植物油中苯并[α]芘能力驗證樣品的制備與評價

摘 要：通過制備植物油中苯并[α]芘能力驗證樣品，并對其均勻性和穩定性進行評價，為實驗室制作盲樣和組織能力驗證提供技術指導。以食用植物油為原料，制備2組不同濃度的苯并[α]芘能力驗證樣品，每組隨機抽取10份樣品按照GB 5009.27—2016方法測定樣品中苯并[α]芘含量；將考核樣品放置在常溫環境條件下儲存3個月，采用上述方法測定儲存前后樣品中苯并[α]芘含量，以評價樣品的均勻性和穩定性。測定結果表明，樣品的均勻性合格，樣品在3個月內穩定性良好，可用于不同實驗室檢測植物油中苯并[α]芘能力驗證。

關鍵詞：苯并[α]芘；均勻性；穩定性；能力驗證

Preparation and Evaluation of Proficiency Testing Sample of Benzo[α]pyrene in Plant Oil

CHENG Xiaoqing， PAN Tao， HUANG Zhan， XIE Kun*

（Sichuan Light Industry Research and Design Institute Co.， Ltd.， Chengdu 610084， China）

Abstract： The proficiency testing samples of benzo[α]pyrene in plant oils were prepared and evaluated for homogeneity and stability to provide technical guidance for laboratories to make blind samples and organize proficiency testing. Using edible plant oil as raw material， 2 groups of benzo[α]pyrene proficiency testing samples with different concentrations were prepared， and 10 randomly selected samples from each group were used to determine the benzo[α]pyrene content in the samples in accordance with the method of GB 5009.27—2016; the assessment samples were placed in ambient ambient conditions and stored for 3 months， and the samples before and after the storage were determined by the above method， to evaluate the homogeneity and stability of the samples. The results showed that the homogeneity of the sample was qualified and the stability of the sample was good within 3 months， which can be used for the proficiency testing of benzo[α]pyrene in plant oils in different laboratories.

Keywords： benzo[α]pyrene; uniformity; stability; proficiency testing

苯并[α]芘是一種常見的高活性間接致癌物，循環使用溫度較高的植物油或者采用高溫烹炸食物等都可能產生苯并[α]芘，對人體健康有很大威脅。《食品安全國家標準 食品中污染物限量》（GB 2762—2022）規定采用GB 5009.27—2016對食品中苯并[α]芘的含量進行測定，食用油脂及其制品中苯并[α]芘的最大限量為10 μg·kg-1[1]。

通過開展植物油中苯并[α]芘測定能力驗證，對實驗室檢測食品中苯并[α]芘含量的技術能力進行評估，可幫助實驗室了解實驗室檢測人員的技術能力和實驗室管理水平，發現日常檢測中可能存在的問題，提高檢測工作質量。而能力驗證樣品的均勻性和穩定性是準確評價檢測機構的技術水平的物質基礎[2]，也是檢測機構評價和挑選能力驗證項目的重要依據[3]。因此，組織能力驗證的關鍵是能力驗證樣品的制備和對所制備的能力驗證樣品的均勻性和穩定性的驗證[4]。

目前較少見到關于苯并[α]芘能力驗證樣品制備的相關資料。本文通過制備植物油中苯并[α]芘能力驗證樣品，并對樣品的均勻性和穩定性進行測試，為食品檢測實驗室制備苯并[α]芘質控樣和組織開展能力驗證提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

市購食用植物油，規格5 kg/桶。

甲苯（C7H8）、乙腈（CH3CN）、正己烷（C6H14）、二氯甲烷（CH2Cl2），均為色譜純，賽孚瑞化工邯鄲有限公司；苯并[α]芘標準品（C20H12，CAS號50-32-8），含量99.80%，標準物質證書號71100，北京壇墨質檢科技有限公司；苯并[α]芘檢測專用小柱（分子印跡柱），深圳逗點生物科技有限公司。

1.2 儀器與設備

LC-20A高效液相色譜儀，日本島津；BSA223S、BT125D電子天平（感量分別為0.01 mg和1 mg），賽多利斯；LC-SPE-24+固相萃取儀，上海力辰邦西儀器科技有限公司；N1-50氮吹濃縮儀，上海屹堯儀器科技發展有限公司。

1.3 樣品制備

（1）濃度選擇。從檢測技術和考核關鍵點角度考慮，本次實驗計劃制備2組不同濃度的樣品，低濃度組樣品的濃度設計為檢測方法GB 5009.27—2016[5]的3倍定量限左右，高濃度組樣品參考GB 2762—2022[1]中油脂及其制品的限量值要求，濃度設計在10 μg·kg-1左右。

（2）制備方法。將食用植物油分裝為2桶，每桶為2 L，分別加入1 mg·mL-1的苯并[α]芘標準溶液直至樣品分別達到設計濃度，手動振蕩3次，每次10 min，然后放置于室溫條件下磁力攪拌。48 h后采用棕色玻璃樣品瓶進行定量分裝（每瓶約25 g），在分裝的過程中一直保持攪拌。為保證樣品的均勻性，每個濃度水平樣品均由能力驗證工作小組成員在實驗室（環境控制：溫度20～25 ℃、相對濕度≤60%RH）進行制備和定量分裝，放入玻璃樣品瓶中密封，制備成能力驗證樣品。分裝后的樣品，粘貼唯一性編號，并做好記錄。樣品編號為“23-QXXX”“23-GXXX”，字母“Q”“G”不用于區分兩組樣品，每個樣品標識的“XXX”為3個隨機數字，每個樣品的標識均具有唯一性。樣品組別僅可通過樣品分配表判斷，實驗室無法從樣品編號獲得樣品組別信息。

