胸腔積液細胞塊中臨床病理技術的應用分析

文/高明悅，劉杜先，孟俊弘，龔程，張曉雅

胸腔積液細胞塊是指在胸腔積液中存在的大量細胞聚集體。胸腔積液是指在胸腔腔隙中異常積聚的液體，可以包括多種成分，如紅細胞、白細胞、上皮細胞、腫瘤細胞等[1]。當積液中存在大量細胞聚集時，稱之為胸腔積液細胞塊。胸腔積液細胞塊的出現通常是胸腔積液的病理性變化，可能與多種原因有關。最常見的原因之一是惡性腫瘤，如肺癌、乳腺癌等可侵犯胸部組織并導致積液的產生，細胞塊中可能存在腫瘤細胞。此外，炎癥反應也是導致胸腔積液細胞塊的原因之一。肺部感染、結核等疾病會引起炎癥反應，細胞塊中可能存在炎癥細胞和病原體[2]。胸腔積液細胞塊的檢測通常通過胸腔穿刺或經支氣管鏡檢查獲取胸腔積液樣本，并使用顯微鏡觀察細胞形態和結構，進一步鑒定細胞的類型。細胞塊的形態可能在不同疾病中有所不同，但腫瘤細胞通常具有異型性和異常增殖的特點。對胸腔積液細胞塊的鑒定有助于診斷和治療相關疾病[3]。根據細胞塊的類型和數量，可以判斷胸腔積液的病因，以指導后續治療方案的選擇。例如，如果細胞塊中存在大量惡性腫瘤細胞，可能需要進一步進行腫瘤標志物檢測和組織病理學分析，以確定腫瘤的類型和分級，從而制定個體化的治療方案。本研究意在分析臨床病理技術在胸腔積液細胞塊檢查中的具體診斷效果，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象為胸腔積液患者150 例，入院時間為2021 年3 月至2023 年3 月，其中男性患者82 例，女性患者68 例，患者年齡分布范圍為32～76 歲，平均年齡為（56.98±6.33）歲。患者經臨床綜合診斷，確診為胸腔積液；患者了解本次研究的相關信息，并同意參與。排除身患其他癌變的患者；依從性較低，無法正常交流者；出現免疫系統疾病者。

1.2 方法

（1）常規細胞涂片檢測：①收集樣本：胸腔積液通常通過穿刺抽取獲取，收集積液樣本到干凈的容器中，確保樣本的新鮮和完整。②樣本準備：將涂片檢查所需的樣本均勻地涂于玻片上。③固定：將樣本的玻片迅速放入固定劑中，在固定劑中靜置一段時間（通常為5～10min），確保細胞附著于玻片上并保持其形態。④染色：使用染色劑（蘇木蘇染色、偏堿性品紅染色、格里姆染色等）對固定的細胞進行染色，目的是加強對細胞的觀察和分析。⑤干燥：將染色后的玻片通風自然干燥，使其保存完好。⑥觀察：用顯微鏡對干燥后的玻片進行觀察和分析。觀察細胞的形態、結構、數量、染色情況等，依據細胞的特征進行診斷和分析。⑦報告和解讀：根據觀察結果，細胞學專業人員將分析和診斷結果記錄在報告中，解讀細胞的異常情況并作出相應的建議和處理方案。

