DEK、Wnt-1、GSK-3β在宮頸鱗狀細胞癌中的表達和意義

基金項目：濰坊市衛生健康委科研項目（編號：WFWSJK-2022-091）

作者簡介：曹江（1980.7-），男，山東濰坊人，本科，副主任醫師，主要從事研究宮頸癌的發病機制研究

通訊作者：楊麥青（1979.11-），女，山東濰坊人，博士，主治醫師，主要從事腫瘤臨床及基礎相關疾病的研究

摘要：目的" 觀察宮頸鱗狀細胞癌組織中DEK、Wnt-1、GSK-3β的表達變化，探討DEK、Wnt-1、GSK-3β在宮頸鱗狀細胞癌中的臨床病理意義。方法" 選取2016年1月-2021年12月于濰坊市中醫院確診宮頸鱗狀細胞癌的患者100例，并選取癌旁周圍的鱗狀上皮組織當作對照。采用免疫組織化學方法觀察組織中DEK、Wnt-1、GSK-3β蛋白的表達，并探討DEK、Wnt-1、GSK-3β與臨床病理參數的關系，以及DEK與Wnt-1、GSK-3β的相關性。結果" 與正常宮頸鱗狀上皮組織比較，DEK、Wnt-1在宮頸鱗狀細胞癌組織中高表達，GSK-3β低表達；DEK、Wnt-1高表達及GSK-3β低表達與腫瘤的低分化、淋巴結轉移、高TNM分期有關（P＜0.05）。Pearson相關性分析顯示，宮頸鱗狀細胞癌組織中DEK與Wnt-1呈正相關（r＝0.304，P＝0.001），與GSK-3β呈負相關（r＝-0.289，P＝0.002）。結論" "宮頸鱗狀細胞癌組織中DEK、Wnt-1表達升高，而GSK-3β表達降低，且DEK與Wnt-1、GSK-3β密切相關，其表達異常參與了宮頸鱗狀細胞癌的發生、發展。

關鍵詞：宮頸鱗狀細胞癌；DEK；Wnt-1；GSK-3β

中圖分類號：R737.33" " " " " " " " " " " " " " " " "文獻標識碼：A" " " " " " " " " " " " " " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.03.022

文章編號：1006-1959（2024）03-0114-04

Expression and Significance of DEK， Wnt-1， GSK-3β in Cervical Squamous Cell Carcinoma

CAO Jiang1，YANG Mai-qing2，GE Li2，QIAO Hai-yan3，GAO Li-li1，ZHANG Qing-jun1

（1.Department of Obstetrics and Gynecology，Weifang Hospital of Traditional Chinese Medicine，Weifang 261041，Shandong，China;

2.Department of Pathology，Weifang People's Hospital，Weifang 261041，Shandong，China;

3.Department of Encephalopathy，Weifang Hospital of Traditional Chinese Medicine，Weifang 261041，Shandong，China）

Abstract：Objective" To observe the expression changes of DEK， Wnt-1 and GSK-3β in cervical squamous cell carcinoma， and to explore the clinicopathological significance of DEK， Wnt-1 and GSK-3β in cervical squamous cell carcinoma.Methods" A total of 100 patients with cervical squamous cell carcinoma diagnosed in Weifang Hospital of Traditional Chinese Medicine from January 2016 to December 2021 were selected， and the squamous epithelial tissue around the cancer was selected as the control group. Immunohistochemical method was used to observe the expression of DEK， Wnt-1 and GSK-3β protein in tissues， and the relationship between DEK， Wnt-1， GSK-3β and clinicopathological parameters was explored， the correlation between DEK and Wnt-1， GSK-3β were analyzed.Results" Compared with normal cervical squamous epithelial tissues， DEK and Wnt1 were highly expressed in cervical squamous cell carcinoma tissues， and GSK-3β was lowly expressed. The high expression of DEK， Wnt-1 and the low expression of GSK-3β were related to the poor differentiation， lymph node metastasis and high TNM stage of the tumor （Plt;0.05）. Pearson correlation analysis showed that DEK was positively correlated with Wnt-1 （r=0.304， P=0.001） and negatively correlated with GSK-3β （r=-0.289， P=0.002） in cervical squamous cell carcinoma.Conclusion" The expression of DEK and Wnt-1 in cervical squamous cell carcinoma is increased， while the expression of GSK-3β is decreased. DEK is closely related to Wnt-1 and GSK-3β， and its abnormal expression is involved in the occurrence and development of cervical squamous cell carcinoma.

