胃癌患者血清微小RNA-506和微小RNA-874的表達及其與幽門螺桿菌感染、病情嚴重程度的相關(guān)性

馮彩團, 符仕康, 王 寧, 郭殿華

(海南西部中心醫(yī)院, 1. 消化內(nèi)科, 2. 腫瘤外科, 3. 消化科內(nèi)鏡室, 海南 儋州, 813099)

胃癌是較常見的惡性腫瘤,因胃癌初期臨床癥狀不具有特異性,大多數(shù)患者確診時已處于胃癌晚期,錯過了最佳手術(shù)治療時間,因而常采用化療、放療、靶向藥物等方式進行治療[1-2]。幽門螺桿菌(Hp)感染會誘發(fā)胃部炎癥性疾病,破壞胃黏膜組織,進而誘導胃癌等惡性腫瘤疾病的發(fā)生[3-4]。微小RNAs(miRNAs)是一種廣泛存在的非編碼RNA, 能夠參與多種腫瘤信號的傳導通路,在不同癌癥中發(fā)揮作用[5]。微小RNA-506(miR-506)是miRNAs家族的重要成員之一,研究[6-7]表明miR-506在惡性腫瘤的形成、侵襲和遷移等過程中發(fā)揮重要作用。微小RNA-874(miR-874)同樣作為miRNAs家族的一員,與多種類型腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān),研究[8]表明miR-874能夠發(fā)揮抑制胃癌細胞生長、遷移及侵襲能力的作用。本研究探討胃癌患者血清miR-506和miR-874的表達水平,分析兩者與Hp感染及病情嚴重程度的相關(guān)性,現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年5月—2022年5月海南西部中心醫(yī)院收治的78例胃癌患者為研究對象,年齡50～70歲,平均(60.36±6.42)歲。納入標準: ① 通過胃鏡取活組織并行病理學檢查,按照《中國早期胃癌篩查及內(nèi)鏡診治共識意見(2014年,長沙)》[9]相關(guān)標準診斷為胃癌者; ② 術(shù)前進行呼氣實驗診斷Hp感染者; ③ 既往無放、化療史者; ④ 患者均未接受抗Hp治療; ⑤ 近2個月內(nèi)未服用相關(guān)治療藥物者; ⑥ 患者及家屬知曉且同意參與該研究,并簽署知情同意書。排除標準: ① 合并其他惡性腫瘤者; ② 近期有服用抗炎藥物史者; ③ 合并免疫系統(tǒng)疾病者; ④ 合并心、肝、腎等重要臟器功能障礙者。根據(jù)Hp感染情況將患者分為感染組43例和未感染組35例; 根據(jù)TNM分期將患者分為Ⅰ～Ⅱ期40例和Ⅲ～Ⅳ期38例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準實施。

1.2 研究方法

1.2.1 Hp感染的檢測: 所有患者均行14C-尿素呼氣試驗[10]。患者空腹5 h后,口服1粒14C膠囊,等待25 min后進行呼氣試驗,收集患者呼出氣體,采用Hp檢測儀(型號為FR-9101, 購自武漢科爾達醫(yī)療技術(shù)有限公司)測定14C含量,測量結(jié)果>100 dpm/mmol CO2為陽性。

1.2.2 血清miR-506和miR-874表達水平檢測: 采集患者晨起空腹外周靜脈血3 mL, 以5 000 r/min離心10 min, 取上層血清置入EP管中,置于-20 ℃冰箱中備用。采用RNA提取試劑盒(貨號為9112, Takara公司)從血清中提取總RNA, 采用分光光度計(UPT-100, 上海尤尼柯儀器有限公司)測量OD260/280, 取2 μg總RNA經(jīng)DNA酶處理后按照說明書操作得到cDNA, 使用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix(貨號為Q711-02, Takara公司)對目的基因miR-506、miR-874進行擴增,儀器為7300型實時熒光定量PCR儀(美國ABI公司),以U6為內(nèi)參,進行數(shù)據(jù)分析,采用2-△△Ct法計算miR-506和miR-874的表達水平,引物序列見表1。

表1 引物序列

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結(jié) 果

2.1 感染組與未感染組患者血清miR-506和miR-874表達水平比較

感染組患者血清miR-506水平為(1.41±0.33), 高于未感染組的(1.20±0.28), 差異有統(tǒng)計學意義(t=2.98,P<0.05); 感染組患者血清miR-874表達水平為(1.22±0.27), 低于未感染組的(1.50±0.51), 差異有統(tǒng)計學意義(t=3.108,P<0.05)。

2.2 不同病情嚴重程度患者血清miR-506、miR-874、PG Ⅰ和G-17表達水平

Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-506和G-17水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者, miR-874和PG Ⅰ表達水平低于Ⅰ～Ⅱ期患者,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05), 見表2。

表2 不同病情嚴重程度患者血清miR-506和miR-874表達水平比較

2.3 血清miR-506與miR-874表達水平的相關(guān)性分析

對胃癌患者血清miR-506與miR-874表達水平進行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,血清miR-506與miR-874表達水平呈顯著負相關(guān)(r=-0.886,P<0.05)。