（2）細胞塊免疫組化法檢測：①收集樣本：首先，從患者胸腔積液中采集樣本。這可以通過胸腔穿刺或胸腔造口術進行。收集的樣本應盡快送到實驗室進行處理。②樣本制備：將收集到的胸腔積液樣本轉移到離心管中，并使用離心機將離心管以3000rpm 的速度離心5min，以沉淀細胞。離心后，將上清液倒掉，保留細胞沉淀。③細胞固定：使用10%的中性緩沖福爾馬林固定細胞。將10%的福爾馬林添加到細胞沉淀中，進行充分混勻，然后靜置固定15min。④制作細胞塊：將固定的細胞沉淀放入孔板或玻片中，然后加入熔化的瓊脂糖。然后將玻片或孔板放置在冰上或冷卻平臺上，使瓊脂糖凝固形成細胞塊。⑤切片：將固化的細胞塊從玻片或孔板上切割下來，厚度通常為4～6 微米。使用切片機或切片刀進行切割，并將切片轉移到玻片上。⑥抗原檢測：使用特定的抗體來檢測細胞塊中的特定抗原。根據具體的實驗目的，選擇合適的抗體進行染色。⑦免疫染色：將細胞塊上的切片進行抗體與抗原的結合反應。首先，使用蛋白抗原阻斷劑封閉非特異性結合位點，然后加入一抗體，使其與目標抗原結合。接著加入適當的二抗（帶有特定熒光染料的抗體），使其與一抗結合，并形成標記物抗原復合物。⑧洗滌與固定：用緩沖液洗滌切片，以去除未結合的抗體。洗滌過程中通常重復3 次。最后，使用適當的固定液固定切片。⑨觀察與分析：使用熒光顯微鏡觀察切片，觀察抗原與熒光標記的抗體的結合情況。根據熒光標記的抗體的顏色和位置，可以確定抗原的表達情況和細胞類型。

1.3 觀察指標

（1）診斷結果分析：以手術病理結果為 “金標準” ，對患者進行常規細胞涂片法與細胞塊免疫組法檢測，分析兩種檢查結果的準確率情況；

（2）對比常規細胞涂片法與細胞塊免疫組化法診斷效能：分為靈敏度、特異性以及準確度。其中準確度=（陽性+陰性）例數/總例數×100%；靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；特異度=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%；

（3）觀察兩種技術下，在胸腔積液樣本中細胞角蛋白（CK7、CK5/6）、癌胚抗原（CEA）、甲狀腺轉錄因子1（TTF-1）、細胞中Wilms 腫瘤有關的基因（WT-1）的表達情況。

1.4 統計學方法

本次研究使用SPSS21.0 軟件進行數據分析，計數資料以百分比表示，組間比對使用卡方值，計量資料以均數±標準差表示，t 值進行組間檢驗；P＜0.05，有統計學意義。

2 結果

2.1 對比兩種技術診斷結果

以手術病理檢測為金標準，150 例胸腔積液患者中，陽性病例113 例，陰性病例37 例，對比兩組不同檢測技術可知，細胞塊免疫組化法診斷結果優于常規細胞涂片法（見表1）。

表1 對比不同技術方式結果分析

2.2 比較兩種技術的診斷效能

依據診斷結果，對比兩種技術的診斷效能，細胞塊免疫組化法均優于常規細胞涂片法（P＜0.05），數值見表2。

表2 對比兩種技術的診斷效能[n(%)]

2.3 不同抗體在腺癌細胞與間皮性腫瘤細胞中的表達

在確診的113 例患者中，腺癌患者61 例，間皮癌患者52 例，不同抗體在兩種癌細胞中的表達情況比較，差異顯著（P＜0.05），數值見表3。

表3 不同抗體的表達情況

3 討論

胸腔積液是指在胸腔內聚集過多的液體。正常情況下，胸腔內只有極少量的液體（胸腔腔隙液），幫助肺膜的滑動和呼吸運動。然而，當體內出現疾病或其他問題時，胸腔積液可能會形成[4]。這種積液可能來自炎癥反應、感染、腫瘤、心臟病、肝腎疾病等等。胸腔積液使得胸腔容量減少，導致呼吸困難、咳嗽、胸痛等癥狀出現。常用的胸腔積液檢查方式有以下幾種：（1）胸腔抽液：胸腔抽液是一種常見的胸腔積液檢查方式，通過將一根細長的針插入胸腔，吸取胸腔內積聚的液體，并對液體進行病理檢測，以評估積液的性質和病因[5]。此外，胸腔抽液還能減輕胸腔積液帶來的不適癥狀，幫助患者恢復呼吸功能。（2）胸腔穿刺：胸腔穿刺是一種微創的檢查方法，通過將一根較細的針插入胸腔，直接觀察穿刺液體的外觀和性質。這種方法可以迅速判斷積液的性質，如判斷積液是否為血液、膿液或淋巴液。同時，胸腔穿刺還能進行輔助治療，如引流積液以減輕胸腔壓力。（3）胸腔鏡檢查：胸腔鏡檢查是一種微創的手術方法，在局麻或全麻下使用胸腔鏡探查胸腔內的病變[6]。這種方法可以直接觀察積液的性質，如判斷是否有惡性細胞存在，以幫助確定病因。

