某國(guó)產(chǎn)試劑品牌在西門(mén)子Atellica-CH930全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)全程C反應(yīng)蛋白的性能驗(yàn)證

邰祺雯 李德全 趙艷紅 花海珠*

1 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院 （江蘇 蘇州 215006）

2 沈陽(yáng)平安好醫(yī)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司 （遼寧 沈陽(yáng) 110015）

內(nèi)容提要： 目的：基于WS/T 408-2012《臨床化學(xué)設(shè)備線性評(píng)價(jià)指南》、WS/T 492-2016《臨床檢驗(yàn)定量測(cè)定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證》以及CNAS-GL037《臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南》等文件評(píng)價(jià)某國(guó)產(chǎn)品牌在西門(mén)子全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)全程C反應(yīng)蛋白的性能，為規(guī)范性能驗(yàn)證的實(shí)施及全程C反應(yīng)蛋白的臨床推廣提供參考。方法：依據(jù)中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)以及國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨檢中心推薦的方法對(duì)乳膠免疫比濁法全程C反應(yīng)蛋白的正確度、精密度、線性區(qū)間、可報(bào)告范圍、參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，試驗(yàn)結(jié)果在廠商規(guī)定的范圍內(nèi)或是滿足本室的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為性能驗(yàn)證通過(guò)。結(jié)果：通過(guò)選取2種濃度廠商提供的標(biāo)準(zhǔn)溯源物質(zhì)進(jìn)行偏移評(píng)估，檢測(cè)結(jié)果均符合規(guī)定，正確度驗(yàn)證通過(guò)。同時(shí)驗(yàn)證重復(fù)性和精密度，2種濃度的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差均小于廠商規(guī)定的范圍，精密度驗(yàn)證通過(guò)。多項(xiàng)式回歸最優(yōu)擬合曲線為一階線性微分方程y=1.088x-2.884，R2=0.9989，線性區(qū)間驗(yàn)證通過(guò)。臨床可報(bào)告范圍最高稀釋倍數(shù)為16倍，高限為340mg/L。20名健康個(gè)體的檢測(cè)結(jié)果均在廠商制定的參考范圍內(nèi)。結(jié)論：該品牌全程C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑與西門(mén)子Atellica-CH930全自動(dòng)生化分析儀聯(lián)用性能穩(wěn)定，可用于臨床樣品的檢測(cè)。

按照中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)2012年發(fā)布的《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》：CNAS-CL02:2012中的內(nèi)容規(guī)定，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)參考IS015189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》建立并運(yùn)行質(zhì)量管理體系，對(duì)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)操作程序的性能驗(yàn)證或性能確認(rèn)[1]。既往行業(yè)內(nèi)部對(duì)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目的性能驗(yàn)證方式和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參差不齊，各實(shí)驗(yàn)室對(duì)應(yīng)如何開(kāi)展性能驗(yàn)證工作缺乏經(jīng)驗(yàn)和參考對(duì)象，導(dǎo)致性能驗(yàn)證在實(shí)施的過(guò)程中容易出現(xiàn)要素不齊、方案不佳和標(biāo)準(zhǔn)錯(cuò)選等諸多情況[2,3]。

2019年2 月由中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)發(fā)布了CNAS-GL037:2019《臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南》，其中包含GB/T 26124-2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》、WS/T 408-2012《臨床化學(xué)設(shè)備線性評(píng)價(jià)指南》、WS/T 416-2013 《干擾實(shí)驗(yàn)指南》、WS/T 420-2013《臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》、WS/T 492-2016《臨床檢驗(yàn)定量測(cè)定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證》共5篇規(guī)范性引用文件，提供了準(zhǔn)確有效的性能驗(yàn)證方案參考和方法解讀[4]。