2.4 胃癌患者病情嚴重程度與臨床病理特征的關(guān)系

年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度與病情嚴重程度均無相關(guān)性(P>0.05), Ⅲ～Ⅳ期患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比率高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05), 見表3。

表3 胃癌病情嚴重程度與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

2.5 胃癌患者病情嚴重程度影響因素的多因素Logistic回歸分析

以病情嚴重程度為因變量(Ⅲ～Ⅳ期=1, Ⅰ～Ⅱ期=0), 以miR-506(連續(xù)變量)、miR-874(連續(xù)變量)為自變量,進行Logistic回歸分析,結(jié)果顯示, miR-506、miR-874為病情嚴重程度的影響因素(P<0.05), 見表4。

表4 多因素Logistic回歸分析影響胃癌患者病情嚴重程度的相關(guān)因素

2.6 血清miR-506和miR-874對Hp感染及病情嚴重程度的診斷價值分析

ROC曲線分析結(jié)果顯示,血清miR-506、miR-874以及兩者聯(lián)合檢測診斷Hp感染的AUC分別為0.741、0.648、0.823, 兩者聯(lián)合檢測優(yōu)于血清miR-506和miR-874各自單獨檢測(P=0.007、0.001); 血清miR-506、miR-874以及兩者聯(lián)合檢測診斷病情嚴重程度的AUC分別為0.697、0.797、0.836, 兩者聯(lián)合檢測優(yōu)于血清miR-506和miR-874各自單獨檢測(P=0.045、0.046)。由此可見,血清miR-506與miR-874聯(lián)合檢測具有較高的特異性,對胃癌患者的病情嚴重程度具有較高的診斷價值,見圖1。

3 討 論

胃癌是位于胃黏膜上皮的惡性腫瘤,其發(fā)病率及致死率分別高達42.6%和45.0%。由于疾病初期出現(xiàn)腹脹、消化不良等癥狀,胃癌常被當作普通胃病進行治療,易錯過最佳手術(shù)治療時機,治療效果及預后狀態(tài)不佳,影響患者的生命健康及質(zhì)量[11-14]。

研究[15-16]表明胃腔及胃黏膜中存在雙歧桿菌、乳酸桿菌、幽門螺桿菌等大量微生物群,這些菌群與胃炎、胃萎縮等胃病的發(fā)生密切相關(guān)。Hp與胃癌的發(fā)生緊密相關(guān),其主要是通過參與胃黏膜組織中異常細胞的信號傳導過程來促使胃黏膜細胞發(fā)生癌變,形成惡性腫瘤。miR-506是miRNAs家族重要成員之一,其能夠通過多種信號傳導及調(diào)控通路參與并影響腫瘤的形成、侵襲和遷移等過程,在不同類型癌癥中發(fā)揮作用。ROSTAMI YASUJ S等[17]研究顯示, miR-506高表達會導致癌細胞增多。本研究中, Hp感染組患者血清miR-506水平高于未感染組, Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-506水平也顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者,與周俊平[18]研究發(fā)現(xiàn)的非小細胞肺癌組織中miR-506表達水平高于癌旁組織以及趙德余等[19]研究發(fā)現(xiàn)的結(jié)腸癌組織標本中miR-506表達水平顯著高于癌旁組織的結(jié)果均一致,初步提示miR-506與Hp感染的發(fā)生及病情嚴重程度密切相關(guān)。

miR-874也與胃癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。JIANG B F等[20]表示, miR-874的表達在胃癌的發(fā)展中起到抑制作用,并且miR-874的表達不僅會影響胃癌細胞血管擬態(tài)的形成,還會影響癌細胞的轉(zhuǎn)移能力[8]。本研究中,感染組患者血清miR-874表達水平顯著低于未感染組,Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-874表達水平顯著低于Ⅰ～Ⅱ期患者,與ZHANG X Y等[21]研究發(fā)現(xiàn)miR-874在胃癌細胞中呈低表達且在胃癌組織中的表達顯著低于癌旁組織的結(jié)果一致,表明miR-874高表達會抑制Hp感染發(fā)生,減緩病情惡化程度。相關(guān)性分析顯示,胃癌患者血清miR-506與miR-874表達水平呈負相關(guān),說明miR-874與miR-506對Hp感染及病情嚴重程度起到相反的作用,這與感染組患者以及不同病情嚴重程度患者血清中兩者表達趨勢相反的結(jié)果一致。本研究單因素及多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示, miR-506、miR-874是病情嚴重程度的影響因素; ROC曲線顯示,血清miR-506和miR-874聯(lián)合檢測診斷Hp感染的AUC為0.823, 大于各自單獨檢測,血清miR-506和miR-874聯(lián)合檢測診斷病情嚴重程度的AUC為0.836, 兩者聯(lián)合檢測對Hp感染及病情嚴重程度具有較好的診斷價值。

綜上所述,血清miR-506、miR-874表達水平與Hp感染的發(fā)生及病情嚴重程度有關(guān),兩者聯(lián)合檢測對Hp感染及病情嚴重程度具有一定的輔助診斷價值。