雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)對(duì)托曲珠利的耐藥性檢測(cè)

孟令海，關(guān) 琛，方素芳，王 鵬，呂 江，王 瓊，顧小龍，崔 平*

（1.河北北方學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河北 張家口 075000；2.河北省張家口市畜牧技術(shù)推廣站，河北 張家口；3.河北省張家口市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河北 張家口；4.河北省張家口市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河北 張家口）

雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病是一種寄生于雞盲腸中的寄生蟲(chóng)病，一般以10～40日齡以?xún)?nèi)的雛雞最易感染，受害嚴(yán)重，死亡率達(dá)80%以上，病愈后的雛雞生長(zhǎng)發(fā)育受阻，成年雞多為帶蟲(chóng)者，會(huì)導(dǎo)致體增重和產(chǎn)蛋率下降，嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展[1]。迄今為止，使用化學(xué)藥物防治寄生蟲(chóng)病仍是養(yǎng)雞業(yè)中常采用的技術(shù)手段。托曲珠利（Toltrazuril，TOL）是一種具有廣譜、高效、低毒等特點(diǎn)的化學(xué)合成藥物，也是目前用藥劑量較低的一類(lèi)抗球蟲(chóng)藥[2]。但隨著抗球蟲(chóng)藥物的長(zhǎng)期使用，耐藥蟲(chóng)株不斷出現(xiàn)，為雞球蟲(chóng)病的預(yù)防與治療帶來(lái)諸多問(wèn)題[3]。基于此，本試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)對(duì)不同劑量托曲株利的耐藥性，為托曲珠利的科學(xué)使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 14日齡體重一致的308肉雞220只（復(fù)壯球蟲(chóng)用10只，耐藥性試驗(yàn)用210只），飼養(yǎng)條件為嚴(yán)格消毒過(guò)的環(huán)境，飼料為不添加抗球蟲(chóng)藥的全價(jià)飼料。

1.1.2 試驗(yàn)藥物 托曲珠利溶液（生產(chǎn)廠(chǎng)家：大連奧普動(dòng)物藥業(yè)有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：20200511）

1.1.3 試驗(yàn)蟲(chóng)株 從張家口地區(qū)不加任何抗球蟲(chóng)藥的養(yǎng)雞場(chǎng)采集糞便，通過(guò)單卵囊分離球蟲(chóng)，培養(yǎng)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)至孢子化，95%卵囊孢子化后收集卵囊，在4 ℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 將210只雞隨機(jī)分成7個(gè)組，每組30只。分別為I組（飲水治療劑量為25 mg/L），II組（飲水治療劑量為50 mg/L），III組（飲水治療劑量為75 mg/L），IV組（飲水治療劑量為100 mg/L），V組（飲水治療劑量為125 mg/L），VI組（陽(yáng)性組，感染不給藥），VII組（陰性組，不感染不給藥組）。

1.2.2 攻蟲(chóng)與給藥 除VII組外，其他組在試驗(yàn)開(kāi)始第1天時(shí)分別經(jīng)口感染孢子化柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊5×103個(gè)/只，除VI組和VII組外，各試驗(yàn)組均于病毒感染前1 d開(kāi)始飲水給藥。感染后每天觀(guān)察雞的狀況、糞便變化和采食情況，于感染后第7～15天每天收集糞便稱(chēng)重，觀(guān)察記錄糞便情況及其卵囊數(shù)。