1.4 實驗方法

1.4.1 苯并[α]芘檢測

樣品中苯并[α]芘含量依據《食品安全國家標準食品中苯并（a）芘的測定》（GB 5009.27—2016）[5]采用高效液相色譜法測定。儀器條件：熒光檢測器激發波長為384 nm，發射波長為406 nm；色譜柱為Shim-pack GIST C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱箱溫度為40 ℃；柱流速為1.0 mL·min-1；流動相為乙腈+水（9+1）。

稱取0.4 g（精確到0.001 g）試樣，加入5 mL正己烷，渦旋混合0.5 min，待凈化。采用苯并[α]芘分子印跡柱，依次用5 mL二氯甲烷及5 mL正己烷活化柱子。將待凈化液轉移進柱子，待液面降至柱床時，用6 mL正己烷淋洗柱子，棄去流出液。用6 mL二氯甲烷洗脫并收集凈化液到試管中。將凈化液在40 ℃下氮氣吹干，準確吸取0.4 mL乙腈渦旋復溶0.5 min，過微孔濾膜后供液相色譜測定。分別加0.02 mL濃度為100 ng·mL-1標準使用液到2組樣品中，然后按上述方法進行實驗，以測定樣品加標回收率。同時做空白試驗。

1.4.2 樣品均勻性檢驗

從制備好的2組不同濃度水平樣品中各隨機抽取10份樣品用于均勻性檢驗，每個樣品重復測定2次。在短時間內由同一測試人員使用GB 5009.27—2016的測試方法，在相同測試條件下對樣品的苯并[α]芘含量進行檢測。

依據《能力驗證樣品均勻性和穩定性評價指南》（CNAS—GL003：2018）[6]，采用單因子方差統計分析法，通過F檢驗對2組樣品的濃度水平進行均勻性檢驗。若F＜自由度為（f1， f2）及給定顯著性水平α（通常為0.05）的臨界值，則表明樣品內和樣品間無顯著性差異，樣品是均勻的。

1.4.3 樣品穩定性檢驗

由于苯并[α]芘為較穩定化合物，且實驗期間為高溫天氣，因此將樣品在室溫條件下存放3個月后測試其含量變化來驗證長期貯存條件下樣品的穩定性。從兩組樣品中各取3瓶樣品放置于室溫條件下3個月后對樣品進行檢測，每個樣品在重復性條件下檢測2次，驗證樣品的長期儲存穩定性。

檢測結果采用t檢驗法進行統計處理。以均勻性試驗所得結果為參比數據，采用t檢驗方法進行穩定性檢驗。當t值小于顯著性水平α（0.05）自由度為n1+n2-2的臨界值，則表明2個平均值之間無顯著性差異，即制備樣品穩定。

2 結果與分析

2.1 質控結果

苯并[α]芘標準色譜圖見圖1，2組質控樣品的加標回收率分別為85%和87%。

2.2 均勻性檢驗

由表1和表2可知，對2組共20個樣品的40個檢測結果進行統計計算，樣品1的F值為2.96，樣品2的F值為1.13。根據自由度及給定顯著性水平α（通常α=0.05），從F表查詢得到臨界值為3.02，2組樣品的F值均＜3.02，說明2組樣品的組內和組間不存在顯著性差異，樣品的均勻性符合能力驗證的要求。

2.3 穩定性檢驗

如表3所示，將室溫存儲3個月后的2組各3個樣品的檢測結果與3個月前的檢測結果進行比較，計算得t值分別為1.319和1.444。當顯著性水平α=0.05，自由度為（n1+n2-2）時，查表得t臨界值為2.063 9，2組樣品的t值均＜2.063 9。穩定性測試結果表明，樣品存放3個月后測得的結果與3個月前的檢測結果之間不存在顯著性差異，樣品的穩定性符合要求。

3 結論

本研究制備了2組不同濃度的食用油苯并[α]芘能力驗證樣品，均勻性和穩定性檢驗顯示，2組樣品的均勻性和穩定性均滿足能力驗證要求，可為各個實驗室制作盲樣考核和能力驗證樣品提供數據參考。

參考文獻

[1]國家衛生健康委員會，國家市場監督管理總局.食品安全國家標準 食品中污染物限量：GB 2762—2022[S].北京：中國標準出版社，2022.

[2]劉梅，尹相余.淺談能力驗證的選擇及結果應用[J].中國檢驗檢測，2021，29（2）：98-100.

[3]中國合格評定國家認可委員會.能力驗證的選擇核查與利用指南：CNAS—GL032：2018[EB/OL].（2020-09-08）[2024-01-08].https：//www.cnas.org.cn/rkgf/sysrk/rkzn/2018/03/889154.shtml.

[4]梁暉，何明輝.能力驗證試驗樣品的制備[J].科技傳播，2016，8（4）：121.

[5]國家衛生和計劃生育委員會，國家食品藥品監督管理總局.食品安全國家標準 食品中苯并（a）芘的測定：

GB 5009.27—2016[S].北京：中國標準出版社，2016.

[6]中國合格評定國家認可委員會.能力驗證樣品均勻性和穩定性評價指南：CNAS—GL003：2018[EB/OL].（2020-09-08）[2024-01-08].https：//www.cnas.org.cn/rkgf/sysrk/rkzn/2018/03/889121.shtml.

作者簡介：成曉情（1981—），女，湖北天門人，碩士，工程師。研究方向：食品質量安全及檢測技術。

通信作者：謝坤（1989—），男，四川成都人，碩士，工程師。研究方向：食品質量安全及檢測技術。E-mai1：xiekun@sclii.com。