PD-L1激活NF-κB促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用研究

牛玉苗 黃浩 陳曉靜

[摘要]?目的?探討程序性死亡蛋白配體-1（programmed?death?ligand-1，PD-L1）過表達(dá)對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響及可能機(jī)制。方法?使用實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的PD-L1過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株Ishikawa/PD-L1及穩(wěn)轉(zhuǎn)空載對(duì)照組Ishikawa/EV，qPCR及Western?blot法檢測(cè)PD-L1過表達(dá)效率，Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力和侵襲活性，Western?blot法檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白表達(dá)和核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear?factor?kappa-B，NF-κB）磷酸化水平。結(jié)果?與對(duì)照組相比，Ishikawa/PD-L1遷移能力與侵襲活性顯著增強(qiáng)，Vimentin、N-cadherin、p-p65蛋白表達(dá)明顯升高，E-cadherin表達(dá)明顯下調(diào)。結(jié)論?PD-L1可通過誘導(dǎo)NF-κB信號(hào)通路激活，促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，進(jìn)而增強(qiáng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力。

[關(guān)鍵詞]?子宮內(nèi)膜癌；程序性死亡蛋白配體-1；核轉(zhuǎn)錄因子-κB；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

[中圖分類號(hào)]?R737??????[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]?A????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2024.08.014

Role?of?PD-L1?on?promoting?epithelial-mesenchymal?transition?by?activating?NF-κB?in?endometrial?cancer

NIU?Yumiao，?HUANG?Hao，?CHEN?Xiaojing

Zhejiang?Provincial?Key?Laboratory?of?Precision?Diagnosis?and?Therapy?for?Major?Gynecological?Diseases，?Womens?Hospital，?School?of?Medicine，?Zhejiang?University，?Hangzhou?310006，?Zhejiang，?China

[Abstract]?Objective?To?investigate?the?effect?of?programmed?death?ligand-1?（PD-L1）?overexpression?on?epithelial?mesenchymal?transformation?（EMT）?in?endometrial?cancer?cells?and?its?possible?mechanism.?Methods?Ishikawa/PD-L1，?a?PD-L1?stable?overexpression?cell?line?constructed?in?the?laboratory?and?the?control?Ishikawa/EV?were?used.?The?efficiency?of?PD-L1?overexpression?was?detected?by?qPCR?and?Western?blot?assay.?The?cell?migration?ability?and?invasion?activity?were?detected?by?scratch?assay?and?Transwell?assay.?The?EMT-related?protein?and?the?phosphorylation?level?of?nuclear?transcription?factor-κB（NF-κB）?were?detected?by?Western?blot.?Results?Compared?with?the?control?group，?the?migration?ability?and?invasion?activity?of?Ishikawa/PD-L1?were?significantly?enhanced，?and?the?expression?of?E-cadherin?was?significantly?down-regulated，?whereas?vimentin，?N-cadherin?and?p-p65?were?significantly?increased.?Conclusion?PD-L1?can?promote?EMT?by?inducing?the?activation?of?NF-κB?pathway，?and?thus?enhance?the?migration?and?invasion?ability?of?endometrial?cancer?cells.

[Key?words]?Endometrial?carcinoma;?programmed?death?ligand-1;?Nuclear?factor?kappa-B;?Epithelial?interstitial?transformation

子宮內(nèi)膜癌近年來呈現(xiàn)總體發(fā)病率持續(xù)上升和年輕化趨勢(shì)。據(jù)中國(guó)癌癥中心2022年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第2位，新發(fā)病例約為8.2萬，嚴(yán)重威脅女性健康[1]。盡管大多數(shù)患者為早期病變且預(yù)后較好，但仍有約13%的患者存在轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，晚期或復(fù)發(fā)性疾病患者預(yù)后不良，5年生存率僅為17%[2]。因此，深入研究并闡明促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制對(duì)疾病的治療有著關(guān)鍵作用。

