決明子飲片、標準湯劑、配方顆粒特征圖譜的關聯研究

梁彩娟 李思遠 高 晗 李雪利 田 方 李軍山，2，3*

1.神威藥業集團有限公司，河北 石家莊 051430；2.云南省配方顆粒重點實驗室，云南 楚雄 675000；3.云南神威施普瑞藥業有限公司，云南 楚雄 675000

決明子為豆科植物鈍葉決明CassiaobtusifoliaL.或決明(小決明)CassiatoraL.的干燥成熟種子。決明子用藥歷史悠久，其既可食用，也可作藥用，是衛健委公布的110種藥食同源的品種之一[1]。本品味甘、苦、咸，性微寒。入肝、大腸經。具有清熱明目，潤腸通便的功效[2]。決明子含有蒽醌類、萘并吡喃酮類、多糖類、氨基酸類等多種化學成分，具有降壓調脂、抗氧化、保護肝臟、抑菌等作用[3-7]。

決明子為典型的清熱瀉火藥，因其在中醫臨床中用藥廣泛，需求量大，目前已被加工成多種劑型，如決明子粉，決明子配方顆粒等。決明子配方顆粒由決明子飲片經提取、濃縮、干燥、制粒等工序制成，具有攜帶方便，易沖服，質量穩定均一等優勢。2021年國家藥典委員會發布了《中藥配方顆粒質量控制與標準制定技術要求》，文中提出將“標準湯劑”作為衡量單位中藥配方顆粒是否與臨床湯劑基本一致的物質基準，并說明從原料到中間體到配方顆粒生產全過程的特征圖譜應具有相關性[8]。此外，由于配方顆粒失去了飲片的性狀、氣味及顯微特性，難以進行直觀的真偽鑒別，因此需建立專屬性強、重復性好且穩定的檢測方法來控制決明子配方顆粒的質量。目前有利用特征圖譜及多組分含量測定的方法控制決明子藥材質量的相關報道[9-18]，但并無決明子飲片-標準湯劑-配方顆粒的相關性研究，全面控制決明子配方顆粒質量的研究也較少。特征圖譜是一種從整體上控制中藥質量的方法，能很好地體現配方顆粒中化學成分的分布情況。本研究采用HPLC法建立了決明子飲片、標準湯劑、配方顆粒特征圖譜，并以特征峰為分析對象進行相似度分析。決明子飲片、標準湯劑、配方顆粒之間主要成分的相關性評價，能準確地反映飲片、標準湯劑和配方顆粒之間主要化學成分的可追溯性，為決明子配方顆粒生產全過程質量控制提供參考依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-20AT高效液相色譜儀，CPA225D型電子天平(賽多利斯公司)，R502B旋轉蒸發儀(上海申生科技有限公司)，DK-98-IIA電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設備有限公司)，shunliu-12N冷凍干燥機(南京順流儀器有限公司)。乙腈為色譜純(美國Fisher公司)，水為純化水，其他試劑均為分析純。

1.2 對照品 決明子(鈍葉決明)配方顆粒由神威藥業集團有限公司提供。橙黃決明素(批號：111900-202006)，大黃素(批號：110756-201913)，蘆薈大黃素(批號：110795-202011)，大黃酚(批號：110796-201922)，均購自中國食品藥品檢定研究院。

1.3 藥材、標準湯劑與配方顆粒

1.3.1 藥材 15批決明子藥材購自浙江、四川、安徽3個產區，經原河北省藥品檢驗所孫寶惠老師鑒定均為鈍葉決明CassiaobtusifoliaL.的干燥成熟種子。15批藥材的產地信息見表1。

表1 15批藥材產地信息

1.3.2 標準湯劑 根據《中藥配方顆粒質量控制與標準制定技術要求》及《醫療機構中藥煎藥室管理規范》中相關規定，確定決明子標準湯劑制備工藝為：取決明子飲片100 g，加水煎煮兩次，一煎加8倍水，浸泡30 min，煎煮30 min，過200目篩，立即冷卻至室溫；二煎加6倍水，煎煮 20 min，過200目篩，立即冷卻至室溫，合并2次煎液，低溫濃縮至密度為1.02～1.08(65 ℃)，冷凍干燥，即得。

1.3.3 配方顆粒 依據標準湯劑出膏率、特征圖譜、含量等參數要求進行工藝優化，確定決明子配方顆粒制備工藝為取決明子飲片200 g，加水提取兩次，第一次加飲片量8倍水，煎煮1 h，200目篩濾過，第二次加飲片量6倍水，煎煮30 min，200目篩濾過。80 ℃以下真空濃縮至相對密度為1.03～1.07(65 ℃)的濃縮液，過300目篩，噴霧干燥。膏粉加輔料適量，混勻，干法制粒，制成決明子配方顆粒。

