NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG親和力對兒童EB病毒感染的評估分析

張宏斌 馬清華

(1.西安大興醫院兒科,陜西 西安 710016;2.西電集團醫院兒科,陜西 西安 710000)

EB病毒(EBV)屬嗜B細胞類皰疹病毒,主要侵犯B淋巴細胞。當B淋巴細胞感染機體后,可對B淋巴細胞產生刺激作用,導致細胞增生、轉化[1],臨床將其稱為傳染性單核細胞增多癥(IM),IM患者的典型臨床癥狀為淋巴結腫大、扁桃體腫大、發熱、肝脾腫大等淋巴結增生性癥狀[2],嚴重者可導致心肌炎、皮疹、再生不良性貧血、神經系統并發癥等。臨床研究[3]還顯示,EB感染與鼻咽癌、B淋巴細胞惡性腫瘤以及免疫力低下的其它惡性腫瘤關系密切,因此重視EBV感染的防治是傳染科面臨的重要課題。本方案對疑似感染EBV的兒童檢測血漿病毒早期抗體(EA-IgG)、病毒核抗原抗體(NA-IgG)、病毒衣殼抗原抗體(CA-IgM)、病毒衣殼抗原抗體(CA-IgG)及CA-IgG親和力指標,觀察其在診斷兒童EBV感染的診斷效能,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年5月至2022年12月我院收治的疑似EBV感染的受試兒245例,其中男137例,女108例;年齡3～11歲,平均(6.35±1.24)歲。所有入組患兒均因出現臨床癥狀和(或)EBV感染流行病史,接診醫師初步診斷為疑似EBV感染[4];排除合并可能影響診斷結論的其它疾病患兒。

1.2 方法所有受試兒均由同一位接診醫師初步診斷為EB感染,采集所有受試兒的靜脈血,采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)檢測血漿EBV-DNA指標,采用間接免疫熒光法測定(IIFT)檢測血漿NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG親和力指標,參照EBV感染診斷的金標準診斷結論,計算采用血漿EBV-DNA載量、NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG親和力及聯合診斷EBV感染的診斷效能指標:診斷靈敏度、特異度、準確度。

1.2.1 EBV血漿DNA載量檢測采集受試兒外周靜脈血2 mL于乙二胺四乙酸抗凝管中,保存于2～4 ℃環境,在72 h內進行檢測。離心去除血細胞獲取血漿作為檢測標本,采用用實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測標本。本方案所用試劑盒由湘生物科技股份有限公司提供,檢測儀器為羅氏公司生產的LightCycler480II型實時熒光定量PCR儀。檢測方法及診斷標準嚴格按照試劑盒說明書實施。

1.2.2 EBV特異性抗體檢測采集受試兒外周靜脈血3 mL于抗凝,乙二胺四乙酸抗凝管中,保存于2～4 ℃環境,在72 h內進行檢測。離心去除血細胞獲得血漿作為檢測標本,采用間接免疫熒光法對EBNA-IgG、VCA-IgG、VCA-IgM、EA-IgG 4種抗體及VCA-IgG抗體親和力進行檢測。本方案所用試劑盒購自德國歐蒙醫學診斷公司,檢測儀器為上海光學儀器廠生產的熒光顯微鏡,嚴格按照試劑盒說明書及設備儀器操作說明書操作。

1.2.3 EBV感染診斷金標準由醫院感染科組織的小組按照相關指南對所有入組受試兒進行診斷,在排除其它病原體感染的基礎上,根據受試兒流行病學資料、臨床表現及癥狀、實驗室檢測指標及EB-DNA檢測結果、抗原、抗體等作出綜合診斷結論。

1.3 統計學方法采用四格表計算對EBV感染的診斷靈敏度、特異度、準確度及誤診率。靈敏度=綜合診斷陽性且測評方法診斷陽性/(綜合診斷陽性且測評方法診斷陽性+綜合診斷陽性但測評方法診斷為陰性),特異度=綜合診斷和測評方法診斷均為陰性/(綜合診斷陰性、測評方法診斷為陽性+綜合診斷和測評方法診斷均為陰性),準確度=(綜合診斷陽性+綜合診斷和測評方法診斷均為陰性)/總例數。

