錯配修復蛋白表達在胃癌中的臨床病理特征及與Ki67、P53相關性的研究①

郝麗莉,梁秀冰,黃世勇,黃小杏,李江,黃遠濤,曾慶蘇

(陽江市人民醫院病理科,廣東 陽江 529500)

胃癌位居中國惡性腫瘤發病率和死亡率第3位,嚴重危害國人的生命和健康[1]。由于早期癥狀不典型、篩查體系不完善,中國約70%的胃癌患者確診時已處于局部進展期,治療方案有限,預后不良[2]。既往胃癌精準治療研究多在輔助治療方案的基礎上添加免疫或靶向藥物來改善胃癌預后,但患者獲益有限。最新研究表明,胃癌患者的預后并不單純取決于病理分期、治療方案等因素,分子分型也與胃癌預后存在明顯的相關性[3]。微衛星不穩定(microsatellite instability,MSI)是由于微衛星重復序列的插入或缺失導致基因序列長度的改變所引起,從而引發腫瘤的發生[4]。錯配修復蛋白家族主要有MLH1,MSH2,MSH6和PMS2四種蛋白,四種MMR蛋白無缺失者認為MMR表達正常(pMMR),有一個及以上MMR蛋白表達缺失則認為MMR表達缺陷(dMMR),為微衛星高度不穩定(MSI-H)。

Ki67是一種與細胞增殖特異相關的核抗原,在研究中發現,多種腫瘤組織中存在Ki67的表達,可以通過觀察腫瘤細胞的增殖活性和增殖指數等參數來評估其表達情況,與預后密切相關,常作為判斷腫瘤預后參考指標之一[5]。P53基因是腫瘤抑制基因中最為關鍵的抑癌基因之一,它位于17號染色體短臂上,參與了調控細胞凋亡、細胞周期阻滯以及DNA損傷修復等生物過程[6]。錯配修復蛋白在胃癌中的表達及與Ki67、P53相關性研究陽江地區未見報道。

1 材料與方法

1.1 研究對象及分組情況

選取陽江市人民醫院2020年1月至2022年12月收治的93例胃癌患者,所有患者均符合胃癌的診斷標準,經臨床、組織病理和免疫組化確診;無其他惡性腫瘤及腫瘤家族史;術前未進行放化療,其中男62例,女31例;年齡 38～79歲,平均(65±10)歲。

分組:根據4種MMR蛋白表達是否缺失將胃癌分為兩組:若免疫組化檢測結果顯示無MMR蛋白缺失,判讀為MMR表達正常(pMMR)組,提示微衛星穩定(MSS);若結果顯示任意一種MMR蛋白表達缺失,判讀為MMR表達缺陷(dMMR)組,提示微衛星高度不穩定(MSI-H)。

1.2 儀器與耗材

LBP-5548全自動免疫組化染色機 (廣州安必平公司);恒溫水箱(上海躍進醫療器械廠);LBP-5196自動抗原修復儀(廣州安必平公司);全自動脫水機(日本櫻花公司);石蠟切片機(德國徠卡公司);半自動組織包埋機(德國徠卡公司);恒溫烤箱(上海躍進醫療器械廠);光學顯微鏡(日本Olympus公司);MLH1、MSH2、MSH6 、PMS2、Ki67及P53鼠抗人單克隆抗體(廣州安必平公司)。

1.3 免疫組織化學染色

免疫組化法檢測胃組織四種錯配修復蛋白(MLH1、MSH2、MSH6和PMS2)、Ki67及P53蛋白的表達。標本用10%中性福爾馬林固定,石蠟包埋切片。免疫組化步驟:所有標本脫樣品中,在4℃下過夜孵育,二抗孵育,使用DAB進行顯色,然后進行復染,脫水和透明處理,最后進行封片,再用PBS代替一抗作為空白組對照。所有操作均嚴格按照SP試劑盒的說明書進行。

