酒泉市豬場(chǎng)主要病毒性疾病的檢測(cè)與分析

張溪 張翠花 南金魚(yú) 張若玉

摘? 要：為了解2023年酒泉市幾種主要豬病毒病的流行情況，本研究采用熒光定量RT-PCR方法，對(duì)酒泉市630份豬血清、270份豬組織進(jìn)行了病原學(xué)檢測(cè)。結(jié)果顯示：檢出陽(yáng)性血清107份，樣本個(gè)體陽(yáng)性率由高到低依次為豬繁殖與呼吸綜合征病毒（7.78％）、豬偽狂犬病病毒（4.92％）、豬細(xì)小病毒（4.29％）、非洲豬瘟病毒（未檢出）、豬瘟病毒（未檢出）、口蹄疫病毒（未檢出）；樣本混合感染率為3.80％，豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合豬偽狂犬病病毒感染率最高（1.90％）。本次病原學(xué)檢測(cè)可為酒泉市豬場(chǎng)疫病綜合防控提供參考。

關(guān)鍵詞：豬；病毒性疾病；病原學(xué)檢測(cè)

中圖分類(lèi)號(hào)：S816 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2024）01-0031-04

隨著養(yǎng)豬業(yè)集約化、規(guī)模化程度的提高，豬病的發(fā)生、流行情況也越來(lái)越復(fù)雜。疫病的流行與暴發(fā)成為制約養(yǎng)豬業(yè)健康有序發(fā)展的主要原因，嚴(yán)重危害了養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展和人民的健康。為摸清酒泉市豬病的流行情況和危害程度，給疫病的預(yù)警和防控提供科學(xué)依據(jù)，降低疫病暴發(fā)對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的打擊，筆者在流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上于2023年7月對(duì)酒泉市15家規(guī)模化豬場(chǎng)、52家散養(yǎng)戶、5家生豬屠宰場(chǎng)的630頭豬，900份樣本（血清630份，組織270份）開(kāi)展了非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）、豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）、口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）、豬偽狂犬病病毒（porcine pseudorabies virus，PRV）、豬細(xì)小病毒（porcine parvovirus，PPV）等病原檢測(cè)。

1? 材料與方法

1.1 樣本來(lái)源

隨機(jī)采集轄區(qū)內(nèi)15家規(guī)模化豬場(chǎng)、52家散養(yǎng)戶和3家生豬屠宰場(chǎng)。其中規(guī)模化豬場(chǎng)包括? 6家種豬場(chǎng)和9家育肥豬場(chǎng)，每家豬場(chǎng)采集生豬血清30份，共計(jì)450份；散養(yǎng)戶共采集豬血清90份；每家屠宰場(chǎng)采集豬血清30份，并平行采集豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結(jié)各30份，共計(jì)90份豬血清、270份豬組織。

1.2 主要試劑

非洲豬瘟病毒、豬瘟病毒、口蹄疫病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自青島立見(jiàn)生物科技有限公司；豬細(xì)小病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司；DNA/RNA病毒基因提取試劑盒購(gòu)自青島立見(jiàn)生物科技有限公司。

1.3 主要儀器

Step One型熒光PCR購(gòu)自德國(guó)ABI Applied Biosystems公司。

1.4 樣本的處理

血清樣本：將0.5 mL血清，用高速冷凍離心機(jī)按12 000 r/min離心3 min，取離心上清液200 μL。

組織樣本：稱(chēng)取豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結(jié)0.1～0.2 g或剪下黃豆大小的體積，并加入5倍體積生理鹽水（1～2 mL），用組織研磨器將組織研磨成組織勻漿液，取組織勻漿液? ? ? 0.5 mL，用高速冷凍離心機(jī)按12 000 r/min離心3 min，取上清液200 μL。

1.5 樣本的熒光RT-PCR檢測(cè)

按照各病原的熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行試劑配制，在熒光PCR儀上按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求設(shè)定具體的反應(yīng)條件并收集熒光信號(hào)。