Key words：cervical squamous cell carcinoma;DEK;Wnt-1;GSK-3β

宮頸鱗狀細胞癌（cervical squamous cell carcinoma）是全球婦女常見的癌癥之一，發病率僅次于乳腺癌[1]。近幾年隨著生活習慣的改變，宮頸鱗狀細胞癌的發病率日趨上升，并且逐步年輕化[2，3]。雖然大多數早期的宮頸鱗狀細胞癌患者預后較好，但復發、轉移是宮頸鱗狀細胞癌治療的難點，對于晚期患者，預后較差。因此，尋求有助于早期診斷和評估預后的特異性標記物對于宮頸鱗狀細胞癌的治療和臨床指導預后意義重大。DEK位于人染色體6p22.3，蛋白的分子量是43 kD，最早于1992年在急性髓性白血病的一個亞型中以DEK-CAN的形式發現[4，5]。DEK是一種RNA結合蛋白，與炎癥、自身免疫性疾病、腫瘤等的發生發展密切相關[6，7]。研究表明[8]，DEK在腫瘤組織中明顯高表達，并且大多與腫瘤的低分化、淋巴結轉移、預后不良等惡性行為相關。Wnt信號轉導通路參與胚胎發育、細胞增殖及分化等過程，該信號通路異常活化與人類腫瘤的發生密切相關。GSK-3β參與糖原合成酶磷酸化的五種酶之一，參與調節多種細胞過程，包括細胞分裂、增殖、分化和粘附。GSK-3β的異常表達與糖尿病、癌癥、神經退行性疾病等不同慢性病的發生和發展有關。在各種疾病中，異常的GSK-3β活性與不同蛋白質的失調有關，即微管相關蛋白τ、Wnt信號通路成分、β-連環蛋白和熱休克蛋白等。本研究通過觀察宮頸鱗狀細胞癌組織中DEK、Wnt-1、GSK-3β的表達變化，探討DEK、Wnt-1、GSK-3β在宮頸鱗狀細胞癌中的臨床病理意義，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料" 選取2016年1月-2021年12月于濰坊市中醫院婦產科就診并經過病理診斷且手術治療的宮頸鱗狀細胞癌患者100例，50例癌旁的正常宮頸鱗狀上皮組織（距離腫瘤≥5 cm），術前均未經放、化療，臨床和病理資料保存相對完整。患者年齡31～74歲，中位年齡48歲；年齡≥50歲者46例，＜50歲者54例；根據WHO分類，高分化者31例，中、低分化者69例；根據國際抗癌聯盟第八版TNM分期，Ⅰ期64例，Ⅱ～Ⅲ期36例；伴有淋巴結轉移41例，無淋巴結轉移59例；按腫瘤大小分組，＞4 cm 22例，≤4 cm 78例。研究對象均知情并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1標本采集" 手術切除標本，經10%中性福爾馬林固定12 h，取材后經梯度酒精、二甲苯脫水、透明，石蠟包埋、常規切片，HE染色，光鏡觀察。經2名病理醫師做出診斷。

1.2.2免疫組織化學染色" DEK、Wnt-1、GSK-3β兔抗人單克隆抗體（工作液濃度1∶100），購買自武漢三鷹生物科技有限公司。3～4 μm切片，免疫組織化學方法使用SP法，具體操作步驟包括：80°烤箱烤片，然后經二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水；高壓鍋檸檬酸修復，常溫羊血清孵育；常溫滴加一抗（DEK、Wnt-1、GSK-3β）；滴加生物素標記的二抗抗體；加鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶；經DAB顯色液顯色。所有切片均采取相同的實驗方法和步驟。

1.3結果判讀" 根據美國臨床腫瘤學會ASCO分級分別對DEK、Wnt-1、GSK-3β的染色結果進行判讀。染色陽性的細胞所占百分比＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%，分別計分0、1、2、3、4分。細胞著色的強度標記-、+、++、+++，分別計分0、1、2、3分。將染色陽性的細胞百分比分數和細胞著色強度的分數相乘，＜6分作為低表達組，≥6分作為高表達組。

1.4觀察指標" 分析宮頸鱗狀細胞癌組織中DEK、Wnt-1、GSK-3β表達與常用臨床病理參數的關系，并進一步分析DEK與Wnt-1、GSK-3β的關系。

1.5統計學方法" 采用統計分析軟件SPSS 20.0對數據進行處理。計量資料以中位數表述，計數資料以（n）表示，采用？字2檢驗；使用Pearson相關性分析DEK與Wnt-1、GSK-3β的關系，以P＜0.05說明差異有統計學意義。

2結果

2.1 DEK、Wnt-1、GSK-3β在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達及與臨床病理參數的關系" 與正常宮頸鱗狀上皮組織比較，DEK、Wnt1在宮頸鱗狀細胞癌組織中高表達，GSK-3β低表達；DEK、Wnt-1高表達及GSK-3β低表達與腫瘤的低分化、淋巴結轉移、高TNM分期有關（P＜0.05），而與患者年齡、腫瘤大小無關（P＞0.05），見表1。