程序性死亡蛋白配體-1（programmed?death?ligand-1，PD-L1）是一種重要的免疫檢查點(diǎn)蛋白，通過與受體PD-1結(jié)合，抑制T細(xì)胞殺傷活性，促進(jìn)腫瘤免疫逃逸。PD-L1在多個(gè)癌種中均有表達(dá)，部分晚期和轉(zhuǎn)移性腫瘤中表達(dá)水平明顯升高[3-4]。高表達(dá)的PD-L1可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及遷移，導(dǎo)致疾病惡性進(jìn)展[5]。PD-1/?PD-L1免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療在晚期、復(fù)發(fā)性子宮內(nèi)膜癌中的應(yīng)用目前已逐步得到臨床研究的證實(shí)，但PD-L1在子宮內(nèi)膜癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)中的角色和相關(guān)機(jī)制報(bào)道仍十分有限。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal?transition，EMT）是子宮內(nèi)膜癌惡性進(jìn)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素，與患者不良預(yù)后關(guān)系密切[6]。核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear?factor?kappa-B，NF-κB）通路是重要的EMT上游調(diào)控通路，可抑制E-cadherin表達(dá)，使細(xì)胞極性喪失，遷移能力增強(qiáng)，導(dǎo)致腫瘤的耐藥和轉(zhuǎn)移[7]。最近研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌疾病進(jìn)展相關(guān)，晚期患者中蛋白陽性表達(dá)率顯著升高[8-9]。抑制NF-κB通路激活，能有效抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤、非小細(xì)胞肺癌等多個(gè)癌種中，PD-L1與NF-κB的表達(dá)呈明顯的正相關(guān)[10-12]。PD-L1是否可以通過NF-κB信號(hào)通路調(diào)控子宮內(nèi)膜癌EMT而發(fā)揮作用亟待研究。

本研究利用實(shí)驗(yàn)室自主構(gòu)建的PD-L1穩(wěn)定過表達(dá)Ishikawa細(xì)胞株，著重觀察子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中PD-L1表達(dá)與EMT及NF-κB的關(guān)系，在細(xì)胞水平上初步探討PD-L1對(duì)EMT的作用及可能的機(jī)制，為臨床上抗PD-L1免疫療法應(yīng)用于子宮內(nèi)膜癌提供理論依據(jù)。

1??材料與方法

1.1??實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及主要試劑

人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa購(gòu)買自ATCC；細(xì)胞總RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)定量聚合酶反應(yīng)試劑盒購(gòu)自美谷生物科技（浙江）有限公司；RIPA細(xì)胞裂解液、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒購(gòu)自伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司；ECL化學(xué)發(fā)光超敏顯色試劑盒購(gòu)自上海翊圣生物科技有限公司；PD-L1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、NF-κB?p65、NF-κB?p-p65、β-actin等抗體購(gòu)自美國(guó)Cell?Signaling?Technology公司；Transwell小室購(gòu)自Millipore公司；劃痕實(shí)驗(yàn)2孔插件購(gòu)自德國(guó)Ibidi公司；無菌胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司。

1.2??PD-L1過表達(dá)穩(wěn)株構(gòu)建

實(shí)驗(yàn)室使用慢病毒載體pCDH-CMV-MCS-EF1-?copGFP-T2A-Puro質(zhì)粒（以下簡(jiǎn)稱pCDH），EcoRI、XhoI內(nèi)切酶對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切并回收；合成含酶切位點(diǎn)的PD-L1引物序列：F：3-gattctagagctagcgaattcG?CCACCATGAGGATATTTGCTGTCTTTATATTCA-5，R：3-gtctttgtagtccatctcgagCGTCTCCTCCAAATGTGT?ATCACT-5。以細(xì)胞cDNA為模板擴(kuò)增目的基因；將擴(kuò)增后的目的基因與回收載體同源重組，經(jīng)轉(zhuǎn)化、擴(kuò)增、抽提后進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序成功后，與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，獲取病毒液；感染Ishikawa細(xì)胞，經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染慢病毒的細(xì)胞株。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PD-L1過表達(dá)載體的細(xì)胞株命名為Ishikawa/?PD-L1組，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pCDH空載質(zhì)粒的細(xì)胞株命名為Ishikawa/EV對(duì)照組。

1.3??RT-qPCR分析

收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，依照試劑盒說明書提取細(xì)胞總RNA，分光光度計(jì)分析測(cè)定濃度及質(zhì)量，取1000ng反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。采用2X?Universal?SYBR?Green?Fast?qPCR?Mix進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)。PD-L1引物序列上游為3-GCCGAAGTCATCTGGACAAG-?5，下游為3-AGTGTGCTGGTCACATTGAA-5；β-actin引物序列上游為3-GTCATTCCAAATAT?GAGATGCGT-5，下游為3-GCTATCACCTCCCCTG?TGTG-5。反應(yīng)體系：cDNA?1μl，上游引物0.2μl，下游引物0.2μl，SYBR?green?5μl，RNase-Free?H2O補(bǔ)至10μl。以β-actin作為內(nèi)參，2?ΔΔCt法相對(duì)定量計(jì)算穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中PD-L1?mRNA表達(dá)變化。