2 結 果

2.1 不同方法診斷兒童EB感染結果經臨床診斷、實驗室檢測結果及病情隨訪綜合診斷為EB感染的患兒共計203例;血漿EBV-DNA載量診斷EB感染共計200例,NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG親和力指標診斷EB感染分別為11例、169例、38例、182例、183例,EBV-DNA診斷為陽性200例,CA-IgM+CA-IgG+ CA-IgG親和力診斷陽性189例。見表1。

表1 不同方法診斷兒童EB感染結果(n)

2.2 不同方法診斷兒童EB感染靈敏度、特異度、準確度分析EBV-DNA檢測的診斷靈敏度及準確度均高于NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及 CA-IgG親和力及其聯合診斷方案。見表2。

表2 不同方法診斷兒童EB感染靈敏度、特異度、準確度分析(%)

3 討 論

目前臨床對于EBV感染的診斷方法中,診斷效能最高的屬EBV-DNA載量檢測,其通過聚合酶介導的一系列循環反應,對血漿中的EBV基因組DNA進行擴增放大,并與EBV的核酸片段進行比對,判斷血漿中是否存在EBV;可敏感反應EBV的感染和復制增殖情況[5]。一般情況下,病毒載量超過500拷貝,可明確診斷感染EBV。但該檢測方法耗時長,操作復雜,對檢測人員的技術要求較高。且該檢測方法所反映的情況對采樣時是否感染進行判斷,即臨床所謂的活動性感染診斷,對既往的感染史難以做出判斷。這對患者來說具有較高的臨床價值,但對于傳染病的防治所能提供的信息尚存缺陷[6]。EBV三項抗體檢測也是臨床應用較為廣泛的診斷EBV感染的方案。三項抗體指標包括EBV衣殼抗原(VCA)、EBV核抗原(EBNA)、EBV早期抗原(EA)的抗體檢測[7]。這些抗體出現在EBV感染的不同階段,據此可對感染情況作出判斷。雖然EBV三項抗體檢測具有上述優點,但其診斷的靈敏度、準確度也應達到較高的水平,方能盡可能降低醫療資源的無謂損耗[8]。

本方案對初診醫生診斷為疑似EBV感染的兒童分別檢測EBV-DNA載量、EBV抗體:NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG親和力指標,結合臨床患兒臨床癥狀及體征、實驗室數據等資料,由感染科資深醫師組成的小組對受試兒童的上述指標進行綜合分析并作出診斷結論,并對數據進行分析。結果顯示,以綜合診斷為金標準,采用EBV的特異性抗體NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及 CA-IgG親和力及其聯合方案診斷兒童EBV感染,不同抗體體現出來的診斷靈敏度、特異度和準確度存在較大的差異,其中EA-IgG、CA-IgG、CA-IgG親和力、CA-IgM+CA-IgG+CA-IgG親和力具有較高的診斷效能,而NA-IgG、VCA-IgM抗體的診斷效能非常差,與臨床其它文獻資料的結論存在較大的差異,這可能與兒童尤其是年齡較小的兒童其免疫功能不成熟,感染病毒后,自身免疫系統不能及時產生抗體,而未能檢出,導致診斷效能較差[9]。由于NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG親和力所反映的EB感染階段特征較為明顯,通過分析上述檢測指標的診斷結論,可以知曉受試兒童當下及既往是否存在EBV感染,為臨床EBV感染防控提供客觀數據。尤其是采用CA-IgM+CA-IgG+ CA-IgG親和力檢測聯合診斷,其基本涵蓋了當前感染、既往感染的全過程,不僅能保證較高的診斷效能,同時還為病情評估提供客觀數據[10]。

綜上所述,NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG親和力檢測作為診斷兒童EBV感染雖然診斷效能方面稍差于血漿EBV-DNA載量檢測診斷方法,但其可顯示既往感染情況,且操作簡便、快速,作為兒童大規模EBV感染篩查及完善病情資料的有益補充。

利益沖突說明/Conflict of Intetests

所有作者聲明不存在利益沖突。

倫理批準及知情同意/Ethics Approval and Patient Consent

本研究通過西安大興醫院倫理委員會批準,患兒家屬均知情同意。