膠體金法及酶聯免疫法應用于艾滋病抗體檢測的價值分析

崔一峰

海安市疾病預防控制中心微生物檢驗科，江蘇南通 226600

艾滋病為臨床中常見的傳染性疾病之一，人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）在進入人體后會攻擊機體免疫系統，進而引發安全問題。HIV通過攻擊CD4+T淋巴細胞，來逐步擊潰機體的免疫屏障，破壞機體免疫力[1]。當前臨床上針對該病尚無特異性治療方法，為避免疾病進一步進展，需強化對疑似感染HIV人員的預防與檢測。艾滋病的潛伏時間較長，一般可達到8～9年[2]。在這期間病毒可能會傳播給其他人，誘發更大的傷害。因此，有必要對疑似艾滋病患者早期篩查。酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA）和膠體金法均適用于對艾滋病抗體的早期篩查。但兩類檢測方式原理不同，故檢測結果可能存在差異。本研究選取2018年6月—2023年6月海安市疾病預防控制中心復檢HIV抗體檢測的90份樣本作為研究對象，驗證膠體金法及ELISA法檢測與蛋白印跡法（Western Blot, WB）檢測（金標準）的結果差異，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本中心復檢HIV抗體檢測的90份樣本作為研究對象，均應用膠體金法及酶聯免疫吸附法檢測。

1.2 納入與排除標準

納入標準：受檢人員均同時進行了膠體金法及ELISA兩種檢測方式；均對本研究知情，并簽署同意書。

排除標準：伴發精神障礙疾患者；伴發免疫系統疾病者；抵觸本研究者。

1.3 方法

ELISA檢測：所有受試者均是采集外周靜脈血，進行離心處理。離心速率為3 500 r/min。離心時間為10 min。取血清適量，放置在室溫條件下待檢。取ELISA試劑盒檢測。檢測時分別設置陰性、陽性、空白對照組。①加入樣本：向試劑盒中加入樣品100 μl；②樣本的第一次孵育：在37℃條件下孵育60 min，然后洗板拍干；③樣本的第二次孵育：再加入100 μl酶孵育30 min，再進行洗板拍干操作；④向樣本中加入顯色劑：分別向其中加入顯色劑A、B各50 μl，混勻后封板；⑤加入終止液：將其放置在37℃環境下，避光保存30 min，向其中加入終止液。檢測波長450 nm（參考波長620 nm）。

膠體金法檢測：取血液樣本，將其放置于室溫下。向其中垂直加入待測樣本（25 μL左右）到試劑卡加樣孔中。在15～20 min內判讀結果。最終檢測結果顯示檢測區與對照區均有紅色條帶為陽性。

1.4 觀察指標

①以WB檢測作為金標準，分析ELISA法、膠體金法的陽性檢出率、陰性檢出率。

②對比ELISA法、膠體金法的診斷效能，包括靈敏度、特異度、準確率。靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%；特異度=真陰性例數/（假陽性例數+真陰性例數）×100%；準確率=（真陽性例數+真陰性例數）/總例數×100%。

1.5 統計方法

采用SPSS 26.0統計學軟件進行數據分析，檢出結果、診斷效能為計數資料，以例數（n）和率（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ELISA法、膠體金法的診斷結果

膠體金法檢出陽性72例，陰性18例；ELISA法檢出陽性76例，陰性14例。見表1。

表1 ELISA法、膠體金法的診斷結果（n）

2.2 ELISA法、膠體金法的診斷效能比較

膠體金法檢測靈敏度93.33%、特異度86.67%、準確率92.22%；ELISA法檢測靈敏度100.00%、特異度93.33%、準確率98.89%。ELISA法檢測靈敏度及準確率均優于膠體金法，差異有統計學意義（P均＜0.05）。見表2。