2.2 DEK與Wnt-1、GSK-3β的相關性分析" DEK表達與Wnt-1表達呈正相關（r＝0.304，P＝0.001）；DEK表達與GSK-3β表達呈負相關（r＝-0.289，P＝0.002），見圖1。

3討論

宮頸鱗狀細胞癌是女性常見的惡性腫瘤，宮頸鱗狀細胞癌是其主要的類型。近年來，我國宮頸鱗狀細胞癌發病呈上升趨勢。隨著國家對兩癌普查的開展，宮頸鱗狀細胞癌的早期診斷和早期治療有了很大的改善，但仍有一部分患者在發現時就處于中晚期[2，3]。因此，尋找新的治療靶標是宮頸鱗狀細胞癌治療中的重要環節。

本研究首先分析了DEK蛋白在宮頸鱗狀細胞癌組織及正常宮頸鱗狀上皮的表達差異，結果表明DEK在宮頸鱗狀細胞癌組織中高于正常宮頸鱗狀上皮，并且DEK在宮頸鱗狀細胞癌的表達與淋巴結轉移、TNM分期及分化程度有關，說明DEK參與了宮頸鱗狀細胞癌的發生發展。以往報道指出[9-12]，DEK在非小細胞肺癌、乳腺癌、胃癌中出現高表達，并且與腫瘤的高侵襲性行為相關，促進癌細胞的增殖、及侵襲、轉移。本研究結果與前述報道一致，說明DEK會影響癌細胞的侵襲、轉移，參與宮頸鱗狀細胞癌的發生發展。

Wnt-1糖蛋白是Wnt/β-連環蛋白途徑的分泌配體。它與細胞的跨膜卷曲（FZD）受體結合，激活Wnt/β-連環蛋白途徑，導致β-連環蛋白的細胞質積聚和核易位[13，14]。Wnt/β-連環蛋白途徑的激活通過GSK3β/APC/Axin破壞復合物阻止該途徑的主要因素β-連環蛋白的磷酸化和降解，并增加胞漿和核β-連環蛋白的積累。積累在細胞核中的β-連環蛋白與T細胞因子/淋巴增強因子（TCF/LEF）轉錄因子形成復合物，從而激活一系列調節基本細胞功能的基因，包括增殖、凋亡、分化和遷移[13，14]。有研究指出[15-17]，Wnt-1在乳腺癌、卵巢癌中表達異常，影響癌癥的進展。另有研究發現[18-20]，Wnt-1在前列腺癌、乳腺癌、結直腸癌中異常增多。本研究結果發現，Wnt-1在宮頸鱗狀細胞癌組織中高于正常宮頸鱗狀上皮，并且Wnt-1在宮頸鱗狀細胞癌的表達與淋巴結轉移、TNM分期及分化程度有關，說明Wnt-1具有促進癌細胞的增殖、侵襲能力。

GSK3β/APC/AxinMMPs是Wnt/β-連環蛋白途徑激活的重要復合物[16]。并且研究指出[21-24]，GSK3β的異常表達與胃癌、肝細胞癌、卵巢癌的發展有關。本研究結果發現，GSK3β在宮頸鱗狀細胞癌組織中低于正常宮頸鱗狀上皮，并且GSK3β在宮頸鱗狀細胞癌的表達與淋巴結轉移、TNM分期及分化程度有關，說明GSK3β的異常影響了Wnt-1信號通路的活性，調節細胞的增殖、侵襲能力，參與了宮頸鱗狀細胞癌的發生發展。

本研究進一步分析了DEK與Wnt-1、GSK3β的關系，結果表明DEK表達與Wnt-1表達呈正相關，與GSK3β表達呈負相關，說明DEK對宮頸鱗狀細胞癌的影響與Wnt-1、GSK3β有關。DEK與Wnt-1的作用是協同的，與GSK3β的作用是相反的。但是它們三者的具體關系及作用機制還需進一步去探討。

綜上所述，DEK與Wnt-1在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達升高，而GSK3β表達降低，且DEK與Wnt-1、GSK3β密切相關。DEK對宮頸鱗狀細胞癌的影響與Wnt通路有一定的關聯，這為以后研究宮頸鱗狀細胞癌的發病機制、指導治療等提供研究方向。

參考文獻：

[1]Siegel RL，Miller KD，Fuchs HE，et al.Cancer Statistics，2021[J].CA Cancer J Clin，2021，71（1）：7-33.

[2]張仲華，劉晨瑛，任會葉，等.2003-2018年間中國女性宮頸癌發病與死亡趨勢研究[J].中華疾病控制雜志，2022，26（1）：14-20.