1.2.3 耐藥性判定指標(biāo) 選用抗球蟲(chóng)指數(shù)（ACI）、病變記分減少率（RLS）、相對(duì)卵囊產(chǎn)量（ROP）和最適抗球蟲(chóng)活性百分率（POAA）4項(xiàng)指標(biāo)對(duì)耐藥性進(jìn)行綜合判定[4]。（1）抗球蟲(chóng)指數(shù)（Anti-coccidial index, ACI）：抗球蟲(chóng)指數(shù)=（相對(duì)增重率+存活率）－（病變值+卵囊值），當(dāng)ACI＜160，耐藥；當(dāng)ACI≥160，敏感。①存活率：以VII組的存活率為100%，計(jì)算其他各組試驗(yàn)雞存活率，存活率×100%，可得存活率得分。②相對(duì)增重率：以不感染不給藥組（即VII組）在試驗(yàn)期間每組雞的平均增重為100%，計(jì)算其它各組每雞的平均增重百分率，即相對(duì)增重率。③病變值：感染后9 d剖殺試驗(yàn)雞，采取盲腸組織觀(guān)察其病變情況并記分，盲腸病變記分的評(píng)定（詳見(jiàn)表1，組內(nèi)平均病變記分×10為該組病變值）。此外，因球蟲(chóng)感染死亡也記4分，并作全組平均后計(jì)算出病變值。④卵囊值：把剖檢后消化的盲腸勻漿內(nèi)卵囊數(shù)與該組第5～8天糞便卵囊數(shù)相加。根據(jù)卵囊比數(shù)換算成卵囊值，詳見(jiàn)表2。其中，卵囊比數(shù)=試驗(yàn)組卵囊數(shù)或不感染對(duì)照組卵囊數(shù)/感染對(duì)照組卵囊數(shù)乘以100%。每項(xiàng)指標(biāo)用陰性（－）表示無(wú)耐藥性，用陽(yáng)性（+）表示有耐藥性。判斷結(jié)果如下：完全耐藥（Complete resistant，CR）：4項(xiàng)指標(biāo)全為陽(yáng)性；重度耐藥（Serious resistant，SR）：4項(xiàng)指標(biāo)中有3項(xiàng)指標(biāo)為陽(yáng)性；中度耐藥（Middle resistant，MR）：4項(xiàng)指標(biāo)中有2項(xiàng)指標(biāo)為陽(yáng)性；輕度耐藥（Light resistant，LR）：4項(xiàng)指標(biāo)中有1項(xiàng)指標(biāo)為陽(yáng)性；敏感（Sensitive，S）：4項(xiàng)指標(biāo)均為陰性。

表2 卵囊值計(jì)算方法

（2）病變計(jì)分減少率（Reduction of lesion scores,RLS）。病變計(jì)分減少率（RLS）=感染不給藥組平均病變計(jì)分－感染用藥組平均病變計(jì)分/感染不用藥組平均病變計(jì)分×100%。當(dāng)RLS＜50%，耐藥；當(dāng)RLS≥50%，不耐藥。（3）相對(duì)卵囊產(chǎn)量（Relative oocysts production,ROP）。相對(duì)卵囊產(chǎn)量（ROP）=感染用藥組平均卵囊百萬(wàn)數(shù)/感染不用藥組平均卵囊百萬(wàn)數(shù)×100%。當(dāng)ROP＜15%，不耐藥；當(dāng)ROP≥15%，耐藥。（4）最適抗球蟲(chóng)活性百分率[5]（Percent of optimum anti-coccidial activity, POAA）。最適抗球蟲(chóng)活性百分率（POAA）=感染用藥組GSR－感染不用藥組GSR/不感染不給藥組GSR－感染不給藥組GSR×100%。當(dāng)POAA≤50%，耐藥；當(dāng)POAA＞50%，不耐藥。增重與存活率（Growth and survival ratio，GSR）=籠末重/籠初重。綜上所述，本試驗(yàn)選用ACI、RLS、ROP和POAA四項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行綜合判定，每項(xiàng)指標(biāo)用陰性（－）表示無(wú)耐藥性，用陽(yáng)性（+）表示有耐藥性。判斷結(jié)果如下：完全耐藥（Complete resistant, CR）：4項(xiàng)指標(biāo)全為陽(yáng)性；重度耐藥（serious resistant，SR）：4項(xiàng)指標(biāo)中有3項(xiàng)指標(biāo)為陽(yáng)性；中度耐藥（Middle resistant，MR）：4項(xiàng)指標(biāo)中有2項(xiàng)指標(biāo)為陽(yáng)性；輕度耐藥（Light resistant, LR）：4項(xiàng)指標(biāo)中有1項(xiàng)指標(biāo)為陽(yáng)性；敏感（Sensitive, S）：4項(xiàng)指標(biāo)均為陰性。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀和病理變化

I～VI組在開(kāi)始攻蟲(chóng)過(guò)程中，均出現(xiàn)食欲不振、精神萎靡、羽毛逆立等癥狀。I～V組在使用托曲珠利后開(kāi)始逐漸恢復(fù)食欲與精神，試驗(yàn)雞均存活，I組和II組的體重增長(zhǎng)緩慢，從III組開(kāi)始，體重持續(xù)增長(zhǎng)，總體上所有劑量的托曲珠利對(duì)試驗(yàn)雞的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響。剖殺時(shí)，對(duì)比7個(gè)試驗(yàn)組，I～V組，盲腸的狀況良好，VI組（陽(yáng)性組）的盲腸病變較嚴(yán)重，VII組（陰性組）的盲腸無(wú)病變。

