宮頸癌組織p53及TPX2表達水平與放療敏感性的相關性分析

黃相艷,李秀芳,孟泳圳

(安陽市腫瘤醫院/河南科技大學第四附屬醫院 婦科,河南 安陽 455000)

宮頸癌是生殖系統常見惡性腫瘤,多見于40～49歲年齡段女性,嚴重影響女性身心健康[1]。近年來,在性行為觀念的轉變、多產、持續人乳頭瘤病毒感染等因素的影響下,宮頸癌患病率不斷增長并逐漸呈現出年輕化趨勢[2]。因此,宮頸癌的防治不容忽視。現階段,對于宮頸癌的治療方法多種多樣,其中放療適應范圍廣是宮頸癌的主要治療手段。但在臨床實際工作中發現,不同患者對放療的敏感性不同,其治療效果也不同[3]。腫瘤蛋白53(tumor protein 53,p53)是目前發現的與各種腫瘤疾病高度相關的抑癌基因之一,包括野生型和突變型兩種,前者具有細胞周期檢查功能,可使受損細胞阻滯于G1期,引導細胞凋亡;而后者可喪失該功能,發揮促癌作用[4]。Xklp2靶蛋白(Xklp2 target protein,TPX2)是受細胞周期調控的核增殖蛋白,在維持紡錘體穩定性、促進細胞有絲分裂紡錘體形成中發揮重要作用[5]。本研究旨在探討宮頸癌組織p53及TPX2的表達水平及其與放療敏感性的相關性,以期為臨床提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月至2023年1月在安陽市腫瘤醫院婦科就診的135例宮頸癌患者,年齡28～72(55.26±5.00)歲。(1)納入標準:①宮頸病理活檢證實為鱗狀細胞癌;②國際婦產科聯盟(Federation International of Gynecology and Obstetr,FIGO)分期為Ⅱ～Ⅲ期;③臨床資料完整;④初治病例,入組前未接受過放射治療及手術治療;⑤簽署知情同意書。(2)排除標準:①心、肺、肝、腎嚴重障礙,無法耐受放射治療;②全身狀況較差或有惡病質;③合并其他部位腫瘤;④合并免疫性疾病;⑤近期使用化療、免疫抑制劑等藥物治療;⑥治療前后影像學、病理學資料及隨訪資料不齊全。本研究經安陽市腫瘤醫院醫學倫理委員會審批。

1.2 治療方法

所有患者均接受適形強調外照射治療和高劑量率腔內后裝放療。參考文獻[6]勾畫外照射靶區,X線模擬定位,使用直線加速器6/10 MV X射線照射全盆腔,劑量每次1.8 Gy,1周5次。后裝腔內照射,每次6 Gy,1周1次,在體外放療20次后開始進行,共4～6次,生物學總劑量32～48 Gy。

1.3 資料收集

放療前、后通過宮頸取腫瘤組織標本,取材過程注意容器及器械的無菌處理,取材大小約為0.5 cm×0.5 cm;所有標本采集后立即投入液氮內,放入超低溫冰箱儲存備用。免疫組織化學檢測方法:取適量宮頸癌組織,石蠟包埋,制成4 μm厚的切片各2張,1張行蘇木精-伊紅染色,由病理科醫師對樣本進行復核診斷,診斷相符者納入研究,另1張經脫蠟、水化等處理后采用免疫組化SP法檢測p53、TPX2的表達情況,SP免疫組化檢測試劑盒由上海科順生物科技有限公司提供,兔抗人p53抗體由上海萬疆生物技術有限公司提供,兔抗人TPX2試劑盒由北京博奧森生物技術有限公司提供,以細胞核出現棕黃色顯色為p53、TPX2表達陽性。采用半定量計數法[7],按照著色強度計分(不著色0分,淺黃色1分,棕黃色2分,黃褐色3分)和陽性細胞占總細胞百分比計分(≤10%為0分,11%～25%為1分,26%～50%為2分,>50%為3分)的計分標準判定宮頸癌組織中p53、TPX2的表達水平,著色強度計分×陽性細胞占總細胞百分比計分為最后得分,0～3分為陰性表達,4～9分為陽性表達。PT-PCR檢測方法:取適量宮頸癌組織,采用Trizol法提取RNA,取1 μg 采用反轉錄試劑盒進行逆轉錄合成cDNA作為RT-PCR樣本,進行實時熒光定量PCR,引物序列如下。p53正向:5’- TGCTCACCCTGGCTAAAGTT -3’,反向5’- ACTCCTCCATGGCAGTCATC -3’。TPX2正向:5’-AACAATCCATTCCGTCAA-3’,反向5’-TGCAGGTGGCATACAAGG-3’。GAPDH正向5’-ACCTGACCTGCCGTCTAGAA-3’,反向5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’。采用凝膠成像分析系統掃描判定PCR反應結果,以p53、TPX2的OD值/同一標本GADPH的OD值計算p53、TPX2的相對表達量。放療敏感性評價:放療結束后隨訪4～6周,根據RECIST標準[8]評價療效,完全緩解腫瘤完全消失;部分緩解腫瘤最長徑與其最大垂直徑之乘積或多個腫瘤面積之和縮小>50%;疾病穩定腫瘤面積縮小<50%或增大≤25%;疾病進展腫瘤增加>25%或有新病灶出現。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 放療效果

所有患者均順利完成放療且隨訪資料完整,其中完全緩解 64例,部分緩解40例,疾病穩定25例,疾病進展6例,放療敏感率為77.04%(104/135)。將完全緩解、部分緩解歸為放療敏感組,將疾病穩定及疾病進展歸為放療抵抗組。