本實(shí)驗(yàn)完全按照其推薦的性能驗(yàn)證方法對(duì)某國(guó)產(chǎn)品牌試劑在進(jìn)口廠商西門(mén)子最新機(jī)型Atellica-CH930全自動(dòng)生化分析儀的開(kāi)放試劑倉(cāng)位中聯(lián)合應(yīng)用檢測(cè)全程C反應(yīng)蛋白的性能進(jìn)行驗(yàn)證，為日后性能驗(yàn)證的規(guī)范化、同質(zhì)化工作以及向臨床推廣全程C反應(yīng)蛋白檢驗(yàn)項(xiàng)目提供參考。

1.材料與方法

1.1 一般材料

本研究起止時(shí)間：2022年8月～2022年11月。

本試驗(yàn)收集由健康個(gè)體提供或者廠商聲明的線性區(qū)間內(nèi)低、高限濃度水平的肘靜脈血液樣品作為試驗(yàn)對(duì)象，樣品性狀正常，排除溶血、乳糜血、黃疸等不合格樣品。經(jīng)離心及提取上清后，避光-80°C冷凍保存于凍存管內(nèi)。其中，健康個(gè)體的病史采集、體格檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果均符合WS/T 404-2018《臨床常用生化檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間》的規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)[5]。

儀器與試劑：本試驗(yàn)使用的檢驗(yàn)儀器為西門(mén)子Atellica CH930型全自動(dòng)生化分析儀，使用的試劑為九強(qiáng)乳膠免疫比濁法全程C反應(yīng)蛋白（HCRP）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：21-1215），校準(zhǔn)品（GC-HCRP，批號(hào)：21-0510）及質(zhì)控品（GQ-HCRP，批號(hào)：21-1125）。

1.2 方法

1.2.1 測(cè)量正確度驗(yàn)證

本試驗(yàn)應(yīng)用偏移評(píng)估法進(jìn)行正確度驗(yàn)證，選取由廠商提供的2種濃度的工作標(biāo)準(zhǔn)品（溯源性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)），每天重復(fù)測(cè)定2次，連續(xù)測(cè)定5d，記錄檢測(cè)結(jié)果。評(píng)價(jià)方式為計(jì)算全部檢測(cè)結(jié)果的上驗(yàn)證限和下驗(yàn)證限，如廠商聲明標(biāo)準(zhǔn)在本試驗(yàn)檢測(cè)的上、下驗(yàn)證限區(qū)間范圍內(nèi)，則測(cè)量正確度驗(yàn)證通過(guò)。

1.2.2 測(cè)量精密度驗(yàn)證

精密度驗(yàn)證包括測(cè)量重復(fù)性和測(cè)量中間精密度，本試驗(yàn)同時(shí)驗(yàn)證重復(fù)性和中間精密度。每天檢測(cè)1個(gè)分析批，每批檢測(cè)2個(gè)水平的樣品，每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)4次，連續(xù)檢測(cè)5d，每個(gè)分析批中檢測(cè)質(zhì)控品，如失控則剔除數(shù)據(jù)并增設(shè)分析批。數(shù)據(jù)分析前排除離群值，排除標(biāo)準(zhǔn)為離均差超過(guò)4SD，計(jì)算變異系數(shù)，小于廠商聲明則為精密度驗(yàn)證通過(guò)。

1.2.3 線性區(qū)間驗(yàn)證

本試驗(yàn)應(yīng)用多項(xiàng)回歸分析的方式進(jìn)行線性區(qū)間驗(yàn)證。在廠商聲明的線性區(qū)間內(nèi)選擇樣品凍存待用，通過(guò)高、低濃度樣品進(jìn)行等濃度間隔稀釋制備6種濃度的試驗(yàn)樣品，每個(gè)樣品量為1.00mL，重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算均值、排除離群值，離群值排除方法為Grubbs法，所有試驗(yàn)均在1d內(nèi)完成。對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行多項(xiàng)回歸分析，其中實(shí)際檢測(cè)值作為因變量，理論計(jì)算值為自變量，使用統(tǒng)計(jì)軟件Prism 9進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得到一階、二階和三階多項(xiàng)式，對(duì)二階和三階的非線性系數(shù)與0進(jìn)行t檢驗(yàn)判斷是否有顯著性差異從而判斷最優(yōu)擬合曲線。判定標(biāo)準(zhǔn)為二階和三階的非線性系數(shù)與0無(wú)差異，最優(yōu)擬合曲線為一階時(shí)線性區(qū)間驗(yàn)證通過(guò)。

