499，P ＜0.05；Ⅲ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI、LVRI、CO、LVEF 與Ⅰ～Ⅱ級(jí)組比較，t ＝2.019、5.308、3.233、2.044、2.135、2.168、4.743，P ＜0.05；Ⅲ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI、LVRI、CO、LVEF 與對(duì)照組比較，t ＝15.696、8.430、5.379、2.547、4.702、3.183、7.801；P ＜0.05；Ⅰ～Ⅱ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI、LVRI、CO、LVEF 與對(duì)照組比較，t ＝12.001、7.121、3.669、2.014、3.254、3.001、6.654，P ＜0.05。

組別LVEDD（mm）LAP（mm）LVPW（mm）LVMI（g/m2）LVRI（g/mL）CO（mL/min）LVEF（%）Ⅰ～Ⅱ級(jí)組（n ＝38） 72.02±7.2543.85±5.128.75±1.41115.69±33.511.10±0.336.51±1.5450.21±4.85Ⅲ級(jí)組（n ＝35）73.65±8.1150.21±5.119.80±1.36130.32±40.120.98±0.255.87±1.7744.62±5.22Ⅳ級(jí)組（n ＝37）76.22±9.0254.78±3.6610.66±1.28 139.84±36.770.92±0.315.33±1.6040.31±6.87對(duì)照組（n ＝30）45.32±6.1036.25±8.108.12±1.12104.36±45.201.15±0.247.32±1.9054.85±5.33 F 值10.25512.36914.0219.36122.25510.29819.664 P 值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.3 心肌重塑及心功能指標(biāo)與血清miR-221 相關(guān)性

Pearson 相關(guān)性分析顯示，血清miR-221 與LVEDD、LAP、LVPW、LVRI 分別呈正相關(guān)性，與LVRI、CO 及LVEF 呈負(fù)相關(guān)性（P＜0.05）。見表4。

表4 心肌重塑及心功能指標(biāo)與血清miR-221 相關(guān)性

3 討論

慢性心力衰竭作為一類發(fā)病率較高的心血管疾病，也是各類心血管疾病發(fā)展到終末期階段的臨床綜合征，在疾病進(jìn)展期間通常會(huì)表現(xiàn)出不同程度的病理生理特點(diǎn)、射血能力受損以及心室血功能低下等情況，預(yù)后表現(xiàn)較差，具有較高的死亡率，被認(rèn)為是能夠?qū)颊呓】狄约爱?dāng)前醫(yī)療負(fù)擔(dān)造成最為直接影響的主要病因，對(duì)當(dāng)前老齡化日益嚴(yán)重的中國人群而言需要引起足夠的重視。miRNA 是一類新發(fā)現(xiàn)的在多種生物進(jìn)程中具有重要調(diào)控作用的非編碼RNA，是來源于內(nèi)源性發(fā)夾結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)錄本的長度大約為22 個(gè)核巧酸的單鏈RNAs。研究報(bào)道指出，多種不同疾病表達(dá)的過程中多存在著miRNA 異改變的情況，miRNA 相關(guān)成員通常能夠由細(xì)胞被釋放到血液內(nèi)，并伴隨著血液循環(huán)進(jìn)入患者體內(nèi)，這也因此將其作為了診斷疾病及判斷預(yù)后的一類重要標(biāo)志物[8-9]。臨床資料顯示，miRNA 能夠通過對(duì)心肌細(xì)胞的凋亡以及肥大等參與慢性心力衰竭的發(fā)生及發(fā)展，miR-221 也被證實(shí)可在慢性心力衰竭疾病中呈現(xiàn)較高的表達(dá)水平，并在心肌重塑工作中表現(xiàn)出了較強(qiáng)的調(diào)控作用，這在早期診斷及治療疾病方面發(fā)揮了重要的臨床價(jià)值及意義[10-11]。另外，也有前期研究證實(shí)了miR-221 一旦出現(xiàn)過度表達(dá)的情況非常容易誘發(fā)各類疾病的出現(xiàn)，增加各類心血管疾病的發(fā)生率[12-13]。

在本研究中，聊城市第四人民醫(yī)院就血清miR-221 在慢性心力衰竭中的表達(dá)水平及與心肌重塑、心功能的關(guān)系與臨床意義進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，Ⅳ級(jí)組的血清miR-221 表達(dá)水平高于Ⅲ級(jí)組、Ⅰ～Ⅱ級(jí)組及對(duì)照組，Ⅲ級(jí)組血清miR-221 表達(dá)水平高于Ⅰ～Ⅱ級(jí)組及對(duì)照組，Ⅰ～Ⅱ級(jí)組血清miR-221 表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果提示，心功能等級(jí)越高，miR-221 的表達(dá)水平也就越高，且在慢性心力衰竭患者中心肌重構(gòu)的發(fā)生也導(dǎo)致了心臟功能的降低，心臟功能表現(xiàn)也相對(duì)較差[14-15]。在對(duì)比心肌重塑及心力衰竭功能指標(biāo)時(shí)，Ⅳ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI 高于Ⅲ級(jí)組、Ⅰ～Ⅱ級(jí)組、對(duì)照組，LVRI、CO、LVEF 低于Ⅲ級(jí)組、Ⅰ～Ⅱ級(jí)組、對(duì)照組（P＜0.05）；Ⅲ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI 高于Ⅰ～Ⅱ級(jí)組、對(duì)照組，LVRI、CO、LVEF 低于Ⅰ～Ⅱ級(jí)組、對(duì)照組（P＜0.05）；Ⅰ～Ⅱ級(jí)組LEVDD、LAP、LVPW、LVMI 高于對(duì)照組，LVRI、CO、LVEF 低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由此證實(shí)了心肌重塑指標(biāo)以及心功能指標(biāo)在不同心功能分級(jí)中的差異性[16]。Pearson 相關(guān)性分析顯示，血清miR-221 與LVEDD、LAP、LVPW、LVRI 分別呈正相關(guān)性，與LVRI、CO 及LVEF 呈負(fù)相關(guān)性（P＜0.05）。結(jié)果也由此證實(shí)了血清miR-221 與心肌重塑及心功能指標(biāo)具有密切的相關(guān)性，能夠幫助完成對(duì)疾病的診斷及治療[17-18]。

綜上所述，血清miR-221 在慢性心力衰竭中具有較高的表達(dá)水平，且這種表達(dá)水平的升高與心肌重構(gòu)以及心臟功能之間具有密切的相關(guān)性。在接下來的臨床工作中需要進(jìn)一步的擴(kuò)大樣本量，增加觀察指標(biāo)，由此更好地對(duì)肌重構(gòu)以及心臟功能之間的關(guān)系進(jìn)行探討與評(píng)價(jià)。