影響肉羊胚胎移植妊娠率的因素分析及改進措施

吳中東

（江蘇省徐州市睢寧縣農業農村局 江蘇徐州 221200）

胚胎移植技術是在外源激素（孕激素、前列腺素等）的作用下使優秀的母羊能夠實現超數排卵，然后從母羊子宮內將處于發育早期的胚胎取出并在體外環境中進行處理后移植到生理狀態相同的受體母羊體內，從而使胚胎在受體母羊中發育成新個體并分娩，評價此技術好壞的指標為胚胎移植后的妊娠率。由于此技術涉及的過程和步驟較多較為復雜，故胚胎移植后的妊娠率易受到各種因素的影響。因此本文總結了可能影響肉羊胚胎移植妊娠率的原因并提出了相關改進措施，希望廣大同行在進行操作時能夠規避，提高妊娠率，增加經濟效益，進一步拓寬肉羊養殖中胚胎移植的應用。

1 影響胚胎移植妊娠率的因素

1.1 胚胎因素

1）供體羊。取出的胚胎質量的好壞直接影響了移植后的妊娠率，因此供體羊是保證移植后有較高妊娠率的前提和基礎。首先，要選擇適合的供體羊，一般選擇健康、生理狀態良好、有正常發情周期、體態均勻、具有穩定遺傳性能的母羊，并且母羊的年齡在2～5歲最為合適。若供體母羊質量較差，則會導致生產的胚胎較差，可能存在的死胎、畸形胎較多。然后母羊的發情鑒定以及人工授精技術也會影響胚胎的質量，要通過公羊試情的方式準確把握母羊發情時間，發情過早或者過晚均會導致產生的胚胎受到影響；人工授精的次數也是影響妊娠率的重要因素，一般情況下在確認發情后進行第一次的輸精，間隔12 h 再進行一次，直至供體母羊不再有發情表現為止（3～4 次即可）。若未及時進行適時發情或者適時輸精，則可能會導致受精困難、受精率較低或者出現受精后胚胎退化等問題，從而導致胚胎的質量降低。

2）胚胎的處理。胚胎的采集和保存對于胚胎的質量至關重要。采集胚胎時，要進行消毒盡量保證達到無菌的環境，包括手術器具、沖卵液、剃毛后的羊皮膚等，工作人員也要進行消毒并穿戴防護服，若未進行徹底的消毒則可能會因胚胎污染而導致胚胎的死亡甚至供體母羊的感染死亡；并在預熱板上對沖卵液進行預熱，若未進行預熱則可能會由于冷應激造成胚胎的死亡。在胚胎進行保存時，若是鮮胚移植，則盡量在取胚后的2 h 內完成移植，避免造成胚胎質量下降；若需要進行凍胚且保存時間較長時，則需要2 h 更換一次保存液，且保存溫度緩慢下降至20～25 ℃即可。

1.2 受體因素

1）受體羊的選擇。受體羊為胚胎的生長發育提供營養，因此受體羊的選擇是胚胎移植成功的基礎。若選擇年齡較大的母羊或者產單胎的肉羊品種則可能會導致胚胎移植后的妊娠率較低，因此應該考慮體型外貌、泌乳能力、體質、繁殖性能等作為受體羊的選擇依據。此外，供體羊和受體羊的生理狀態、同期化程度也是影響移植妊娠率的重要因素，若兩者的生殖系統、發情時間不同步，則會導致妊娠率低，而當同步發情的時間差在12 h 以內時妊娠率較高[1]。

2）受體羊的飼養管理。受體羊營養水平的好壞是造成胚胎移植后成活率的關鍵因素。若受體羊過肥、過瘦均會造成妊娠率的下降，因此一定要做好飼養管理工作。首先，要保證受體羊營養的全面和均衡，合理搭配使用各種飼料原料（蛋白質飼料、能量飼料、粗飼料、礦物質飼料、維生素飼料等），一旦確定飼料配方后，不要輕易更換；然后要做好同期發情工作前的驅蟲、免疫工作，若在移植后再隨意使用驅蟲藥、抗生素類藥物、疫苗等，則極易造成胚胎的畸形和死亡。最后，要做好受體羊術后的護理飼養工作，使用必要的預防感染的藥物，及時觀察羊只的狀態（包括采食情況、精神狀態、糞便排泄、傷口恢復等），若發現異常而未及時治療時也會造成流產、死胎等，此外還要注意營養的供應（適當補充維生素和礦物質，尤其是提供充足的胡蘿卜）、飼養密度等，避免因打撞而造成流產，降低移植后的妊娠率[2]。

1.3 技術因素

1）移植部位。移植部位的選擇是影響胚胎移植后妊娠率的重要環節之一。不同生殖器官的生理發育狀態不同，如輸卵管、卵巢、子宮等器官均一般按照不同的生理程序（發情、排卵、受精、妊娠等）發生著不同的變化，從而導致其內部環境也存在一定的差異，且這種差異隨時間的推移而逐漸加大。所以移植部位不同時會導致胚胎所處的生理環境不同，影響到胚胎移植后成活率。有試驗研究發現，當所選擇的胚胎是處于2 細胞時則移植到受體的部位較淺，當選擇的胚胎是處于4、8 細胞時則移植到受體的部位較深，在選擇移植部位的深淺時可以根據黃體的成熟程度以及胚胎的胚齡進行確定。