2 方法與結果

2.1 決明子飲片、標準湯劑、配方顆粒特征圖譜建立

2.1.1 色譜條件 Agilent TC C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相：以乙腈為流動相A，以0.1%乙酸溶液為流動相B進行梯度洗脫，0～10 min 17%A→28%A，10～15 min 28%A→34%A，15～25 min 34%A→55%A，25～30 min 55%A→80%A，30～35 min 80%A；流速：1.0 mL/min；檢測波長：290 nm；進樣量：10 μL。理論板數按橙黃決明素峰計算應不低于5000。

2.1.2 對照品溶液的制備 取橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃素和大黃酚對照品適量，加70%甲醇制成每1 mL含橙黃決明素100 μg、蘆薈大黃素 20 μg、大黃素40 μg和大黃酚10 μg的混合溶液，作為對照品參照物溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備

2.1.3.1 決明子飲片供試品溶液制備 取本品粉末(過四號篩)約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理 30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，作為飲片供試品溶液。

2.1.3.2 標準湯劑、配方顆粒供試品溶液制備 取本品粉末約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，作為標準湯劑供試品溶液。

2.2 方法學考察

2.2.1 精密度 取同一批決明子標準湯劑，按2.1.3.2項下供試品制備方法處理，按2.1.1項下連續進樣6次，以橙黃決明素峰為參照物，經計算特征峰相對保留時間的RSD為0.00%～0.11%，相對峰面積的RSD為0.00%～1.02%，表明儀器精密度良好。

2.2.2 重復性 取同一批決明子標準湯劑6份，按2.1.3.2項下進行處理，按2.1.1項下測定。以橙黃決明素峰為參照物，經計算特征峰相對保留時間的RSD為0.00%～0.13%之間，相對峰面積的RSD為0.00%～1.07%，表明該方法重復性良好。

2.2.3 穩定性 取同一批決明子標準湯劑按2.1.3.2項下進行處理，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h按2.1.1項下進樣測定。以橙黃決明素峰為參照物，經計算特征峰相對保留時間的RSD為0.00%～0.14%，相對峰面積的RSD為0.00%～0.86%，表明樣品在12 h內穩定。

2.3 樣品測定 取15批決明子飲片、決明子標準湯劑、決明子配方顆粒，按2.1.1項下進樣檢測，色譜圖如圖1～3所示。

圖1 決明子飲片特征圖譜

圖2 決明子標準湯劑特征圖譜

圖3 決明子配方顆粒特征圖譜

2.4 特征峰指認 通過比較供試品與對照品的保留時間并對色譜峰進行標定，確認了4個特征峰，分別為橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃素和大黃酚。如圖4所示。

R：決明子標準湯劑對照特征圖譜；S：混合對照品；峰3：橙黃決明素；峰4：蘆薈大黃素；峰6：大黃素；峰7：大黃酚

2.5 相似性分析 將決明子飲片、標準湯劑、配方顆粒對照圖譜進行比較，如圖5所示。并導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”(2012版)計算相似度，見表2。結果表明7個特征成分在決明子飲片→標湯→顆粒的制備過程中得到保留。通過計算，決明子飲片、標準湯劑、配方顆粒對照圖譜相似度在0.90～1.00之間，表明決明子飲片、標準湯劑、配方顆粒有較好的相似性。

圖5 決明子飲片(S3)、標準湯劑(S2)和配方顆粒(S1)對照圖譜比較圖

表2 決明子飲片、標準湯劑、配方顆粒對照圖譜相似度計算結果

3 討論

3.1 流動相的選擇 本研究以乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%乙酸溶液、乙腈-0.3%乙酸溶液為流動相進行梯度洗脫，發現采用乙腈-0.1%乙酸溶液進行洗脫時，特征峰的峰形及分離度均較好。嘗試甲醇和乙腈，發現乙腈洗脫能力更強，特征圖譜中特征峰的分布及峰形更好，最終選擇乙腈-0.1%乙酸溶液為流動相。

3.2 波長選擇 經全波長掃描發現，樣品中特征峰在290 nm處均有較大吸收，各色譜峰響應及分離度均較好，能反映出決明子中的主要成分，因此選擇290 nm為檢測波長。

3.3 供試品制備方法考察 通過比較水、30%、50%、70%甲醇等不同提取溶劑，發現采用70%甲醇超聲處理，圖譜中特征峰數量較多，響應值均較高。超聲與回流提取方式考察，發現超聲與回流效果無太大差別，因此選擇操作簡單的超聲提取法。

通過相似性研究發現決明子配方顆粒與飲片、標準湯劑特征圖譜相似性高，化學成分基本一致，能準確的反映飲片、標準湯劑和配方顆粒之間主要化學成分的可追溯性，為決明子配方顆粒生產過程的質量控制提供參考依據。