2.2 不同放療療效患者宮頸癌組織中p53及TPX2的表達

與放療抵抗組相比,放療敏感組宮頸癌組織中p53、TPX2的相對表達量及陽性率均較低(P<0.05)。見表1。

表1 放療敏感組與放療抵抗組宮頸癌組織中p53及TPX2的表達比較

2.3 不同療效患者臨床特征

與放療抵抗組相比,放療敏感組組織分化為低-中分化、無淋巴結轉移、腫瘤直徑<4 cm者占比更高(P<0.05);兩組年齡、FIGO分期比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 臨床特征與宮頸癌放療敏感性的關系[n(%)]

2.4 宮頸癌臨床特征及宮頸癌組織中p53及TPX2的表達與放療敏感性的關系

以放療敏感性為因變量(敏感=0,抵抗=1),對表1、表2中P<0.05的因素賦值(p53表達陰性=0,陽性=1;TPX2表達陰性=0,陽性=1;組織分化低-中分化=0,高分化=1;淋巴結轉移無=0,是=1、腫瘤直徑<4 cm=0,≥4 cm=1),進行多因素logistic回歸分析,結果顯示,宮頸癌組織中p53、TPX2表達及組織分化程度與放療敏感性密切相關(P<0.05)。見表3。

表3 宮頸癌放療敏感性的多因素logistic回歸分析

2.5 宮頸癌組織中p53、TPX2表達的相關性分析

將患者宮頸癌組織中p53、TPX2的相對表達量進行Pearson相關性分析,結果顯示,p53與TPX2的相對表達量呈正相關(r=0.229,P=0.008)。

3 討論

據統計,2020年我國新增60.4萬例新發宮頸癌病例和34.2萬例死亡病例,給家庭造成嚴重經濟負擔的同時也加重了社會的醫療負擔[9]。宮頸癌具體發病機制尚未十分明確。放療在改善患者臨床癥狀尤其是緩解腫瘤轉移方面發揮著重要作用。宮頸癌的放療效果取決于放療的敏感性,敏感性越高,治療效率越高。絕大多數宮頸癌患者在初次就診時已存在明顯的侵襲和轉移,部分患者可能對放療不敏感,出現局部未控和轉移而導致治療失敗[10]。因此,尋找與宮頸癌放療敏感性有關的因子、提升放療效果是臨床需解決的問題。

目前認為,放療抵抗是腫瘤干細胞、DNA損傷修復、上皮間質轉化、乏氧效應、腫瘤微環境等因素共同作用的結果[11-12]。p53在膜凋亡信號、線粒體凋亡通路以及細胞核內多種凋亡相關因子的轉錄與表達中扮演著重要角色[13]。在正常細胞中,p53半衰期短,含量低,一旦發生突變,其蛋白產物構型改變、半衰期延長,可在惡性細胞中高水平堆積,研究已證實,突變型p53具有致癌潛力,其過表達往往提示預后不良[14]。有研究通過檢測癌旁正常宮頸組織和宮頸癌組織中p53的表達,發現p53蛋白的陽性率為60.00%,高于癌旁正常宮頸組織,提示p53可能參與宮頸癌的發生、發展[15]。TPX2作為維持有絲分裂過程和紡錘體組裝的關鍵因素獲得臨床的廣泛關注。TPX2具有多種活性,其過表達可擾亂微管組織,致使基因組失穩、細胞中心體異常擴增和惡性轉化,從而促進腫瘤生長、轉移[16]。王文芳等[17]研究發現,TPX2在宮頸癌組織和細胞中表達均較癌旁組織升高。本研究中,所有患者均順利完成放療,放療敏感率為77.04%,較朱瑞霞等[18]報道的56.00%更高,這可能與樣本量、樣本選擇存在差異有關。本研究結果顯示,與放療抵抗組相比,放療敏感組宮頸癌組織中p53、TPX2的相對表達量及陽性率更低。提示宮頸癌組織中p53、TPX2的陽性表達可能與宮頸癌患者放療敏感度有關。考慮其原因可能是,放療時射線將細胞DNA雙鏈斷裂(double strand breaks,DSB),誘導細胞凋亡,細胞的DNA修復能力直接影響放療效果[19]。p53突變后,其促細胞凋亡功能隨之削弱,DSB修復蛋白功能、活性、蛋白自身等異常化,細胞凋亡減少,從而對放療產生抗拒[20]。此外,TPX2同樣可在放療射線導致的DSB反應中發揮作用,其過表達可導致γ-H2AX水平降低,通過DNA損傷檢測點1和共濟失調毛細血管擴張突變激酶等介質調停DNA損傷的修復,使放療敏感性降低[21]。本研究結果顯示,放療敏感組、放療抵抗組的組織分化程度、淋巴結轉移、腫瘤直徑存在差異,進一步分析發現,宮頸癌組織中p53、TPX2表達及組織分化程度與放療敏感性密切相關,宮頸癌組織中p53、TPX2陰性表達者及組織低-中分化者放療敏感性較高,與王美玲[7]、施璠等[22]的研究結果基本吻合。提示宮頸癌組織中p53、TPX2過表達可能會產生放療抵抗,進而影響療效,二者可作為宮頸癌治療得新標志物,為宮頸癌的療效評估提供理論依據。此外,本研究Pearson相關性分析結果顯示,宮頸癌組織中p53與TPX2的相對表達量呈正相關,提示二者可能在影響放療敏感性中發揮著協同作用,但其具體的作用機制還有待進一步探討。

4 結論

宮頸癌組織中p53、TPX2的高表達很可能對宮頸癌產生放療抵抗,從而影響療效,檢測其表達有助于患者個體化治療方案的制定、合理進行綜合治療。但本研究僅對患者的短期放療效果進行評價,隨訪時間較短,建議今后延長隨訪時間,進一步完善本研究結論。