2）技術技巧。手術操作者的專業素質、操作時的熟練程度一定會對胚胎的成活率造成影響。當手術操作者操作不規范、動作拖沓、胚胎在體外停留時間較長、被污染的可能性更大時，則會導致胚胎移植后的妊娠率較低。當手術操作者較為熟練時則移植妊娠率更高[3]。

1.4 環境因素

1）胚胎移植季節的選擇。由于羊屬于季節性發情的動物，因此在一定的季節中才會發情并妊娠。一般處于9—12 月份的深秋和初冬是肉羊進行胚胎移植的最佳時間段，此時進行操作后的妊娠率較高。而若選擇春季為胚胎移植的時期，則會由于此時的羊只處于休情期導致較低的移植妊娠率。

2）溫度的影響。溫度過高過低均會對肉羊的生殖生理過程產生影響，當溫度過高時會由于甲狀腺素的分泌減少而產生影響，并且高溫導致供受體的生殖機能被改變，最終導致處于著床時期的胚胎衰弱甚至死亡，若高溫時間過長則會增加新生羔羊的死亡率。當溫度過低時，此時由于抑制了羊只的中樞神經系統，神經的傳導性障礙從而使供受體母羊的代謝率、反應能力均下降，最終導致胚胎的生長發育、生活力等受到影響。

3）手術環境的影響。包括手術前的消毒衛生以及操作時的溫度。若手術室未進行打掃以及消毒，灰塵比較多，存在的有毒有害物質比較多，則被感染的風險較大從而使胚胎受到傷害，尤其是與羊只有接觸的手術設備和器械（沖卵管、吸管、撥卵針等），若這些被污染則嚴重時會造成胚胎和供受體母羊的死亡。手術操作時的溫度也很重要，冷熱變化幅度過大會對胚胎的生存造成較大的影響，一般控制在20～25 ℃范圍內即可[4]。

2 改進措施

2.1 提高胚胎的質量

提高胚胎的質量主要包括選擇優良的供體母羊、確定發情的最佳時間以及做好胚胎的采集和保存工作。首先，選擇供體母羊時一般按照“強健的體魄、良好的外形、良好的繁殖機能、處于最佳繁殖年齡（2～5 歲）”的原則進行篩選；然后把握最佳的發情和受精時間，確定最佳發情的條件為“有大量的黏液存在于陰道口、食欲不振”，確定發情之后每間隔12 h 進行一次輸精直至不再發情為止，防止只進行一次輸精；最后要做好胚胎的采集和保存，采集時要在提前進行消毒的專門的手術室中進行，并且保證所使用的手術器械等均通過了高溫滅菌和消毒，要將手術部位的被毛剔除并用酒精、碘酒等消毒，以“無菌”為采集胚胎的最高水準；在胚胎保存時，要控制好保存的溫度，一般為20～25 ℃，且必須每間隔2 h 更換一次胚胎保存液[5]。

2.2 供受體大環境一致

供受體的大環境一致主要包括自然環境、營養飼料和牧草、日常飼養管理方式等均一致。對于自然環境一致，主要強調供受體母羊生活在同一場區，所處場區的溫度、濕度、光照等一致，這樣能夠保證供受體母羊的新陳代謝、生長發育、激素水平等相同，為胚胎的采集和移植提供相同的大環境。對于營養飼料和牧草的一致，主要強調供受體能夠達到要求的體況，一般在供受體移植這段時間要求膘情處于中上等水平，且飼料營養在一個平穩上升的階段，這樣能夠保證胚胎有充足的營養滿足自身的生長發育。對于日常飼養管理方式的一致，主要強調飼養方式一般為舍飼+適當的放牧或者完全舍飼，這樣能夠將供受體羊完全分開飼養，避免之間的相互打斗爭食，也能使供受體羊在相同的飼養方式下得到同樣的鍛煉，保證供受體之間的生理狀態相同或者相似[6]。

2.3 加強環境控制

主要體現在無菌操作、移植季節的確定、移植溫度的控制三個方面。首先，一定要對參與的人員、用具、手術室等進行嚴格的滅菌和消毒，為胚胎提供一個無菌的環境。然后要根據羊只的生理特點、本地區的氣候變化等確定移植的季節，一般秋季為最佳移植時期；最后要控制移植時手術室的溫度，一般在20～25 ℃之間，避免溫度變化過大影響胚胎質量。

3 小結

作為肉羊快速繁殖的技術手段之一，胚胎移植技術逐漸被廣泛應用在生產實踐中。在操作過程中易受到多種因素的影響，可能會導致移植后的妊娠率較低，因此一定要逐漸改進條件提高妊娠率，使胚胎移植技術在肉羊的育種中發揮更大的作用。■