[3]Sundstr？觟m K，Elfstr？觟m KM.Advances in cervical cancer prevention：Efficacy， effectiveness， elimination？[J].PLoS Med，2020，17（1）：e1003035.

[4]童威，謝冬根，樂俊，等.DEK激活NF-κB信號通路抑制神經膠質瘤細胞凋亡[J].中國免疫學雜志，2019，35（12）：1476-1481.

[5]Chen Z，Huo D，Li L，et al.Nuclear DEK preserves hematopoietic stem cells potential via NCoR1/HDAC3-Akt1/2-mTOR axis[J].J Exp Med，2021，218（5）：e20201974.

[6]Zong W，Zhao B，Xi Y，et al.DEK domain-containing proteins control flowering time in Arabidopsis[J].New Phytol，2021，231（1）：182-192.

[7]Greene AN，Parks LG，Solomon MB，et al.Loss of DEK Expression Induces Alzheimer's Disease Phenotypes in Differentiated SH-SY5Y Cells[J].Front Mol Neurosci，2020，13：594319.

[8]Cao J，Su J，An M，et al.Novel DEK-Targeting Aptamer Delivered by a Hydrogel Microneedle Attenuates Collagen-Induced Arthritis[J].Mol Pharm，2021，18（1）：305-316.

[9]Cai Y，Hao Y，Xu H，et al.Gigantol inhibits cell proliferation and induces apoptosis by regulating DEK in non-small cell lung cancer[J].Exp Ther Med，2021，22（5）：1317.

[10]Lee KF，Tsai MM，Tsai CY，et al.DEK Is a Potential Biomarker Associated with Malignant Phenotype in Gastric Cancer Tissues and Plasma[J].Int J Mol Sci，2019，20（22）：5689.

[11]Pease NA，Shephard MS，Sertorio M，et al.DEK Expression in Breast Cancer Cells Leads to the Alternative Activation of Tumor Associated Macrophages[J].Cancers （Basel），2020，12（7）：1936.

[12]Hacker KE，Bolland DE，Tan L，et al.The DEK Oncoprotein Functions in Ovarian Cancer Growth and Survival[J].Neoplasia，2018，20（12）：1209-1218.

[13]高淼，劉莉，關阿娜，等.MicroRNA-137通過Wnt信號通路對宮頸癌細胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤的作用研究[J].中國現代醫學雜志，2022，32（21）：1-7.

[14]王昊天，段晶晶，陳幸運，等.EHF通過抑制Wnt/β-catenin通路活性下調胰腺癌細胞的干性[J].中國腫瘤臨床，2022，49（23）：1242-1248.

[15]Yin GW，Xia XX，Song FJ，et al.Expression of Wnt-1 and TSLC1 in condyloma acuminatum[J].Clin Exp Dermatol，2019，44（6）：620-624.

[16]Gustin SE，Hogg K，Stringer JM，et al.WNT/β-catenin and p27/FOXL2 differentially regulate supporting cell proliferation in the developing ovary[J].Dev Biol，2016，412（2）：250-260.

[17]李杉，尤琪，武金玉，等.Wnt-1、Wnt-5a、Wnt-7a和卵巢癌的關系[J].中國臨床研究，2019，32（2）：158-161.

[18]蔣岑，馬洪，胡赟，等.S100A8/A9通過Wnt/β-catenin促進口腔鱗癌的侵襲遷移[J].安徽醫科大學學報，2022，57（12）：1971-1978.

[19]Krishnamurthy N，Kurzrock R.Targeting the Wnt/beta-catenin pathway in cancer： Update on effectors and inhibitors[J].Cancer Treat Rev，2018，62：50-60.

[20]孫光蕊，楊陽，鄭競雄，等.Survivin通過Wnt/β-catenin信號通路調控食管癌的侵襲和遷移的機制研究[J].河北醫學，2022，28（10）：1620-1625.

[21]Fang G，Zhang P，Liu J，et al.Inhibition of GSK-3β activity suppresses HCC malignant phenotype by inhibiting glycolysis via activating AMPK/mTOR signaling[J].Cancer Lett，2019，463：11-26.

[22]Kim S，Cheon H，Kim SM，et al.GSK-3β-mediated regulation of cadmium-induced cell death and survival[J].Cell Mol Biol Lett，2018，23：9.

[23]Amici M，Lee Y，Pope RJP，et al.GSK-3β regulates the synaptic expression of NMDA receptors via phosphorylation of phosphatidylinositol 4 kinase type IIα[J].Eur J Neurosci，2021，54（8）：6815-6825.

[24]張筍雨，朱艷.Erastin調節GSK-3β/NRF2通路抑制卵巢癌細胞增殖的實驗研究[J].臨床腫瘤學雜志，2021，26（11）：967-972.

收稿日期：2023-02-19；修回日期：2023-03-14

編輯/杜帆