表2 ELISA法、膠體金法的診斷效能比較（%）

3 討論

誘發艾滋病的病因與患者感染HIV病毒有關?；颊咴诩膊「腥厩捌诎Y狀與常人無異。在未接受檢查時，病癥很難被發現，在高危性行為下很容易傳播給他人?；颊咴诎l病后，機體免疫力逐步下降[3]。機體免疫力降低，使得患者較易感染其他疾病，在疾病終末期，患者多是因感染性疾病而死亡。現階段艾滋病已經被列入乙類法定傳染病中。雖然臨床上針對該病治療推出了多種藥物，但尚無特異性治療藥物。通過早期確診疾病，可控制患者病情進展。ELISA法、膠體金法及WB檢測法均可對該病早期檢測，其中WB檢測法為金標準檢測方式[4]。本研究顯示，膠體金法檢測靈敏度93.33%、特異度86.67%、準確率92.22%；ELISA法檢測靈敏度100.00%、特異度93.33%、準確率98.89%。ELISA法檢測的靈敏度及準確率均優于膠體金法（P均＜0.05），說明兩類檢測方式均對艾滋病有著較高的檢出率。究其原因，膠體金法主要是氯金酸在還原劑的作用下逐步形成顆粒，并在靜電作用下形成穩定狀態的一種檢測模式。膠體金屬于免疫標記物之一，能夠標記艾滋病抗體，利于臨床診斷開展。這類檢測方式不僅診斷靈敏性較高，同時患者在檢測過程中，無需應用特殊的設備和試劑，操作簡單，只需利用試劑盒及檢測儀器就可完成檢查，一般實驗室采用直接觀察判斷結果[5]。這類檢測方式應用的不足之處在于檢測時間短，可能會出現產物之間反應不充分的情況發生，導致漏診和誤診。

本研究應用的另一類檢測方式ELISA法在臨床中應用時間較長，檢測原理是讓抗體結合到固相載體表面。最終保證抗原的活性，借助酶標記物進行檢測的一種方式。若是抗體多，反應程度劇烈，則反應孔顯示顏色會更深[6]。通過酶標分析儀檢測，對抗體量進行細化分析。ELISA檢測方式酶催化效果可觀，應用檢測準確率高。從整體上看，兩類檢測方式診斷準確度均＞90%，但仍存在一定誤診及漏診。為進一步使檢測結果提升，可將兩類檢測方式聯合。ELISA檢測方式相較于膠體金測定方式的優勢在于：操作時借助洗滌方式，促進其他成分與免疫復合物分離，受檢物質量占比增加，利于檢測準確度提升[7]；可將其作為定性檢測的一種方式；檢測原理可保持高酶活性及免疫活性，其是利用抗體固相載體表面結合原理開展的，在操作時，操作手法及試劑對檢測結果產生的影響小[8]。

付福玲[9]對90例疑似艾滋病患者血液中的HIV水平進行了檢測，結果顯示，WB檢出50例，艾滋病確診率55.56%；膠體金法檢出46例，確診率為51.11%，ELISA法檢出47例，確診率為52.22%。以WB為標準，膠體金法符合率92.00%，ELISA法符合率94.00%?？梢?，ELISA法和膠體金法在HIV抗體檢測方面一致性佳。這一結果說明在艾滋病抗體檢測中，應用ELISA法檢測，能夠最大限度明確患者疾病的一般狀況。

本研究結果顯示，ELISA法檢測血清用量較膠體金法高，檢測用時較膠體金法更長（P＜0.05）。分析原因，主要是由于ELISA法檢測對儀器設備要求高，檢測過程中需要在顯色反應后，借助酶標儀檢測溶液吸光光度值，這是其檢測時間長的原因之一[9]。而膠體金檢測方式則較為簡化，但是操作不當，很可能出現誤檢情況[10]。這一特性使得膠體金檢測法適用于艾滋病的大面積篩查。為保證檢測結果的科學性，提示在膠體金檢測時，需預防室溫過低，需在20～28℃完成各項操作，所獲結果相對穩定[11]；ELISA檢測時，嚴格按照操作參數檢測，檢測時樣本穩定，保證其中氣泡被剔除[12]。

綜上所述，在HIV診斷中，應用ELISA及膠體金法均有較高的診斷效能，但膠體金檢測血清用量較少、實驗條件及操作要求不高等，利于快速檢測早期篩查艾滋病人，適合基層不具備條件申請篩查實驗室的檢測點應用。