聯合檢測CHI3L1、AFP和GGT在乙肝相關肝癌患者中的相關性研究

吳博文 鄒光美 王海延 黃朝任 盧毅 陳武

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是引起乙型肝炎的病原體，該病毒包含有正嗜肝DNA病毒屬和禽嗜肝DNA病毒屬2個屬，引起人體感染的是正嗜肝DNA病毒屬。HBV感染是全球性的公共衛生問題，而中國是乙型肝炎高發國家之一。HBV感染是我國肝硬化和肝細胞癌的主要病因[1]。國內外研究表明，HBV感染具有直接致癌的作用，且大多肝癌首次診斷已錯過早期，發展為中晚期，容易耽誤最佳手術時機[2]。血清標志物檢測是肝癌早發現、早診斷的重要診斷指標之一，目前臨床最常用的血清學標志物為甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP），但單純的AFP檢測對于診斷早期原發性肝癌的敏感度較低[3]。殼多糖酶3樣蛋白1（chitinase-3-like protein 1，CHI3L1）是一類結締組織細胞的生長因子，以肝細胞中表達最豐富，在抗細胞凋亡、組織重塑、癌細胞增殖等可能起到重要作用。有研究表明，CHI3L1水平升高與消化系統的炎癥性腸病、肝纖維化、肝癌、腸道腫瘤等相關[4]。組織病理活檢是肝癌診斷的“金標準”，此方法是具有一定的侵入性、創傷性，可能在活檢過程操作不當出現相關并發癥。因此從檢驗項目中尋找創傷少，且敏感度、特異度較高的肝癌輔助診斷指標，對于肝癌患者及時診療非常有價值。本研究旨在探討AFP、CHI3L1和γ-谷氨酰轉移酶（γ-glutamyl transferase，GGT）聯合檢測進行比較分析，為HBV病毒感染相關肝癌的臨床診療提供可靠的理論依據，達到防治肝癌的目的。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年7月—2023年7月在玉林市第一人民醫院就診的確診為肝癌、肝硬化、肝炎患者各50例進行研究。所有病例組患者乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）均為陽性。納入標準：（1）肝癌、肝硬化及慢性乙型肝炎的診斷符合《原發性肝癌診療規范（2019年版）》[5]、《肝硬化診治指南》[6]及《慢性乙型肝炎防治指南（2022年版）》[7]。（2）年齡＞30歲。（3）研究對象均知情同意并配合檢查。排除標準：（1）合并有急性或慢性其他肝炎，如甲肝、丙肝、自身免疫性肝病、酒精肝、脂肪肝、藥物性肝炎損害等。（2）有其他的惡性腫瘤。（3）處于妊娠期或哺乳期。（4）心臟、腎臟、肺部等嚴重損傷者。（5）患者死亡及資料不完整等。收集同期健康體檢人員50名作為健康對照組，對照組的體檢人員B超、放射及檢驗等項目未見異常。4組的年齡、性別比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。本研究經玉林市第一人民醫院倫理委員會批準。

表1 對照組及病例組一般資料比較

1.2 方法

入院后采集第2天清晨空腹抽取靜脈血3～5 mL，在無抗凝劑的真空管內靜置至少30 min，之后4 000 r/min離心10 min。血清CHI3L1檢測采用定量酶聯免疫吸附法，采用杭州普望生物技術有限公司的CHI3L1檢測試劑盒及深圳雷杜生命科學股份有限公司的RT-6000酶標儀。血清AFP檢測采用電化學發光法，采用羅氏801型號的全自動生化分析儀；血清GGT檢測采用酶比色法，丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（aspartate aminotransferase，AST）均采用速率法檢測，均采用羅氏702型號的全自動生化分析儀檢測，AFP、GGT、ALT、AST均使用德國羅氏診斷產品（上海）有限公司原裝相關配套試劑。以上所有檢測項目均嚴格按標準操作規程，在儀器運行正常、室內質控過關狀態下進行規范操作測定。

1.3 觀察指標

比較4組研究對象血清中CHI3L1、AFP、GGT、ALT、AST等水平的差異。

1.4 統計學處理

采用SPSS 24.0統計學軟件進行數據分析。符合正態分布的計量資料以（）表示，采用方差分析；不符合正態分布的計量資料以[M（P25，P75）]表示，多組間比較采用秩和檢驗的Kruskal-Wallis檢驗分析，2組間比較采用秩和檢驗的Mann-WhitneyU檢驗；計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗。相關性采用Spearman進行分析；采用受試者工作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲線的曲線下面積（area under the curve，AUC）判斷預測價值。檢驗水準α＝0.05。

2 結果

2.1 各組血清CHI3L1、AFP、GGT、AST及ALT檢測水平比較

肝炎組、肝硬化組、肝癌組的CHI3L1、AST、ALT水平均高于對照組，肝癌組AFP、GGT水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。與肝炎組比較，肝硬化組及肝癌組的CHI3L1、AFP、GGT、AST、ALT水平均升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。與肝硬化組比較，肝癌組的CHI3L1、AFP、GGT、AST水平均升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 病例組與對照組CHI3L1、AFP、GGT、AST及ALT水平比較[M（P25，P75）]

2.2 CHI3L1、AFP及GGT聯合檢測對HBV病毒感染相關肝癌ROC曲線分析

CHI3L1、AFP及GGT單一檢測ROC曲線的AUC分別為0.855、0.784、0.876；多指標聯合檢測時，CHI3L1、AFP聯合ROC曲線的AUC為0.915，而CHI3L1、AFP、GGT聯合時的ROC曲線AUC最大（AUC＝0.936）。見圖1、表3。