1.6 不同病原的流行特點(diǎn)分析

根據(jù)熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行不同病原陽(yáng)性率的統(tǒng)計(jì)分析，確定酒泉市ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV流行病學(xué)特點(diǎn)。

1.7 不同飼養(yǎng)規(guī)模的流行特點(diǎn)分析

根據(jù)熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行不同飼養(yǎng)條件下陽(yáng)性率的統(tǒng)計(jì)分析，確定酒泉市ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV的區(qū)域性流行病學(xué)特點(diǎn)。

1.8 混合感染的檢測(cè)分析

根據(jù)熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果，比對(duì)各病原的交叉感染情況，分析ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV等致病源的混合感染情況。

1.9 不同組織樣本的病毒檢出情況分析

根據(jù)熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果，對(duì)同一頭豬的血清、肺臟、扁桃體、頜下淋巴結(jié)病毒檢出率進(jìn)行分析，分析不同器官的病毒檢出率。

2? 結(jié)果

2.1 不同病原的流行特點(diǎn)分析

對(duì)630份血清進(jìn)行ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV陽(yáng)性率的統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如表1所示。由表1可知，PRRSV陽(yáng)性率最高，達(dá)7.78％；PRV次之，為4.92％；PPV陽(yáng)性率為4.29％；ASFV、CSFV、FMDV陽(yáng)性率為0，表明不同病原陽(yáng)性率差別較大。

2.2 不同飼養(yǎng)規(guī)模的流行特點(diǎn)分析

對(duì)不同飼養(yǎng)條件下的630份血清進(jìn)行ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV陽(yáng)性率的統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如表2所示，在不同養(yǎng)殖規(guī)模下不同病原的陽(yáng)性率存在較大差異，陽(yáng)性率由高到低依次為：散養(yǎng)戶、育肥豬場(chǎng)、種豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)；PRRSV的陽(yáng)性率在不同飼養(yǎng)條件下均最高；散養(yǎng)戶中PRRSV、PRV、PPV陽(yáng)性率均最高，分別為22.22％、12.22％和12.22％。表明不同飼養(yǎng)方式對(duì)不同病原陽(yáng)性率的影響較大，散養(yǎng)戶可能標(biāo)準(zhǔn)化程度低、飼養(yǎng)管理粗放、防疫密度低、疫苗免疫品種少、消毒滅源不徹底，導(dǎo)致其陽(yáng)性率最高。

2.3 混合感染的檢測(cè)分析

對(duì)630份血清進(jìn)行ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV交叉感染情況比對(duì)分析，結(jié)果如表3所示，含兩種或兩種以上病原的樣本共24份，混合感染率為3.80％，PRRSV+PRV混合感染率最高，為1.90％，PRRSV+PPV混合感染率為1.11％，PPV+PRV混合感染率為0.79％，未檢測(cè)到PPV+PRV+PRRSV三種病原混合感染的情況，表明臨床中有混合感染情況發(fā)生，應(yīng)提高重視。

2.4不同組織樣本的病原檢出情況分析

對(duì)3家生豬屠宰場(chǎng)90頭豬的血清、肺臟、扁桃體、頜下淋巴結(jié)等樣本進(jìn)行平行采樣，并對(duì)ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV等疫病進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，分析不同器官的病原檢出率，結(jié)果如表4所示。由表4可知，豬血清、肺臟、扁桃體、頜下淋巴結(jié)等樣本病原檢出結(jié)果相同，表明RT-PCR檢測(cè)準(zhǔn)確率高，敏感性強(qiáng)。

