醫(yī)院的病理PCR實驗室可開展哪些檢查項目

任偉民

什么是病理P C R實驗室

P C R實驗室也稱為基因擴增實驗室，實時的熒光定量P C R技術是D N A定量技術的一個飛躍，是用來擴增特異的D N A片段，也可以看作生物體外的特異D N A復制。經過D N A基因追蹤系統，可以快速了解患者體內特定D N A改變的情況，尤其是腫瘤，其準確度可達到納米級別。而實時熒光定量P C R技術，就是實現此技術的重要載體。P C R試驗也可用來檢測結核、人乳頭瘤病毒等感染性疾病，利用將病毒內含有的基因組進行擴增的方式，測定某些病毒濃度不高的感染者身上是否存在特異的病毒。P C R檢測技術具備較高的靈敏度和特性，且操作簡便快速，對樣本沒有過高的要求，所以，當前已受到臨床醫(yī)師的一致肯定，并在臨床診斷中得到了廣泛運用。但許多人可能并不清楚，病理P C R檢測其實是病理檢查的一部分。

什么是病理檢查

那什么是病理檢查呢？病理檢查屬于一種可靠且直觀的腫瘤診斷技術，是直接把人體器官取下來的病灶制作成切片，放置于顯微鏡下觀察，確定病變性質。倘若明確是惡性腫瘤，就應對腫瘤實施病理評估，如命名、分級、侵襲范圍、是否充分切除、組織學療效評價、預后等相關信息，這些均為臨床制訂和實施治療方案的關鍵性依據。所以，病理檢查也被稱為腫瘤診斷的“金標準”。例如，人們聞到一股特殊的氣味，表示空氣中含有異常物質。但倘若需具體明確是何種物質，就需采用專業(yè)的實驗室設備進行分析，病理檢查就是這樣的。

病理檢查的步驟

（一）標本采集

病理檢查的第一步是采集病理標本，包括活體組織、手術切除標本、細針穿刺標本等。標本的采集需要遵循一定的操作規(guī)范，以保證標本的完整性和質量。

（二）標本處理

采集到的病理標本需要進行一系列的處理步驟，包括固定、切片、染色等。固定是將標本中的細胞和組織固定在載玻片上，以保持其形態(tài)和結構的穩(wěn)定性。切片是將固定的組織標本切割成非常薄的切片，以便于觀察和分析。染色指通過染色劑對切片進行染色，以突出細胞和組織的結構特征。

（三）鏡下觀察

經過處理的標本切片會被放置在顯微鏡下，由病理醫(yī)師進行觀察和分析。病理醫(yī)師通過觀察切片中的細胞和組織形態(tài)學特征，來確定是否存在病理變化和病變類型。他們會注意細胞和組織的形狀、大小、排列方式、染色性質等方面的變化。

（四）診斷和報告

根據觀察和分析的結果，病理醫(yī)師會進行診斷，并生成病理報告。病理報告中會詳細描述標本的病理特征、診斷結果和可能的預后信息。這些報告會被發(fā)送給臨床醫(yī)生，作為輔助臨床診斷和治療的重要依據。

為什么必須要進行病理檢查

病理檢查實際上就是把切除的腫塊送往實驗室展開進一步檢查，明確該腫塊屬于良性或者惡性，倘若屬于良性腫塊，手術切除就可以實現徹底治愈的目標，但倘若是惡性的，只通過手術切除是不行的，還應進一步擴大手術，術后還應到腫瘤科接受放療和化療干預。所以，病理醫(yī)師就好比是一個法官，他的判定和患者的生存情況存在密切聯系。外科醫(yī)師根據病理檢查結果，來確定是開展局部切除腫塊的小手術，或是徹底性治愈的大手術。腫瘤內科醫(yī)師根據病理結果，給患者制定藥物治療方案。在經過顯微鏡對檢查組織進行形態(tài)評估后，會針對很多惡性腫瘤進行進一步分子病理評估，這就需要在病理P C R實驗室來完成了。

