蒙藥消腫九味散對痛風性關節炎大鼠尿酸及炎性細胞因子的影響

劉秉真,劉士民,趙紅魚,吳 昊,樊烜婷,郝 華,賈麗芬,董秋梅

(1. 內蒙古醫科大學中醫學院,內蒙古 呼和浩特 010110;2. 呼和浩特市蒙醫中醫醫院,內蒙古 呼和浩特 010000;3. 內蒙古自治區中醫醫院,內蒙古 呼和浩特 010020)

痛風性關節炎是一種由尿酸鹽沉積于關節等組織所導致的一種發作性疾病,發作時可出現劇烈的疼痛,病情嚴重時可影響關節功能,對患者的生活質量造成很大影響[1]。目前醫學界尚無根治痛風性關節炎的方法,西醫大多以秋水仙堿、非布司他、立加利仙及非甾體抗炎藥治療為主,但因藥物不良反應等因素影響,患者接受度較低。我國內蒙古地區是痛風性關節炎高發區, 蒙醫在治療痛風性關節炎方面積累了豐富經驗,具有不良反應少、可減少復發等獨特優勢。本團隊前期研究表明,蒙藥消腫九味散外敷治療痛風性關節炎臨床療效確切[2],且具有經濟實惠、安全性高等優勢,但其作用機制尚未明確。本實驗觀察了該外用藥對痛風性關節炎大鼠血尿酸及相關炎性細胞因子水平的影響,旨在為蒙藥消腫九味散治療痛風性關節炎提供客觀的實驗依據。

1 實驗材料與方法

1.1實驗動物 SPF級雄性Wistar大鼠40只,體重(210±20)g,由內蒙古醫科大學動物實驗中心提供,合格證書編號:SXCK(蒙)2015-0001。大鼠分籠飼養于普通級動物室,室溫20～25 ℃,保持空氣流通及12 h光照,自由進食水,定期更換墊料、清潔鼠籠。實驗嚴格遵守內蒙古醫科大學醫學倫理委員會規定。

1.2藥物 蒙藥消腫九味散(內蒙古國際蒙醫醫院制劑室制備);云南白藥噴劑(云南白藥集團有限公司生產,批號:ZL16023);扶他林乳膠劑(北京諾華有限公司生產,批號:7P1503)。

1.3主要試劑與儀器 尿酸鈉、氧嗪酸鉀(上海源葉生物科技有限公司);大鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒、大鼠白細胞介素-1(IL-1)ELISA試劑盒、大鼠白細胞介素-6(IL-6)ELISA試劑盒、大鼠白細胞介素-8(IL-8)ELISA試劑盒、大鼠腫瘤壞死因子-α(TNF-α)ELISA試劑盒(武漢華聯科生物技術有限公司);微量高速離心機(湖南湘智離心機儀器有限公司);隔水式恒溫生化培養箱(上海精宏實驗設備有限公司);酶標儀(Labsystems Multiskan MS公司);洗板機(Thermo Labsystems公司);全自動生化分析儀(深圳雷杜生命科學股份有限公司);尿酸試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.4實驗方法 將40只大鼠隨機分為正常組、模型組、扶他林乳膠劑組、云南白藥噴劑組、蒙藥消腫九味散組,每組8只。除正常組不予造模外,其余4組均參考文獻[3-4]的方法建立痛風性關節炎模型:將氧嗪酸鉀鹽用滅菌熱蒸餾水配成3 g/100 mL的混懸液,按照300 mg/kg的劑量腹腔勻速緩慢注射,2次/d;注射15 min后采用6號針頭將0.2 mL尿酸鈉溶液緩慢注射到大鼠踝關節腔內,1次/d,連續注射7 d。大鼠造模成功后,扶他林乳膠劑組給予扶他林乳膠劑外敷,云南白藥噴劑組給予云南白藥噴霧劑外用,蒙藥消腫九味散組給予蒙藥消腫九味散(與雞蛋清以1∶2 的比例充分混合后調制成糊狀)外敷,藥物均作用于病變關節表面,厚度約1 mm,每天應用1次,連續干預14 d;正常組和模型組不予處理。