3? 結(jié)論

試驗(yàn)選取15家規(guī)模化豬場(chǎng)（種豬場(chǎng)6家，育肥豬場(chǎng)9家）、52家散養(yǎng)戶和3家生豬屠宰場(chǎng)，采集豬血清樣本630份，組織樣本270份，通過(guò)對(duì)不同病原、不同飼養(yǎng)規(guī)模，不同組織樣本進(jìn)行熒光PT-PCR檢測(cè)，檢出陽(yáng)性血清107份，樣本個(gè)體陽(yáng)性率分別為PRRSV 7.78％、PRV 4.92％、PPV 4.29％，其中ASFV、CSFV、和FMDV均未檢出陽(yáng)性樣本。表明PRRSV、PRV、PPV在酒泉市豬場(chǎng)（散養(yǎng)戶）中普遍存在。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果顯示，PRRSV感染率最高，尤其散養(yǎng)戶中陽(yáng)性率達(dá)22.20％。PRRSV在種豬場(chǎng)和育肥豬場(chǎng)陽(yáng)性率分別為5.00％和5.90％；PRV在散養(yǎng)戶、種豬場(chǎng)和育肥豬場(chǎng)陽(yáng)性率分別為12.20％、2.78％和4.81％；PPV在散養(yǎng)戶、種豬場(chǎng)和育肥豬場(chǎng)陽(yáng)性率分別為12.20％、3.33％和3.33％。這表明部分散養(yǎng)戶飼養(yǎng)管理手段粗放、防疫密度低、接種的疫苗品種少，對(duì)豬病的預(yù)防控制能力較弱。通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查顯示，酒泉市豬口蹄疫和豬瘟疫苗免疫率高，且從未發(fā)生過(guò)非洲豬瘟，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果顯示ASFV、CSFV和FMDV陽(yáng)性率為0，說(shuō)明接種疫苗對(duì)疫病的預(yù)防和控制呈正相關(guān)。

豬感染RRSV、PRV、PPV后臨床表現(xiàn)均為公豬種用性能下降，母豬返情久配不孕，妊娠母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、木乃伊胎和新生仔豬死亡的臨床表現(xiàn)，臨床診斷很難區(qū)分。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果顯示PRRSV、PRV、PPV有交叉感染的情況，使用熒光RT-PCR的方法能夠準(zhǔn)確地鑒別病毒，從而采取合理的預(yù)防治療手段。對(duì)有臨床癥狀的豬要及時(shí)隔離治療并做好消毒滅源工作，以防疾病的傳播和出現(xiàn)繼發(fā)感染。

在生豬屠宰場(chǎng)中檢出PRRSV、PRV、PPV等病毒，說(shuō)明臨床健康豬存在帶毒現(xiàn)象，建議豬場(chǎng)定期開(kāi)展病原學(xué)檢測(cè)，以便有效防止病原的傳播。

ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV等病原引起的病毒性疾病在臨床上無(wú)特效藥物，主要通過(guò)接種疫苗進(jìn)行預(yù)防，但為了防止大腸桿菌、沙門(mén)菌等繼發(fā)感染，在發(fā)生疫病時(shí)常用抗菌素和磺胺類(lèi)藥物進(jìn)行防治，可以減少發(fā)病率和死亡率。通過(guò)有效的檢測(cè)手段對(duì)病原進(jìn)行準(zhǔn)確、及時(shí)的監(jiān)測(cè)和診斷是防控疫病的重要環(huán)節(jié)。在生產(chǎn)中可采取以下措施：嚴(yán)禁從暴發(fā)疫病的地區(qū)引進(jìn)種豬；對(duì)于購(gòu)入的豬應(yīng)立即隔離觀察并進(jìn)行血清學(xué)或病原學(xué)檢查；制定和實(shí)施科學(xué)合理的免疫程序；定期開(kāi)展臨床檢查、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和消毒滅源工作。

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基金項(xiàng)目：酒泉市科技局科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目——PRRS（豬繁殖與呼吸綜合征）的防治技術(shù)研究與應(yīng)用（項(xiàng)目編號(hào)：2023CA2007）

作者簡(jiǎn)介：張溪（1988－ ），女，碩士，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物防疫、病原學(xué)監(jiān)測(cè)、免疫抗體檢測(cè)等工作；E-mail：515801697@qq.com

*通信作者：張翠花（1981－ ），女，本科，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物防疫、病原學(xué)監(jiān)測(cè)、免疫抗體檢測(cè)、疫情報(bào)告及分析等工作；E-mail：350509808@qq.com