早期胃癌組織MCM4表達與內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后疾病復發(fā)的關(guān)系

王玉玉,常廷民,楊芳,姬娟娟,李光艷,劉英嬌

(新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院 a.內(nèi)鏡科;b.消化內(nèi)科,河南 新鄉(xiāng) 453100)

胃癌是常見的消化道腫瘤之一,具有進展迅速、惡性程度高的特點[1]。當癌組織僅局限于胃黏膜層或下層時屬于胃癌早期,多采用內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)治療,不會破壞正常胃結(jié)構(gòu)和分泌功能,患者術(shù)后恢復快、生存率高,治療效果與根治性切除術(shù)相當[2],但術(shù)后仍存在復發(fā)風險[3]。目前,明確早期胃癌內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復發(fā)的影響因素對指導臨床早期評估和干預(yù)具有重要意義。微小染色體維持蛋白(microchromosome maintenance protein,MCM)由三磷酸腺苷酶亞類結(jié)構(gòu)組成,可與DNA復制起點結(jié)合參與DNA的復制起始,具有高度保守性[4]。MCM4是MCM家族的一員,近年來研究發(fā)現(xiàn)其在乳腺癌[5]、肝細胞癌[6]等中過表達,對腫瘤診斷和預(yù)后具有評估作用。然而,該蛋白在早期胃癌中的表達與術(shù)后復發(fā)是否存在關(guān)聯(lián)尚需探討明確。故本研究采用免疫組化法檢測早期胃癌組織MCM4表達,并探討其對術(shù)后復發(fā)的影響,旨在為臨床干預(yù)提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2017年2月至2020年1月在新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院接受內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)的273例早期胃癌患者作為觀察組,男147例,女126例,年齡39～68(54.24±7.76)歲。納入標準:符合早期胃癌診斷標準[7],并經(jīng)內(nèi)鏡和病理活檢初次確診;符合內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)指征[8]。排除標準:術(shù)前或術(shù)后放、化療;合并嚴重心、肝、腎等器官衰竭;合并其他惡性腫瘤;長期接受激素、免疫抑制劑治療;隨訪期間失訪。另同期選取接受胃鏡下胃黏膜活檢正常的200例受試者作為對照組,男112例,女88例,年齡36～70(53.61±8.07)歲。研究組和對照組性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審批,所有受試者均自愿簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1MCM4表達免疫組化檢測

(1)收集觀察組胃癌組織和對照組正常胃黏膜組織進行固定、石蠟包埋,制成4 μm的切片;(2)75 ℃烘烤切片30 min,經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇浸泡水化后在檸檬酸緩沖液中放置20 min提取抗原,阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性充分反應(yīng),然后用牛血清白蛋白封閉;(3)先用MCM4兔抗人單克隆抗體(英國Abcam公司),稀釋100倍后孵育切片2 h,再用生物素標記二抗孵育切片1.5 h,用二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒(上海玉博生物科技有限公司)進行顯色,復染;(4)結(jié)果判讀:在顯微鏡下隨機選5個不同視野觀察,MCM4定位于細胞質(zhì)。參照劉賓等[9]的判讀標準,根據(jù)陽性細胞百分比和陽性細胞染色程度進行判讀,陽性細胞占總細胞<20%、20%～50%、>50%～70%、>70%分別記0、1、2、3分;細胞無染色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別記0、1、2、3分,計算兩項總分之和,≤2分為低表達,≥3分為高表達。

1.2.2資料收集

收集早期胃癌患者的資料,包括性別、年齡、病灶位置、病灶最大直徑、浸潤程度、分化程度、鏡下分型等。

1.2.3術(shù)后隨訪

患者定期來院復診,術(shù)后第1年每3個月復診1次,之后每6/12個月復診1次,復查胃鏡,對疑似復發(fā)患者行內(nèi)鏡和病理活檢,其中原病灶切除部位及臨近部位新生腫瘤即為復發(fā)。以2023年1月作為隨訪截點,統(tǒng)計患者術(shù)后3 a內(nèi)復發(fā)情況,并將其分為復發(fā)組和未復發(fā)組。