1.2.4 可報(bào)告范圍的確定

選擇廠商聲明的線性區(qū)間上1/3區(qū)域樣品，根據(jù)西門(mén)子Atellica CH930全自動(dòng)生化分析儀設(shè)定的自動(dòng)稀釋倍數(shù)（2、4、8、16倍）作為待測(cè)稀釋倍數(shù)，使用專(zhuān)用稀釋液對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)總€(gè)稀釋倍數(shù)的樣品重復(fù)檢測(cè)3次，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)，同時(shí)計(jì)算與還原濃度的相對(duì)偏差，可報(bào)告區(qū)間高限為相對(duì)偏差＜1/3總Tea的最大稀釋倍數(shù)與檢測(cè)區(qū)間高限的乘積。

1.2.5 參考區(qū)間驗(yàn)證

收集健康個(gè)體肘靜脈采集的血液樣品，排除不合格樣品，病史采集、體格檢查及實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)需均符合WS/T 404-2018《臨床常用生化檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間》規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。男性女性各10名，年齡20～60歲。驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)為若檢測(cè)結(jié)果在廠商聲明參考區(qū)間之外的數(shù)據(jù)不超過(guò)2個(gè)，則為參考區(qū)間驗(yàn)證通過(guò)，若超過(guò)2個(gè)，則另選20名合格參考個(gè)體重新按照上述方案進(jìn)行驗(yàn)證。

2.結(jié)果

2.1 測(cè)量正確度驗(yàn)證

2種濃度的溯源標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果的95%上、下置信限均符合廠商聲明的上、下驗(yàn)證限范圍內(nèi)，測(cè)量正確度偏移評(píng)估驗(yàn)證通過(guò)，詳見(jiàn)表1及表2。

表1.測(cè)量正確度檢測(cè)數(shù)據(jù)(mg/L)

表2.測(cè)量正確度偏移評(píng)估結(jié)果

2.2 測(cè)量精密度驗(yàn)證

2個(gè)濃度水平的測(cè)量精密度驗(yàn)證結(jié)果均低于廠商聲明標(biāo)準(zhǔn)（批內(nèi)變異系數(shù)＜6.25%，實(shí)驗(yàn)室變異系數(shù)＜8.33%）驗(yàn)證通過(guò)，如表3及表4所示。

表3.測(cè)量精密度檢測(cè)數(shù)據(jù)(mg/L)

表4.測(cè)量精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.3 線性區(qū)間驗(yàn)證

線性區(qū)間的等濃度間隔樣品制備設(shè)計(jì)如表5所示，檢測(cè)結(jié)果如表6所示，多項(xiàng)式方程如表7及圖1所示，使用Prism 9.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析得到一階方程為y=1.088x-2.884，R2=0.9989，三階方程的擬合曲線如圖1所示。再對(duì)二階和三階的非線性系數(shù)與0進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果二階方程中的非線性系數(shù)1.97×10-4，三階方程中的非線性系數(shù)1.016×10-6，6.925×10-4與0的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此最優(yōu)擬和曲線為一階線性微分方程，廠商聲明的區(qū)間符合線性。

圖1.多項(xiàng)回歸擬合曲線（mg/L）

表5.等濃度間隔稀釋樣品制備設(shè)計(jì)

表6.線性區(qū)間檢測(cè)結(jié)果(mg/L)