1.4??Western?blot法檢測(cè)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，每孔加入100μl含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液，冰上裂解30min，離心收集上清，經(jīng)濃度檢測(cè)、制樣后進(jìn)行凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜后分別用PD-L1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、NF-κB?p65、NF-κB?p-p65、β-actin一抗（依照說明書用一抗稀釋液進(jìn)行配置）4℃孵育過夜，清洗后二抗室溫孵育1h，Azure400成像系統(tǒng)顯影拍照。以β-actin蛋白作為內(nèi)參，用Image?J軟件處理圖像后得到各組蛋白表達(dá)的灰度值及蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.5??劃痕實(shí)驗(yàn)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞清洗消化，用含10%?FBS的DMEM培養(yǎng)基重懸計(jì)數(shù)，將細(xì)胞密度調(diào)整至????5×105個(gè)/ml待用。取24孔板，將Ibidi插件有黏性的一面平穩(wěn)放置于孔板中，固定插件。每孔加入70μl細(xì)胞懸液，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后小心移除插件，PBS洗去殘余液體，每孔加入500μl無血清DMEM培養(yǎng)基。在倒置熒光顯微鏡下觀察0、24、48h兩組細(xì)胞的遷移情況并進(jìn)行拍照記錄。使用Image?J軟件處理圖片計(jì)算相對(duì)愈合率。

1.6??Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)

無血清培養(yǎng)基和Matrigel基質(zhì)膠按8∶1比例進(jìn)行配置，取50μl混合液緩慢滴入小室中，避免產(chǎn)生氣泡，隨后將小室置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1h。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞消化重懸，計(jì)數(shù)后用無血清培養(yǎng)基調(diào)整密度為1×106個(gè)/ml，取200μl懸空滴入小室，注意避免產(chǎn)生氣泡。取600μl含20%FBS的DMEM培養(yǎng)基加入孔板下室，小心放入培養(yǎng)箱中，避免孔板震蕩導(dǎo)致細(xì)胞鋪板不勻。培養(yǎng)24h后取出小室，PBS清洗2次，4%多聚甲醛與結(jié)晶紫混合液固定染色10min，顯微鏡下拍照，使用Image?J軟件進(jìn)行圖像處理并計(jì)數(shù)。

1.7??統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad?Prism?8.0.2統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，樣本數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用非配對(duì)t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2??結(jié)果

2.1??穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中PD-L1表達(dá)水平檢測(cè)

與對(duì)照細(xì)胞比較，Ishikawa/PD-L1細(xì)胞中PD-L1?mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），該細(xì)胞模型可用于檢測(cè)PD-L1過表達(dá)對(duì)EMT的影響，見圖1、圖2。

2.2??PD-L1過表達(dá)對(duì)細(xì)胞遷移能力與細(xì)胞侵襲活性的影響

與對(duì)照組比較，Ishikawa/PD-L1組細(xì)胞遷移距離更長(zhǎng)，傷口愈合率更高（P<0.05，圖2）。與對(duì)照組比較，Ishikawa/PD-L1侵襲細(xì)胞數(shù)顯著增加（P

2.3??PD-L1過表達(dá)對(duì)EMT相關(guān)蛋白和p65蛋白磷酸化水平的影響

與對(duì)照組比較，Ishikawa/PD-L1組Vimentin、N-cadherin和p-p65蛋白表達(dá)明顯增加；E-cadherin蛋白明顯降低（P<0.05，圖3）。

3??討論

2013年癌癥基因組圖譜利用微陣列和測(cè)序技術(shù)對(duì)373例子宮內(nèi)膜癌進(jìn)行了基因組、轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組學(xué)特征分析，將子宮內(nèi)膜癌劃分為4類不同預(yù)后的亞型——POLE超突變型（7%）、微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定/錯(cuò)配修復(fù)缺陷型（28%）、低拷貝數(shù)變異型（39%）和高拷貝數(shù)變異型（26%）[13]。研究提示與其他癌種相比，子宮內(nèi)膜癌發(fā)生微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定/錯(cuò)配修復(fù)缺陷的概率最高，約占初治子宮內(nèi)膜癌30%，復(fù)發(fā)性子宮內(nèi)膜癌13%～30%[14]。該亞型腫瘤突變負(fù)荷高，常伴有高表達(dá)的PD-1/PD-L1，CD3+/?CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞占比也顯著升高，這些都為免疫檢查點(diǎn)抑制劑提供了理想的治療干預(yù)條件。隨著基礎(chǔ)研究的深入和臨床試驗(yàn)的進(jìn)行，越來越多的靶向藥物被嘗試用于晚期子宮內(nèi)膜癌的治療，但整體有效率低和患者耐受性差等限制了抗PD-1/PD-L1藥物的一線應(yīng)用[15-16]。深入研究PD-L1在子宮內(nèi)膜癌疾病進(jìn)展中的角色，挖掘新的藥物靶點(diǎn)顯得尤為重要。