P C R實驗室可開展哪些檢驗項目

（一）病原體檢測

P C R技術的提出和發(fā)展可以使病原體檢測迅速、便捷地實施。因為此項技術的陽性率較高，僅需利用微量病原體即可獲得陽性結果，這并不能作為診斷依據，只有存在相應數量的病原體后，才具備臨床意義。所以，使用熒光技術P C R可以迅速獲得精準的檢測結果，對于模板精準定量具有非常重要的意義。針對免疫學檢測的“窗口期”問題的處理，判定病癥是否處于亞臨床或者隱性狀態(tài)，以及抗體檢測無法判斷屬于既往感染或現癥感染的情況，都能夠通過P C R來明確。比如，新型冠狀病毒核酸檢測，以熒光P C R法作為方法學，用于體外定性檢測感染新冠病毒的疑似肺炎病例、疑似聚集性病例，及診斷鑒別其他新型冠狀病毒感染病。具體可以通過采集上呼吸道標本，包括咽拭子、鼻拭子等；也可以采集下呼吸道標本，包括呼吸道抽取物、肺泡灌洗液樣本、肺組織活檢標本等。其他病原體檢測，如H IV、甲乙丙肝、H P V、肺支、肺衣、E B病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族鏈球菌等均可以使用P C R技術。

（二）遺傳病檢測

對于遺傳性疾病來說，基因突變和拷貝數變異是關鍵的遺傳學基礎，也是檢測遺傳性疾病的重要指標。遺傳性疾病的繁雜性，跟隨基因突變的類型及數量變化而變化；基因拷貝數變異除呈現出復制與缺失外，缺失的部位、大小和復制倍數上也具有多樣性。基因變異的復雜性，給遺傳病的臨床應用測定提供了技術挑戰(zhàn)。實時P C R技術是目前應用最廣泛的一種新型技術，使用熒光標記法或熔點分析，能夠在同一個反應管內測定多種作用靶點。比如，檢測人Y染色體A Z F區(qū)微缺失，以熒光P C R法為主要方法學。該產品適用于對男性全血樣本中Y染色體無精子癥因子進行定性檢測。以往研究顯示，Y染色體A Z F區(qū)的各種程度缺失可造成男性無精癥、少精癥、精子畸形癥等，進而造成男性不育。

（三）基因突變檢測

病理P C R實驗室還可開展基因突變檢測。基因突變是一種重要的遺傳疾病原因，如遺傳性腫瘤、遺傳性心臟病等。病理P C R可以用于檢測某些重要基因的突變，如B R C A 1 /2基因、E G F R基因等。對基因的突變情況進行檢測，可以快速確定患者是否存在遺傳性疾病的風險，為個體化治療和遺傳咨詢提供重要依據。

（四）個性化用藥

藥物基因組學及藥理學的進一步發(fā)展，明確了藥物代謝與效應個體化差異的遺傳特質，用藥后出現不良反應的原因是藥物代謝酶基因變異，造成酶活性失常，用藥后體內藥物無法被順利代謝、吸收或排泄體外，導致體內藥物含量過多或過少，達不到理想的醫(yī)療效果。這種特殊用藥反應，可以通過檢查與患者所使用藥品有關的遺傳基因，改變用藥劑型或尋求替代方法，最大程度地制定出合理、可行、經濟的用藥處理方法。例如，對于心血管疾病的個體化用藥，可以通過熒光P C R法來選擇治療心血管疾病的藥物，如葉酸、氯吡格雷、華法林、硝酸甘油等，同時還可以通過生物檢測來判斷心血管用藥的指導分子，明確基因類型。藥學醫(yī)師針對檢測結果，且全方位考慮患者個體因素、臨床診斷、聯合用藥等信息，為臨床個體化用藥提供科學依據。其他種類的個體化用藥，比如他汀類藥物、β受體阻滯劑、兒童安全用藥、腫瘤靶向化療個性化用藥等均可采用P C R法。

（五）腫瘤研究

很多對原癌基因和抑癌基因的表達情況的測定均可發(fā)現致癌的可能性，而P C R方法學也有助于解決這些問題。比如，利用多重熒光定量P C R檢查乳腺癌E S R、B R C A I、C D K N 2 A等基因，有助于乳腺癌的診斷及治療。又比如乳腺癌2 1基因檢測，主要是對乳腺癌患者腫瘤組織中的特異性基因表達水平進行定量測定，再通過計算公式轉化為復發(fā)風險的評分，并通過評分對乳腺癌患者的復發(fā)風險、預后檢測和治療提供指導信息。