1.5檢測指標及方法 ①造模結束后取大鼠眼眶血,給藥結束后取腹主動脈血,均3 000 r/min離心15 min后冷藏,分別用尿酸試劑盒測定造模結束后和給藥14 d后各組大鼠血清尿酸水平,采用ELISA法測定給藥14 d后各組大鼠血清PGE2、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平。②采血結束后,留取大鼠踝關節,HE染色觀察踝關節組織病變情況。

1.6統計學方法 采用SPSS 22.0軟件處理分析數據,當資料滿足正態或大致正態分布以及方差齊性時,采取單因素方差分析;當資料不滿足正態分布或不具備方差齊性時,采用多個獨立樣本的秩和檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1各組大鼠血清尿酸水平比較 造模結束后,各造模組大鼠血清尿酸水平均明顯高于正常組(P均<0.05),各造模組間比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。給藥14 d后,各用藥組大鼠血清尿酸水平均明顯低于模型組(P均<0.05),且扶他林乳膠劑組均明顯低于云南白藥噴劑組和蒙藥消腫九味散組(P均<0.05),云南白藥噴劑組和蒙藥消腫九味散組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 正常組和痛風性關節炎各組大鼠血清尿酸水平比較

2.2各組大鼠血清PGE2及IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平比較 模型組大鼠血清PGE2、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平均明顯高于正常組(P均<0.05);各用藥組大鼠血清PGE2、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平均明顯低于模型組(P均<0.05);各用藥組大鼠血清PGE2水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05); 扶他林乳膠劑組大鼠血清IL-1、IL-8、TNF-α水平均明顯低于蒙藥消腫九味散組(P均<0.05),血清IL-6水平與蒙藥消腫九味散組比較差異無統計學意義(P>0.05);云南白藥噴劑組大鼠血清IL-6、TNF-α水平均明顯低于蒙藥消腫九味散組(P均<0.05),血清IL-8水平明顯高于蒙藥消腫九味散組,血清IL-1水平與蒙藥消腫九味散組比較差異無統計學意義(P>0.05);扶他林乳膠劑組大鼠血清IL-1、IL-8水平均明顯低于云南白藥噴劑組(P均<0.05),血清IL-6水平明顯高于云南白藥噴劑組(P<0.05),血清TNF-α水平與云南白藥噴劑組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 正常組和痛風性關節炎各組大鼠血清PGE2、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平比較

2.3各組大鼠踝關節組織病變情況 正常組大鼠踝關節整體結構基本正常,軟骨表面光滑,滑膜細胞整齊排列,組織未見明顯炎性細胞浸潤;模型組大鼠踝關節整體結構異常,軟骨表面正常結構消失,滑膜組織充血、水腫明顯,并伴有滑膜增生、大量炎性細胞浸潤、細胞排列紊亂及血管翳形成;相比于模型組,各用藥組大鼠踝關節整體結構輕度異常,滑膜炎癥程度均有不同改善,炎性細胞浸潤及滑膜增生明顯減輕。見圖1。

圖1 正常組和痛風性關節炎各組大鼠踝關節組織HE染色表現(×100)

3 討 論

痛風性關節炎屬于代謝性風濕病,當機體血尿酸濃度超過尿酸溶解度時,尿酸便以結晶的形式沉積于關節周圍,引起各種肥大細胞、單核巨噬細胞系統的活化,進而促進無菌性炎癥的發生發展[5]。在無菌性炎癥反應激活的過程中,炎癥相關細胞因子的級聯激活和釋放是重要的特征,也是引起局部關節腫痛的重要原因[6]。PGE2是由COX-2催化花生四烯酸所生產的一種疼痛刺激因子,不僅參與炎癥反應的級聯激活,還能在局部組織發揮致痛活性,加重組織疼痛,并通過增加毛細血管的通透性,加重炎癥反應引起的滲出、水腫[7]。TNF-α是在炎癥反應活化過程中最先發生改變的促炎細胞因子,可通過眾多環節誘發或加重痛風性關節炎的病理過程,并參與痛風性關節炎慢性期骨質破壞的發生[8]。IL-6和 IL-8是在炎癥反應過程中具有趨化因子作用的細胞因子。IL-6既可直接導致炎癥,也可通過促進其他炎癥介質的釋放間接導致炎癥,并對中性粒細胞具有趨化激活作用[9];IL-8則通過趨化與激活中性粒細胞使血管擴張,導致血管增生并引發炎癥反應[10]。IL-1則能夠通過促進單核巨噬細胞、淋巴細胞的活化,并分泌上述促炎因子及趨化因子[11]。