最近有研究發(fā)現(xiàn)PD-L1在EMT、腫瘤干細(xì)胞樣表型、轉(zhuǎn)移等方面也具有重要作用。在食管癌中，PD-L1表達(dá)上調(diào)顯著增強(qiáng)細(xì)胞增殖、遷移和侵襲活性，促進(jìn)EMT進(jìn)程。在胃癌細(xì)胞中，敲降PD-L1顯著抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡和G0/G1期阻滯，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也證明敲低PD-L1顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，RNA測(cè)序分析顯示PD-L1影響基因表達(dá)，且這些基因主要富集在細(xì)胞生長(zhǎng)/遷移/侵襲通路中，進(jìn)一步體外實(shí)驗(yàn)證明PD-L1過表達(dá)可通過RAS/ERK通路促進(jìn)EMT[17-19]。隨著研究的深入，越來越多的證據(jù)表明PD-L1表達(dá)所致的生物學(xué)行為可能與EMT存在聯(lián)系。

NF-κB通路在腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)中具有重要作用。在腦膠質(zhì)瘤中，TGF-β1可通過NF-κB信號(hào)通路上調(diào)N-cadherin、Vimentin和Snail等蛋白表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞惡性進(jìn)展。在結(jié)腸癌中，抑制NF-κB?p65/p50核轉(zhuǎn)位能顯著抑制COX-2和p-AKT等表達(dá)，反轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞EMT。在卵巢癌中，SOS1蛋白可激活NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[20-22]。然而在子宮內(nèi)膜癌中，PD-L1是否通過NF-κB通路調(diào)控EMT卻鮮有報(bào)道。

本研究發(fā)現(xiàn)PD-L1過表達(dá)可顯著增強(qiáng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞遷移侵襲能力，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其作用機(jī)制可能與下調(diào)E-cadherin及誘導(dǎo)NF-κB?p-p65、N-cadherin、Vimentin表達(dá)有關(guān)，豐富了PD-L1在子宮內(nèi)膜癌惡性進(jìn)展中的研究，為抗PD-L1治療提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。然而PD-L1調(diào)控EMT更深層的機(jī)制和潛在的藥物靶點(diǎn)仍有待進(jìn)一步研究。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻(xiàn)]

[1] SIEGEL?R?L，?MILLER?K?D，?WAGLE?N?S，?et?al.?Cancer?statistics，?2023[J].?CA?Cancer?J?Clin，?2023，?73（1）：?17–48.

[2] MAKKER?V，?GREEN?A?K，?WENHAM?R?M，?et?al.?New?therapies?for?advanced，?recurrent，?and?metastatic?endometrial?cancers[J].?Gynecol?Oncol?Res?Pract，?2017，?72（1）：?4–19.

[3] 趙正強(qiáng)，?陳瓏，?劉宇杰，?等.?結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移灶中PD-L1基因陽性患者肝切除后的預(yù)后相關(guān)因素[J].?腫瘤防治研究，?2021，?48（8）：?6–10.

[4] 齊倩，?王春梅，?楊娟，?等.?HIF-1α，?PD-L1與非小細(xì)胞肺癌淋巴轉(zhuǎn)移的相關(guān)性[J].?中華肺部疾病雜志：?電子版，?2020，?13（2）：?5–8.

[5] MURALIDHARAN?S，?SEHGAL?M，?SOUNDHARYA?R，?et?al.?PD-L1?activity?is?associated?with?partial?emt?and?metabolic?reprogramming?in?carcinomas[J].?Curr?Oncol，?2022，?29（11）：?285–301.

[6] MAKKER?V，?MACKAY?H，?RAY-COQUARD?I，?et?al.?Endometrial?cancer[J].?Nat?Rev?Dis?Primers，?2021，?7（1）：?88–92.

[7] RAJENDRAN?P，?BEN?AMMAR?R，?AL-SAEEDI?F?J，?et?al.?Thidiazuron?decreases?epithelial-mesenchymal?transition?activity?through?the?NF-kB?and?PI3K/AKT?signalling?pathways?in?breast?cancer[J].?J?Cell?Mol?Med，?2020，?24（24）：?25–38.

