胃癌組織中IL-32 與Apaf-1 蛋白的表達及意義

朱興華，陳亞麗，郭燕

南通市腫瘤醫院病理科，江蘇南通 226361

胃癌是臨床上發病率及病死率較高的消化道惡性腫瘤，其在我國發病率約為5.6%，在惡性腫瘤發病率中位居第2 位；病死率約為7.7%，位居惡性腫瘤病死率第3 位[1]。胃癌早期缺乏典型性癥狀，大部分患者早期均未能發現，而確診時已發展為中晚期，預后差，遠期生存率低，僅為7%～34%，早期胃癌5 年生存率高達90%以上，因此早期診斷對提高胃癌患者遠期生存率有重要的意義[2]。白細胞介素-32（Interleukin-32, IL-32）是一種廣泛表達的炎癥細胞因子，其可加劇炎癥，加快腫瘤生成。凋亡蛋白酶激活因子-1（Apoptotic Protease Activating Factor-1, Apaf-1）是一種促凋亡因子，在調節細胞凋亡中發揮著重要的作用。臨床資料顯示，IL-32與Apaf-1 蛋白參與腫瘤的發生和發展，對胃癌患者的早期診斷、早發現和早治療有重要的意義[3]。本研究回顧性選取2019 年1 月—2022 年12 月南通市腫瘤醫院收治的100 例胃癌患者的臨床資料，分析胃癌組織中IL-32 與Apaf-1 的表達及意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取本院收治的100 例胃癌患者的臨床資料，其中男64 例，女36 例；年齡＜60 歲27 例，≥60歲73 例；分化程度：高+中分化42 例，低分化58 例；浸潤深度：＜肌層24 例，≥肌層76 例；TNM 分期：Ⅰ+Ⅱ期39 例，Ⅲ+Ⅳ期61 例；淋巴結轉移情況：轉移59例，未轉移41 例。分別取同一患者的胃癌組織標本和正常（癌旁）胃黏膜標本，胃癌組織標本納入胃癌組，正常胃黏膜標本作為對照，納入癌旁組。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準 年齡≥18 歲；均給予胃癌根治術切除治療，術后病理證實為原發性胃癌；臨床病理資料均完整；術后生存時間≥3 個月；自愿參與并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準 患其他原發性惡性腫瘤者；心肝腎功能異常者；近期接受放、化療者；患血液系統疾病或自身免疫系統疾病者；精神障礙或意識異常者；依從性不高，配合度低者。

1.3 方法

1.3.1 試劑 采用美國Affinity 公司生產的IL-32 兔抗人多克隆抗體，采用美國Cell Signal 公司生產的Apaf-1 兔抗人多克隆抗體，同時采用武漢佰樂博生物技術有限公司生產的免疫組化（Streptavidinperosidase, SP）試劑盒。

1.3.2 染色方法 將備好的組織標本放入甲醛溶液中進行固定，脫水后給予石蠟包埋，之后進行切片，厚度約為4 μm，嚴格按照試劑盒說明書完成操作，將陽性胃癌切片作為陽性對照組，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對照組。

1.4 觀察指標

IL-32、Apaf-1 蛋白在低倍與高倍光學顯微鏡下顯示主要定位于細胞質中，顯微鏡下觀察到清晰的棕黃色顆粒或黃色顆粒即表示存在陽性反應。通過5 個不同高倍顯微鏡（×400）觀察每一張切片，依據陽性細胞數占比結果與染色強度高低結果判定IL-32 和Apaf-1 蛋白的陽性表達情況。①陽性細胞數評分：0 分：陽性細胞數所占比例＜5%；1 分：所占比例為5%～＜25%；2 分：所占比例為25%～＜50%；3 分：占比≥50%。②染色強度高低結果評分標準：0 分：陰性，無陽性著色；1 分：弱陽性，呈現淡黃色；2 分：陽性，呈現棕黃色；3 分：強陽性，呈現棕褐色。上述兩項評分結果相乘所得的結果為最終陽性表達結果，若最終評分＞1 分，則表示結果為陽性（+），若最終評分為0～1 分，則表示結果為陰性（-）。

1.5 統計方法

使用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料（IL-32、Apaf-1 蛋白陽性表達率等）用例數（n）和率（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組與癌旁組IL-32、Apaf-1 蛋白陽性表達率比較

胃癌組IL-32 陽性表達率高于癌旁組，Apaf-1蛋白陽性表達率低于癌旁組，差異有統計學意義（P均＜0.05）。見表1。

表1 胃癌組與癌旁組IL-32、Apaf-1 蛋白陽性表達率比較[n（%）]