胸腔積液細胞塊診斷是一種通過采集胸腔積液進行細胞學檢查來確定疾病的診斷方法，是一種常用的臨床病理技術，用于確定胸腔積液的原因以及評估患者的病情。胸腔積液細胞塊診斷在臨床病理中廣泛應用，并且常用的技術包括細胞涂片法和細胞塊免疫組法[7-8]。細胞涂片法是將胸腔積液經過一系列的前處理后涂布在載玻片上，然后經過染色、顯微鏡觀察和分析。這種技術操作簡便、成本低廉，常用于常規病理診斷。通過這種方法可以確定細胞類型和形態，如細胞核的形態、細胞質的顏色等，這些形態學特征可以幫助鑒別疾病的類型，如癌細胞、炎性細胞、淋巴細胞等，對于腫瘤的診斷有一定的參考價值。然而，細胞涂片法也存在一些局限性[9]。首先，由于細胞固定在載玻片上的厚度較薄，細胞形態和細胞排列的信息相對有限，容易出現破損、變形等情況。其次，細胞涂片法對胸腔積液的細胞數量要求較高，如果細胞數量不足，可能會導致診斷困難。此外，細胞涂片法無法提供細胞表面標記物的信息，對于一些需要免疫組化分析的疾病診斷是不夠準確的。相比之下，細胞塊免疫組法則是一種結合了細胞涂片法與免疫組織化學方法的技術。在細胞塊制備過程中，細胞通過離心或刮取等方法使其固定在載玻片上，形成塊狀，這樣可以保留細胞的完整性和三維結構[10]。然后，通過免疫組化技術對細胞塊進行抗體染色，在顯微鏡下觀察標記物的表達情況。細胞塊免疫組法可以檢查多種免疫標記物，如腫瘤相關抗原、細胞增殖標志物、細胞表面標志物等，從而幫助鑒別不同類型的細胞和病理態勢。

細胞塊免疫組法相對于細胞涂片法具有以下幾個優勢：（1）提高細胞檢測的準確率：細胞塊免疫組法采用的是整個細胞塊進行免疫染色，相比于細胞涂片法只檢測細胞表面的染色，可以更全面地評估細胞的分子表達情況，提高了細胞檢測的準確率。（2）保留細胞器結構完整性：細胞塊免疫組法不需要對細胞進行固定和染色處理，可以在細胞的原生狀態下進行染色，并保持細胞器的結構完整性，有利于觀察和研究細胞器的形態和功能。（3）多重抗體共染色：細胞塊免疫組法可以同時使用多個標記的抗體進行共染色，通過不同顏色的標記可以同時檢測多個蛋白質的表達以及在細胞中的定位，提供了更多信息來研究細胞的功能和相互作用。（4）可應用于多種細胞樣本：細胞塊免疫組法可以應用于不同來源的細胞樣本，包括細胞培養物、組織切片以及體液中的細胞。靈活的應用方式使其在臨床診斷和實驗室研究中具有廣泛的應用前景。（5）能夠檢測少量細胞：細胞塊免疫組法相對于細胞涂片法來說，對樣本量的要求較低，可以檢測少量的細胞，甚至單個細胞。這使其在罕見細胞檢測、腫瘤個體化治療和微創手術中具有潛在價值。

綜上所述，細胞涂片法操作簡便，適用于常規病理診斷，在鑒別疾病類型時局限較大；而細胞塊免疫組法能提供更為精確的病理診斷信息，但操作復雜且成本較高。醫生需要結合臨床病史、癥狀等進行綜合判斷，選擇合適的技術來進行胸腔積液細胞塊診斷。