[8] 馬詩影.?子宮內(nèi)膜癌患者NF-κb信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系分析[J].?實(shí)用癌癥雜志，?2018，?33（7）：?4–7.

[9] 高琳、陳靜、戴云峰.?子宮內(nèi)膜癌患者CerbB-2，?NF-κB?P50，?MIF和IκBα蛋白表達(dá)水平與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究[J].?中國(guó)腫瘤臨床與康復(fù)，?2020，?27（8）：?4–8.

[10] 黃濤，?關(guān)德鳳，?楊永秀.?基于PI3K/AKT/NF-κB通路探索異紫堇堿抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1B細(xì)胞增殖、遷移的分子機(jī)制[J].?蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），?2020，?25（6）：?11–15.

[11] 王平，?楊文秀，?周杰，?等.?彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中NF-κB/p65，?PD-1，?PD-L1表達(dá)相關(guān)性研究及其蛋白表達(dá)的臨床意義[J].?中國(guó)癌癥雜志，?2020，?30（5）：?8–11.

[12] 王星，?李小忠，?寧峰，?等.?非小細(xì)胞肺癌組織中NF-κB?p65與PD-1，?PD-L1表達(dá)的相關(guān)性以及對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值分析[J].?現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，?2023，?23（2）：?5–8.

[13] CANCER?GENOME?ATLAS?RESEARCH，?KANDOTH?C，?SCHULTZ?N，?et?al.?Integrated?genomic?characterization?of?endometrial?carcinoma[J].?Nature，?2013，?497（7447）：?67–73.

[14] Prendergast?E?N?，?Holman?L?L?，?Liu?A?Y?，?et?al.?Comprehensive?genomic?profiling?of?recurrent?endometrial?cancer：?Implications?for?selection?of?systemic?therapy[J].?Gynecol?Oncol，?2019，?154（3）：?102–109.

[15] HUVILA?J，?PORS?J，?THOMPSON?E?F，?et?al.?Endometrial?carcinoma：?molecular?subtypes，?precursors?and?the?role?of?pathology?in?early?diagnosis[J].?J?Pathol，?2021，?253（4）：?55–65.

[16] 劉鷗萱，?胡悅欣，?林蓓.?PD-1/PD-L1抑制劑治療晚期或復(fù)發(fā)性子宮內(nèi)膜癌的臨床研究進(jìn)展[J].?現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，?2021，?29（8）：?8–10.

[17] ZHANG?H，?QIN?G，?ZHANG?C，?et?al.?TRAIL?promotes?epithelial-to-mesenchymal?transition?by?inducing?PD-L1?expression?in?esophageal?squamous?cell?carcinomas[J].?J?Exp?Clin?Cancer?Res，?2021，?40（1）：?209–213.

[18] LI?J，?CHEN?L，?XIONG?Y，?et?al.?Knockdown?of?PD-L1?in?human?gastric?cancer?cells?inhibits?tumor?progression?and?improves?the?cytotoxic?sensitivity?to?CIK?therapy[J].?Cell?Physiol?Biochem，?2017，?41（3）：?7–20.

[19] QIU?X?Y，?HU?D?X，?CHEN?W?Q，?et?al.?PD-L1?confers?glioblastoma?multiforme?malignancy?via?Ras?binding?and?Ras/Erk/EMT?activation[J].?Biochim?Biophys?Acta?Mol?Basis?Dis，?2018，?1864（5?Pt?A）：?54–69.

[20] WANG?H，?CHEN?Z，?WANG?S，?et?al.?TGFbeta1-induced?beta-site?APP-cleaving?enzyme?2?upregulation?promotes?tumorigenesis?through?the?NF-kappaB?signalling?pathway?in?human?gliomas[J].?Mol?Oncol，?2020，?14（2）：?7–25.

[21] Jiang?W?，?Yan?Y?，?Chen?M?，?et?al.?Aspirin?enhances?the?sensitivity?of?colon?cancer?cells?to?cisplatin?by?abrogating?the?binding?of?NF-κB?to?the?COX-2?promoter[J].?Aging，?2020，?12（1）：?5–10.

[22] CHENG?M，?YE?X，?DAI?J，?et?al.?SOS1?promotes?epithelial-mesenchymal?transition?of?epithelial?ovarian?cancer（EOC）?cells?through?AKT?independent?NF-?kappaB?signaling?pathway[J].?Transl?Oncol，?2021，?14（9）：?101161–101172.

（收稿日期：2023–04–26）

（修回日期：2023–11–27）