表3 ROC曲線分析結果

圖1 CHI3L1、AFP及GGT單一及聯合檢測診斷肝癌的ROC曲線圖

2.3 HBV病毒感染相關肝癌Spearman相關分析

相關分析結果顯示，CHI3L1與AST呈正相關（r＝0.414，P＝0.003），AFP與GGT呈正相關（r＝0.437，P＝0.002），AFP與AST呈正相關（r＝0.504，P＜0.001），GGT與AST呈正相關（r＝0.759，P＜0.001），GGT與ALT呈正相關（r＝0.636，P＜0.001）。

3 討論

在我國，慢性乙型肝炎是引起肝纖維化和肝硬化的主要因素，如不能早期診斷及有效治療，肝內組織炎癥活動造成肝細胞不同程度的損傷，可能出現肝組織結構的破壞，部分患者可發展為肝硬化，甚至發展為肝癌[8]。目前臨床診斷肝癌技術較多，但仍以肝病理活檢為“金標準”，但由于該活檢有創性、可能操作不當引發嚴重的并發癥等原因，在肝癌患者診療中有一定的局限性[9]。因此，肝癌的早期診斷與早期治療可以有效提高患者的生存率和生活質量。在臨床上，血清腫瘤標志物因具有創傷性小，便于各種人群篩查及重復檢測，故易被患者接受，常用于協助診斷腫瘤[10]。

CHI3L1又名幾丁質酶3樣蛋白1，為糖基水解酶家族成員之一。是一種含383個氨基酸，分子量42.6 KD的單體糖基化蛋白。由不同類型的細胞表達并分泌，主要包括巨噬細胞、中性粒細胞、血管平滑肌細胞及腫瘤細胞等，其在參與炎癥反應、細胞增殖、細胞凋亡、腫瘤代謝等方面起到重要作用。CHI3L1在肝臟中的表達較其他組織高，且CHI3L1水平隨肝臟炎癥反應的加重而逐漸升高，本研究CHI3L1水平結果與饒春美[11]研究相似，與對照組相比較，原發性肝癌組患者的AFP、CHI3L1水平均升高。本研究在鑒別肝癌患者方面，CHl3L1的診斷效能高，有較好的敏感度和特異度，其AUC為0.855；聯合CHl3L1、AFP檢測AUC為0.915，充分說明在肝癌臨床診斷與治療中的價值。有研究顯示，血清CHI3L1在肝癌組織所表達的水平高于癌旁組織，且與疾病的預后存在一定關聯，可作為鑒別肝臟病變的標志物，本文研究結果與此相似，其在肝癌組的CHI3L1水平高于其他各組，是目前臨床上常用的肝癌診斷輔助標志物之一[9]。另外與呂綺等[12]研究的血清CHI3L1在慢性乙型肝炎中表達水平升高，但其單獨應用鑒別診斷慢性乙型肝炎和乙肝肝硬化（特別是早期）的價值可能有限，與本研究結果有一定差異，推測是地域及入組數量影響等有關。

AFP是由卵黃囊和肝臟產生的一種分子量約為70 KDa的糖蛋白，主要來源于胚胎干細胞，是通過肝實質細胞及卵黃囊細胞結合生成。在臨床上被廣泛應用惡性腫瘤評估的血清腫瘤標志物，但由于AFP在肝臟其他良性病變中，如慢性肝炎、肝硬化等也偶爾出現高表達的情況，故AFP在單獨檢測診斷肝癌早期時的敏感度和特異度有待提高，需結合其他輔助技術如B超、放射檢查才可以達到診斷。成人體內AFP的含量很低。但當肝組織發生癌變時，伴隨病情的變化而出現AFP逐漸升高，本研究結果在肝癌組的AFP水平高于其他各組，與謝雯凈等[13]研究結果相一致，是目前臨床上最經典的肝癌診斷輔助標志物。GGT是一種結合在細胞表面的酶，存在于人體各種組織中，血清中的GGT大部分來自肝臟。有研究結果顯示，在肝癌患者中因肝組織癌變損傷導致血清中的GGT含量上升，且與癌細胞范圍和大小呈正相關。但GGT的敏感度較高，特異度較低，因藥物性肝損傷、脂肪肝、急慢性肝炎時GGT也會升高[14]。GGT、ALT和AST等是臨床評估肝功能的常用指標，程書平等[15]研究發現，血清GGT和GGT/ALT比值的測定對肝臟良惡性腫瘤的鑒別有參考價值，另外GGT及GGT/ALT對肝癌也有一定的診斷效能，但其特異度和敏感度不高。因此，在肝癌臨床診斷中，需同其他指標進行聯合檢測進行綜合判斷病情。本研究中，ROC曲線分析顯示，CHI3L1、AFP及GGT三指標聯合檢測診斷的ROC曲線的AUC為0.936，高于單項檢測；因此聯合檢測在肝癌的診斷方面比單指標檢測更有優勢。

綜上所述，HBV病毒感染相關肝癌患者血清AFP、GGT及CHI3L1聯合診斷敏感度和特異度較高，在臨床診療中具有重要參考價值。本研究的樣本量較少，還需后續進一步擴大樣本量研究，提供更加可靠依據。