富硒葛根粉中葛根素含量的測定方法

摘 要：目的：采用HPLC和LC-MS相結合的方法，建立了富硒葛根粉中葛根素含量的測定方法。方法：樣品經70%乙醇提取，利用島津Inertsil ODS-SP C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）分離，以甲醇-0.3%磷酸（20∶80）為流動相，測定富硒葛根粉中葛根素含量。結果：在0.1～1.3 μg·mL-1，葛根素的線性關系良好，平均加標回收率為97.39%，RSD為1.08%。結論：HPLC法簡便、快速，重復性好，可作為富硒葛根粉中葛根素含量的測定方法。

關鍵詞：富硒葛根粉；葛根素；含量測定

Method for Determination of Puerarin Content in Selenium-Enriched Pueraria Powder

LONG Zexia， YANG Fang*

（Changde City Food Inspection Institute， Changde 415000， China）

Abstract： Objective： To establish a method for the determination of puerarin in selenium-enriched pueraria powder by HPLC and LC-MS. Method： The samples were extracted by 70% ethanol and the content of puerarin in selene-enriched pueraria powder was determined by using Shimadzu Inertsil ODS-SPC18 column （250 mm×4.6 mm， 5 μm） with methanol-0.3% phosphoric acid （20∶80） as mobile phase. Result： In the range of 0.1～1.3 μg·mL-1， the linear relationship of puerarin was good， the average recovery rate was 97.39%， RSD was 1.08%. Conclusion： HPLC is a simple， rapid and reproducible method for the determination of puerarin in selenium-enriched pueraria powder.

Keywords： selenium-enriched pueraria powder; puerarin; content determination

富硒葛根粉是由富硒葛根加工而成的一種預包裝食品。葛根為豆科植物野葛的根。葛根具有較高的淀粉含量，富含黃酮、葛根素、三萜等多種活性成分。研究發現，富硒葛根粉中葛根素、異黃酮、皂苷等成分豐富。目前，國內外尚無統一的檢測富硒葛根粉中葛根素的國家標準及地方標準。為了更好地控制葛根素的質量，保證產品的品質，本文參照相關文獻[1-5]，通過HPLC法測定葛根素的含量，并用LC-MS對葛根素的結構進行初步鑒定，為進一步完善葛根素的質量標準奠定基礎[6-12]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 樣品

富硒葛根粉（批號：210902；批號：210519；批號：210615；批號：210703；批號：210709；批號：210810），湖南福千府生物科技有限公司。

1.1.2 試劑

葛根素標準品（批號：110715-202016，含量為94.0%），中國食品藥品檢定研究所；甲醇（色譜純）；乙醇（分析純）；磷酸（分析純）；純化水。

1.2 儀器與設備

Waters e2695 HPLC；ABQTRAP 4500超高效液相色譜-三重四極桿質譜儀；MS105天平；JP008超聲儀；渦旋振蕩器；氮吹儀。

1.3 實驗方法

1.3.1 葛根素標準溶液的配制

精密稱取10 mg葛根素標準品于25 mL容量瓶內，加入70%乙醇使其溶解，定容至刻度，搖動均勻，取1 mL到100 mL容量瓶中，加入70%乙醇使其定容至刻度，搖動均勻，制得0.004 mg·mL-1的葛根素標準溶液。

1.3.2 樣品前處理

將樣品研磨成粉末并稱取5 g（精確至0.000 1 g），放入具塞錐形瓶中，精密加入50 mL 70%乙醇，密塞，稱定重量，超聲波30 min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密吸取續濾液1 mL，置于100 mL容量瓶內，用70%的乙醇將其溶解，稀釋到刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，上機測定。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：島津Inertsil ODS-SP C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.3%磷酸（20∶80）；柱溫：30 ℃；檢測器：2489紫外檢測器；檢測波長：250 nm；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：10 μL。

1.3.4 質譜條件

采用正、負離子檢測模式；電噴霧離子化（ESI）；多反應監測模式SCAN；碰撞能量：2.5 V；霧化氣流速：3 L·min-1；干燥氣流速：10 L·min-1；加熱氣流速：10 L·min-1；加熱氣溫度：450 ℃；接口溫度：300 ℃；去溶劑溫度：250 ℃。

2 結果與分析

2.1 測定條件的優化

①試驗考察不同流動相（0.1%磷酸-甲醇、0.2%磷酸-甲醇、0.3%磷酸-甲醇）對化合物分離效果的影響。結果表明，0.1%磷酸-甲醇作為流動相時，化合物的分離效果和峰形最好。②試驗考察了不同色譜柱[Hypersil BDS C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）、Agilent ZORBAX SB-C18（200 mm× 4.6 mm，5 μm）、島津Inertsil ODS-SP C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）]對化合物分離效果和峰形的影響[13]。結果表明，島津Inertsil ODS-SP C18色譜柱的響應比其他色譜柱好，且分離效果最優，化合物的峰形尖銳，能夠達到分離目的。葛根素標準溶液以及實際樣品的高效液相色譜圖見圖1。

2.2 標準曲線及最低檢出限

配制葛根素質量濃度為0.1～1.3 μg·mL-1的系列標準溶液，以標準溶液的峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，建立回歸方程。結果表明，葛根素標準品的回歸方程為Y=276 135.6X-6 860.0，r=0.999 8。葛根素在相應的濃度范圍內線性關系良好，檢出限為0.01 μg·mL-1。

2.3 精密度試驗

精密吸取供試品溶液10 μL，注入HPLC儀，重復進樣6次，分別計算色譜圖中的葛根素峰面積的RSD值，試驗重復6次。結果表明，RSD值為1.22%，儀器的精密度較好。

2.4 穩定性試驗

取同一樣品溶液，分別按照1.3.3的色譜條件進行操作；24 h內每隔2 h測定其峰面積。結果表明，葛根素的峰面積分別為113 851、113 673、111 180、112 099、111 649和112 790，相對標準偏差為0.97%（n=6）。

2.5 重現性試驗

利用1.3.3的色譜條件分別對6批富硒葛根粉進行測定，計算葛根素的含量。結果表明，方法的相對標準偏差為0.90%，說明該方法具有良好的

重現性。

2.6 加標回收率試驗

精密稱取已知含量的富硒葛根粉2.5 g（精確至0.000 1 g），精密加入一定量葛根素對照品溶液，放入具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲30 min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液1 mL，置于100 mL容量瓶內；用70%乙醇將其溶解，稀釋到刻度，按照1.3.3的色譜條件，計算平均加標回收率，結果見表1。

2.7 富硒葛根粉含量測定

采用1.3.3色譜條件對6批次的富硒葛根粉含量進行測定。根據測得的峰面積和標準溶液的濃度計算葛根素的含量。結果表明，葛根素含量分別為0.46 mg·kg-1、0.48 mg·kg-1、0.45 mg·kg-1、0.42 mg·kg-1和0.41 mg·kg-1。

3 結論

本文建立了高效液相色譜法測定富硒葛根粉中葛根素的方法。該方法的線性關系和精密度良好，簡便，結果準確，重現性好，適用于富硒葛根粉中葛根素的含量測定，能夠滿足葛根素含量測定的需要。

參考文獻

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基金項目：2023年度湖南省市場監督管理局科技計劃項目“葛根粉檢測技術及質量評價研究”。

作者簡介：龍澤霞（1985—），女，湖南常德人，本科，工程師。研究方向：食品、藥品等質量檢驗。

通信作者：楊芳（1976—），女，湖南常德人，本科，高級工程師。研究方向：食品、藥品等的質量檢驗。E-mail：82482947@qq.com。