1.4 結果判定標準

由3名經驗豐富的副主任醫師對染色后的標本進行雙盲讀片。MLH1、MSH2、MSH6和PMS2、Ki67、P53陽性標準:定位于細胞核,細胞核內如若存在明顯的黃色或棕黃色顆粒被視為是陽性。Ki67判讀標準[7]:隨機選擇5個高倍鏡下的視野,計算每100個細胞中的陽性細胞的數量,然后取平均值。陽性細胞的比例<10%,為陰性(-);陽性細胞的比例10%～25%,為弱陽性(+);陽性細胞的比例25%～75%,為中等陽性(++);陽性細胞的比例>75%,為強陽性(+++)。P53陽性標準:細胞核內呈現清晰的黃色或棕黃色顆粒為陽性,P53表達≥60%判讀為陽性,為突變型。

1.5 統計學方法

采用SPSS26.0統計分析軟件進行分析,在描述臨床病理特征的構成比時,采用n(%)這一指標。數據分析采用χ2檢驗,多樣本分析運用Pearson相關分析技術進行檢驗分析,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組化

胃癌組織中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、Ki67、p53均定位于腫瘤細胞核,見圖1。

圖1 免疫組化法檢測MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、Ki67、P53蛋白在胃低分化腺癌中的表達(×100)

2.2 MSI與胃癌病理特征的關系

93例胃癌中26例MMR蛋白表達缺失(27.96%),其中MLH1、MSH2、MSH6及PMS2表達缺失分別為21例(22.58%)、0例、0例及25例(26.88%),MLH1與 PMS2均缺失20例(21.51%),見表1。MLH1與PMS2常成對表達缺失,MLH1與PMS2蛋白在胃癌中表達的相關性,見表2。dMMR組胃癌與(年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤位置、分化程度、TNM分期、脈管內癌栓、神經侵犯、淋巴結轉移、遠處轉移等均不相關,無統計學意義(P>0.05),見表3。

表1 胃癌組織中錯配修復(MMR)蛋白的表達缺失情況

表2 MLH1與PMS2蛋白在胃癌中表達的相關性

表3 MSI與93例胃癌病理特征的關系

2.3 Ki67、P53蛋白表達與胃癌病理特征的關系

dMMR組胃癌中Ki67蛋白表達均≥30%,說明微衛星不穩定性胃癌與Ki67蛋白表達水平呈正相關(r=0.271,P<0.01),dMMR組與P53表達無相關性,見表4。

表4 胃癌中dMMR、pMMR組Ki67、P53表達的相關性

3 討論

本實驗通過研究pMMR組與dMMR組胃癌患者的臨床病理特征,發現dMMR組與臨床特征無統計學意義。MLH1與PMS2蛋白在胃癌中表達的相關性,同時MLH1和PMS2的成對缺失可能對胃癌的早期診斷有所幫助。Ki67是一種核蛋白質由MKI-67基因編碼,又稱之為MKI-67,提示細胞的增殖活性[8],它反應的增殖活性與腫瘤生物學行為有關而成為一種反映細胞增殖狀態的理想標記物[9]。本實驗研究揭示了在MMR蛋白表達缺失的病例中Ki67蛋白的表達水平顯著增加,超過了30%,微衛星不穩定性與Ki67蛋白的表達水平也被證實與之存在正向關聯。腫瘤的進展主要是由于P53基因突變,大約50%的癌癥患者被發現攜帶這一突變[10]。本研究中P53的陽性率為12.9%,并不高,P53陽性表達與MMR缺失無相關性,本實驗結果與其他文獻報道的研究結果有所差異。

綜上,關于MSI與Ki67、P53蛋白關系的研究目前較少,因MSI型胃癌中Ki67表達較高有相關性,進一步說明MSI與Ki67對評估胃癌的惡性程度有協同作用。本研究體現陽江地區胃癌患者的病理特征,樣本量少,尚需大樣本數據的驗證及進一步深入研究。