1.3 觀察指標

(1)觀察組胃黏膜癌組織和對照組胃黏膜正常組織MCM4表達;(2)不同病理特征早期胃癌患者胃黏膜癌組織MCM4表達;(3)早期胃癌組織MCM4不同表達患者術(shù)后復發(fā)的Kaplan-Meier曲線;(4)早期胃癌患者內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復發(fā)的影響因素分析。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 觀察組胃黏膜癌組織和對照組胃黏膜正常組織MCM4表達

觀察組胃黏膜癌組織MCM4高表達率高于對照組胃黏膜正常組織(P<0.05),見圖1和表1。

A為對照組正常胃黏膜組織;B為觀察組胃黏膜癌組織。

表1 觀察組胃黏膜癌組織和對照組胃黏膜正常組織 MCM4表達比較[n(%)]

2.2 不同病理特征早期胃癌患者胃癌組織MCM4表達比較

不同性別、年齡、病灶位置、病灶最大直徑、鏡下分型早期胃癌患者胃癌組織MCM4高表達率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),黏膜下層浸潤、低/未分化早期胃癌患者胃癌組織MCM4高表達占比分別高于黏膜內(nèi)層浸潤、高/中分化患者(P<0.05),見表2。

表2 不同病理特征早期胃癌患者胃癌組織 MCM4表達比較[n(%)]

表2(續(xù))

2.3 早期胃癌組織MCM4不同表達患者術(shù)后復發(fā)的Kaplan-Meier曲線

早期胃癌患者術(shù)后3 a復發(fā)率為11.36%(31/273),其中24例患者胃癌組織MCM4為高表達,7例為低表達。Kaplan-Meier曲線顯示,胃癌組織MCM4高表達患者術(shù)后3 a復發(fā)率低于低表達患者(χ2=40.235,P<0.001),見圖2。

MCM4為微小染色體維持蛋白4。

2.4 早期胃癌患者內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復發(fā)的影響因素分析

復發(fā)組和未復發(fā)組性別、年齡、病灶位置差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),病灶最大直徑、浸潤程度、分化程度、鏡下分型、胃癌組織MCM4表達差異有統(tǒng)計學(P<0.05),見表3。將病灶最大直徑(<2 cm=0,2～3 cm=1,>3 cm=2)、浸潤程度(黏膜內(nèi)層=0,黏膜下層=1)、分化程度(高/中分化=0,低/未分化=1)、鏡下分型(Ⅰ型=0,Ⅱa型=1,Ⅱb型=2,Ⅱc型=3,Ⅱa型+Ⅱc型=4)、胃癌組織MCM4表達(低表達=0,高表達=1)作為自變量,將術(shù)后有無復發(fā)(未復發(fā)=0,復發(fā)=1)作為因變量,納入Cox回歸模型分析,結(jié)果顯示,病灶最大直徑>3 cm、黏膜下層浸潤、低/未分化及胃癌組織MCM4高表達均是早期胃癌患者內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復發(fā)的危險因素(P<0.05),見表4。

表3 復發(fā)組和未復發(fā)組臨床資料比較[n(%)]

表4 早期胃癌患者內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復發(fā)的Cox回歸分析

3 討論

隨著內(nèi)鏡設(shè)備和技術(shù)的進步,內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)已成為早期胃癌治療的主要術(shù)式之一,早期胃癌患者經(jīng)規(guī)范治療5 a生存率可達到90%以上[10]。既往大量研究報道[11-13],早期胃癌內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)療效良好,但術(shù)后1 a仍有3.77%～9.81%的復發(fā)率,術(shù)后3 a復發(fā)率可達12.62%。本研究中術(shù)后3 a復發(fā)率為11.36%,與上述研究報道基本相符,均提示早期胃癌內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后仍存在復發(fā)情況。因此,探討影響早期胃癌內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復發(fā)的因素對指導臨床早期干預(yù)、進一步改善遠期預(yù)后具有重要意義。