2.2 胃癌不同臨床病理參數患者IL-32、Apaf-1 蛋白陽性表達率比較

胃癌患者不同性別、不同年齡IL-32、Apaf-1 蛋白陽性表達率對比，差異無統計學意義（P均＞0.05）。低分化癌患者、腫瘤浸潤深度≥肌層患者、Ⅲ期及Ⅳ期患者、淋巴結轉移患者的IL-32 陽性率高于高+中分化程度、浸潤深度＜肌層、TNM 分期為Ⅰ+Ⅱ期以及無淋巴結轉移患者，Apaf-1 蛋白陽性率低于高+中分化程度、浸潤深度＜肌層、TNM 分期為Ⅰ+Ⅱ期以及無淋巴結轉移患者，差異有統計學意義（P均＜0.05）。見表2。

表2 胃癌不同臨床病理參數患者IL-32、Apaf-1 蛋白陽性表達率比較[n（%）]

3 討論

胃癌是一種比較常見的惡性腫瘤，國內關于胃癌發病原因的研究較多，大多數認為與飲食因素、環境因素、遺傳因素、癌前病變及幽門螺桿菌感染等有密切的關系，但目前該病仍未有明確的發病機制[4-5]。臨床試驗表明，胃癌的發病機制與炎癥及細胞凋亡異常有密切的關系，其中炎癥細胞因子IL-32 與促凋亡因子Apaf-1 蛋白是胃癌發生、演變及轉移的關鍵因素[6-7]。

李佳欣等[8]在臨床試驗中對比正常胃黏膜上皮組織和胃癌組織的IL-32 與Apaf-1 蛋白表達情況，結果顯示，IL-32 陽性表達率為（38.3% vs 70.0%），Apaf-1 蛋白陽性表達率為（75.0% vs 31.7%）（P均＜0.05），提示胃癌組織中IL-32 處于高表達水平，相反，Apaf-1 蛋白處于低表達水平，兩者有明顯的負相關關系，且兩者與胃癌TNM 分期、分化程度、浸潤深度、是否淋巴結轉移顯著相關。本研究結果顯示，胃癌組織與正常組織IL-32陽性表達率分別為73.00%、35.00%（P＜0.05），提示胃癌組織中IL-32 呈現陽性高表達，而正常組織中IL-32 的表達量較少，與李佳欣等報道的IL-32 表達情況基本一致，究其原因，可能與IL-32 參與胃癌的發生及侵襲轉移等有關。國內文獻報道，約有25%的患者，其腫瘤的發生和癌變主要由慢性炎癥所致，IL-32 是臨床上新型的促炎癥細胞因子，是多種炎癥性疾病發生的主要原因，也是多種惡性腫瘤的病原之一[9-11]。IL-32 可通過激活激活蛋白-1、激活核因子κB、半胱氨酸天冬蛋白酶、活化p38 有絲分裂原蛋白激酶等途徑促進惡性腫瘤的發生[12-13]。本研究顯示，胃癌組織中Apaf-1 蛋白陽性表達率（29.00%）顯著低于正常組織（77.00%）（P＜0.05），提示胃癌組織中Apaf-1 蛋白呈現低表達狀態，而在正常組織中Apaf-1 蛋白呈現高表達狀態，與李佳欣等[8]報道的Apaf-1 蛋白表達基本一致。Apaf-1 是一種廣泛存在于人體正常組織中的促凋亡因子，對細胞凋亡具有顯著的激活促進作用，其主要通過線粒體途徑誘導和加快腫瘤細胞的凋亡，有效抑制癌細胞的生長和轉移，而在胃癌組織中Apaf-1 蛋白呈現低表達狀態，導致癌細胞凋亡存在阻礙，形成有利于癌細胞生存和繁殖的環境[14-16]。此外，本研究顯示IL-32、Apaf-1 蛋白的表達與腫瘤浸潤、分化、分期、轉移等臨床病理參數有密切的關系，與李佳欣等[8]報道基本一致，提示L-32 與Apaf-1 可反映腫瘤的生長和發展狀況，兩種因子可起到協同作用，加快胃癌細胞生長。

綜上所述，在胃癌組織的生長和發展中，IL-32的高表達與Apaf-1 蛋白的低表達可加快胃癌組織的侵襲和轉移，增加患者的病死率，因此及時監測IL-32 與Apaf-1 蛋白的表達狀態，對患者的臨床診療及預后改善有重要的作用，對降低病死率具有一定的積極意義。