2.2 耐藥性檢測(cè)結(jié)果

通過(guò)測(cè)定四項(xiàng)指標(biāo)表明，所有試驗(yàn)組POAA值均≥50%，結(jié)果為陰性，敏感；所有試驗(yàn)組RLS值≥50%，結(jié)果是陰性，敏感；所有試驗(yàn)組ROP＜50%，結(jié)果是陰性，敏感；ACI值測(cè)定中，I組和II組的值均＜160，呈陽(yáng)性，有耐藥性，而III組、IV組和V組值均＞160，呈陰性，無(wú)耐藥性，詳見(jiàn)表3。

表3 耐藥性檢測(cè)結(jié)果

結(jié)果表明，I組和II組僅ACI指標(biāo)呈陽(yáng)性，結(jié)果為I組和II組為輕度耐藥，III組、IV組和V組的四項(xiàng)指標(biāo)呈陰性，結(jié)果為敏感，見(jiàn)表4。

表4 綜合耐藥性判定

3 討論

本試驗(yàn)?zāi)退帣z測(cè)結(jié)果表明，25 mg/L作為正常劑量的托曲株利與二倍劑量的托曲株利均出現(xiàn)輕度耐藥性，使用托曲株利原始濃度抗雞球蟲(chóng)的敏感性在逐步減弱。蔣祿峰[6]等對(duì)河北省部分地區(qū)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)野外分離株進(jìn)行耐藥性檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果表明，石家莊、滄州、保定、唐山四個(gè)地區(qū)的分離株對(duì)妥曲珠利分別為重度耐藥、中度耐藥、重度耐藥和完全耐藥，這可能與當(dāng)?shù)氐挠盟幨泛陀盟幏椒ㄓ泻艽箨P(guān)系。耿天天[7]等開(kāi)展河南省和湖北省部分地區(qū)雞球蟲(chóng)分離株對(duì)地克珠利耐藥性調(diào)查研究表明，河南省和湖北省雞球蟲(chóng)對(duì)地克珠利均存在耐藥現(xiàn)象。地克珠利與妥曲珠利均屬三嗪類(lèi)抗球蟲(chóng)藥，曾因高效低毒被廣泛應(yīng)用，然而長(zhǎng)期用藥已使雞球蟲(chóng)產(chǎn)生了抗藥性，本次采集的張家口地區(qū)分離株對(duì)正常劑量的托曲珠利與二倍劑量的地克珠利具有抗藥性，建議在雞球蟲(chóng)防治過(guò)程中可配合其他抗球蟲(chóng)藥進(jìn)行輪換用藥和穿梭用藥。

本研究雖然能夠?yàn)閺埣铱诘貐^(qū)的球蟲(chóng)病防治提供一些理論依據(jù)和實(shí)際指導(dǎo)，但是要徹底解決球蟲(chóng)對(duì)當(dāng)?shù)仞B(yǎng)雞業(yè)的阻礙，還需從多方面努力。據(jù)盧緒峰[8]報(bào)道，在潮濕高溫的夏秋季，溫濕度過(guò)高，雞球蟲(chóng)病的發(fā)病率呈直線(xiàn)上升趨勢(shì)，其死亡率呈指數(shù)增長(zhǎng)；預(yù)防雞球蟲(chóng)病重要的環(huán)節(jié)是要保持圈舍內(nèi)的環(huán)境良好和干凈衛(wèi)生，應(yīng)該避免小日齡雞和成年雞生活在一起，以避免成年帶蟲(chóng)雞感染小日齡雞。養(yǎng)雞場(chǎng)在做好日常管理的同時(shí)，有條件的雞場(chǎng)盡量進(jìn)行球蟲(chóng)耐藥性測(cè)定，然后根據(jù)測(cè)定結(jié)果制定出適合本雞場(chǎng)的預(yù)防和治療用藥方案[9-10]，將球蟲(chóng)耐藥性降至更低，減少經(jīng)濟(jì)損失，提高雞場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益，為養(yǎng)雞業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

本次試驗(yàn)研究表明，張家口地區(qū)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)對(duì)托曲株利的耐藥濃度為50 mg/L，75 mg/L及以上劑量仍能有效防治雞球蟲(chóng)感染。