表7.多項(xiàng)式回歸方程

2.4 可報(bào)告范圍確定

在可報(bào)告范圍的確定中，取最高稀釋倍數(shù)16倍時(shí)相對(duì)偏差仍然＜1/3 Tea，因此可報(bào)告范圍確定為0～340mg/L，最高稀釋倍數(shù)為16倍，如表8所示。

表8.可報(bào)告范圍確定檢測(cè)結(jié)果(mg/L)

2.5 參考區(qū)間驗(yàn)證

根據(jù)廠商提供的參考區(qū)間0.000～6.000mg/L，選取符合標(biāo)準(zhǔn)的個(gè)體樣品20例，在20個(gè)檢測(cè)值中，無(wú)聲明區(qū)間外，驗(yàn)證通過(guò)。

3.討論

檢驗(yàn)項(xiàng)目的性能驗(yàn)證得以有效實(shí)施，是衛(wèi)生資源合理利用、避免浪費(fèi)的重要前提[6]。性能驗(yàn)證的主要目的是為了保證檢驗(yàn)項(xiàng)目程序能夠滿足臨床要求，保證樣品檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，因此性能驗(yàn)證也是檢驗(yàn)與臨床溝通的基本要求[7]。本試驗(yàn)所論述的檢驗(yàn)項(xiàng)目全程C反應(yīng)蛋白，是一次檢測(cè)超敏C反應(yīng)蛋白和常規(guī)C反應(yīng)蛋白的新發(fā)展的檢測(cè)技術(shù)，可以滿足臨床對(duì)新生兒、兒童和成年人感染性疾病的鑒別診斷與監(jiān)測(cè)、抗生素的合理應(yīng)用以及心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等多種需求，且方法學(xué)較為穩(wěn)定，具有較好的臨床意義[8]。因此，對(duì)全程C反應(yīng)蛋白進(jìn)行檢驗(yàn)程序的性能驗(yàn)證也能夠?yàn)榕R床主動(dòng)送檢提供參考與激勵(lì)，支持檢驗(yàn)新技術(shù)的研究與發(fā)展。同時(shí)，通過(guò)本試驗(yàn)的驗(yàn)證，可知國(guó)產(chǎn)試劑品牌與進(jìn)口檢測(cè)設(shè)備的開(kāi)放試劑倉(cāng)位聯(lián)合應(yīng)用的檢驗(yàn)程序同樣性能穩(wěn)定，在進(jìn)行檢驗(yàn)試劑國(guó)產(chǎn)化、降低高值耗材的耗占比等節(jié)流管理方向上亦能提供參考。

綜上所述，國(guó)產(chǎn)試劑品牌在西門(mén)子Atellica-CH930全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)全程C反應(yīng)蛋白的測(cè)量正確度、測(cè)量精密度、線性區(qū)間、可報(bào)告范圍及參考區(qū)間的驗(yàn)證及確認(rèn)均通過(guò)，且試驗(yàn)方案與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)符合ISO15189的認(rèn)可要求，也能夠滿足臨床要求。

但是，本試驗(yàn)的局限性在于未成功進(jìn)行特異性檢驗(yàn)和一致性驗(yàn)證。其一，特異性檢驗(yàn)未實(shí)施的原因是未能集齊濃度合理的干擾物質(zhì)，本試驗(yàn)使用了不同濃度的自制干擾替代物質(zhì)，進(jìn)行過(guò)多次試驗(yàn)，但是均未能得到穩(wěn)定的結(jié)果，且無(wú)量值溯源依據(jù)。其二，一致性檢驗(yàn)未實(shí)施的原因是區(qū)域內(nèi)無(wú)相同檢驗(yàn)項(xiàng)目的使用方，同一檢驗(yàn)項(xiàng)目在不同程序間的檢測(cè)結(jié)果如具有一定的可比性，有助于區(qū)域內(nèi)資源整合，也能夠確保臨床進(jìn)行準(zhǔn)確判斷[9]。因此未能進(jìn)行特異性和一致性驗(yàn)證是本次研究的局限所在。