痛風之名,首見于金元時期,根據其臨床表現,可將其歸屬于中醫“痹病”范疇,傳統蒙醫學則稱痛風為“托列”。《四部醫典》[12]中記載“托列,以飲食不節、嗜食膏粱厚昧、肥甘酒酪、晝寢不動或強力勞作等使腳拇趾和肘關節發病……”,是以“赫依”“奇素”發生邪變而侵入骨、關節,與黃水相混合使關節出現晨僵、疼痛、腫脹、屈伸不利、活動受限、畸形等癥狀為主的全身性、慢性疾病[13]。該病起初表現為局部疼痛,后陳舊而遍布全身。蒙醫治療本著燥黃水、清惡血、通氣血的原則,以內外合治為主。

蒙藥消腫九味散(利畢巴拉朱爾)又名九味達蘭圖茹散、九味哈布德仁散等,由九味傳統中(蒙)藥粉碎研末而成,是常用的外用蒙成藥,臨床可用于急性腮腺炎、乳腺炎、軟組織損傷、癤腫、癰腫、急性淋巴管炎、淋巴結炎、紅腫熱痛、皮下及深部膿腫、無名腫痛、關節疼痛等,療效確切[14]。方中京大戟作為主要用藥,具有殺“黏”、止腐、消腫的功效;再配以大黃、亞大黃以療傷止痛;加入黃精、天門冬、水菖蒲、草烏主要是起到增加燥“協日烏素”(黃水)的功效,此外水菖蒲和草烏有輔助京大戟殺“黏”和止痛的作用;翻白草具有清熱解毒之功,亦能消腫;姜黃可以殺“黏”、療傷、祛腐;諸藥協同起效,具有祛腐、消腫、治傷、燥“協日烏素”(黃水)等作用?，F代藥理學研究證實,京大戟中含有乙酸乙酯成分,具備良好的抗炎作用[15];大黃中所含的大黃素可抑制嘌呤氧化酶的活性,可促進尿酸排出,進而降低血尿酸含量[16];姜黃當中的主要成分姜黃素具有殺菌消炎作用[17];水菖蒲中大量含有的水菖蒲皂苷可以抑制IL-8、IL-6等促炎細胞因子的產生[18];天門冬當中的多糖成分具有提升巨噬細胞功能和清除自由基的作用[19]。以上研究結論說明蒙藥消腫九味散藥物組成具有降低尿酸和抑制炎癥反應等作用。

本實驗以臨床常用的云南白藥噴劑、扶他林乳膠劑作為對照藥物,結果顯示各用藥組大鼠血清尿酸、PGE2、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平均明顯降低,其中扶他林乳膠劑組血清尿酸水平降低更明顯,云南白藥噴劑組和蒙藥消腫九味散組血清尿酸水平比較差異無統計學意義;扶他林乳膠劑降低血清IL-1、IL-8、TNF-α水平的作用明顯優于蒙藥消腫九味散,降低血清IL-6水平的作用二者相似;蒙藥外用劑消腫九味散降低血清IL-1水平的作用與云南白藥噴劑基本相同,降低血清IL-8水平的作用優于云南白藥噴劑,但降低血清IL-6、TNF-α水平的作用不如云南白藥噴劑;各用藥組大鼠滑膜炎癥表現均有不同程度改善,以蒙藥消腫九味散組改善最為明顯。表明蒙藥消腫九味散能有效降低血清尿酸水平,減輕炎癥損傷,作用可能與下調炎癥因子水平,抑制炎癥反應有關。本研究為蒙藥消腫九味散治療痛風性關節炎提供了一定理論依據,期待在未來能夠針對蒙醫外用劑從多角度、多靶點更深入地去研究其有效性以及安全性,以更好地促進民族醫藥的應用與推廣,為蒙醫藥治療疑難病賦予新內涵。

利益沖突:所有作者均聲明不存在利益沖突。