MCM2-7異六聚體復合物對DNA復制和細胞周期進程起調(diào)控作用,近年來在腫瘤領(lǐng)域廣受關(guān)注。MCM4是 MCM復合物的一部分,參與 DNA復制的起始,還是復制叉處解開 DNA 復制解旋酶的核心,既往研究報道MCM4高表達參與多種癌癥的發(fā)生[14-15]。本研究發(fā)現(xiàn)MCM4在早期胃癌組織中高表達率高于普通受試者胃黏膜正常組織,提示MCM4高表達可能影響胃癌發(fā)病。本研究還發(fā)現(xiàn)黏膜下層浸潤、低/未分化早期胃癌患者胃黏膜癌組織MCM4高表達占比分別高于黏膜內(nèi)層浸潤、高/中分化患者,提示MCM4表達可能與早期胃癌浸潤程度和分化程度有關(guān),檢測MCM4表達可能對了解早期胃癌進展程度具有參考意義。腫瘤生長包括腫瘤細胞增殖、分化、遷移等,其中細胞增殖失控是腫瘤發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。MCM4調(diào)控細胞周期,既往研究發(fā)現(xiàn)MCM4表達與細胞細胞周期蛋白E、細胞增殖抗原標志物Ki-67表達顯著相關(guān),可作為評估腫瘤發(fā)生和進展的更敏感細胞增殖標志物[16]。魏敏等[17]也報道MCM4基因主要富集于細胞周期,MCM4高表達水平與子宮內(nèi)膜癌的病理分期、組織學分級密切相關(guān)。

本研究繪制Kaplan-Meier曲線比較胃癌組織MCM4高表達和低表達患者術(shù)后復發(fā)情況,發(fā)現(xiàn)高表達患者復發(fā)率高于低表達患者,并且進一步采用Cox分析發(fā)現(xiàn)胃癌組織MCM4高表達是早期胃癌患者內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復發(fā)的危險因素。MCM4影響癌細胞惡性增殖行為,過表達可能促進癌細胞生長進而增加復發(fā)風險。既往Xu等[18]也指出MCM4過表達與肝細胞癌預(yù)后不良相關(guān),沉默MCM4可抑制癌細胞增殖和球體形成,有望成為其治療靶點。另外,本研究還發(fā)現(xiàn)病灶最大直徑>3 cm、黏膜下層浸潤、低/未分化也是早期胃癌患者內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復發(fā)的危險因素。病灶直徑越大,手術(shù)完整切除病灶的難度越高,容易出現(xiàn)微小殘留導致復發(fā);黏膜下層浸潤增加內(nèi)膜剝離難度,可能存在未完全剝離情況,導致復發(fā)風險增高;分化程度是反應(yīng)腫瘤惡性程度的重要指標,分化程度越低,腫瘤生長、侵襲力越強,術(shù)后復發(fā)風險也越高,既往Ishioka等[19]也報道早期胃癌內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后未分化型癌相比分化型治愈性切除率低,術(shù)后復發(fā)率高。因此,在早期胃癌患者型內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)前需準確了解病灶大小和浸潤,提升手術(shù)醫(yī)生水平,術(shù)后根據(jù)病理檢查結(jié)果合理安排復診頻次,以便早期干預(yù),改善患者預(yù)后。

4 結(jié)論

MCM4在早期胃癌組織中呈高表達,與浸潤程度和分化程度有關(guān),其與病灶最大直徑>3 cm、黏膜下層浸潤、低/未分化均是早期胃癌患者內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復發(fā)的危險因素,提示MCM4可能是評估早期胃癌術(shù)后復發(fā)風險的新型生物標志物。