中晚期非小細胞肺癌患者外周血淋巴細胞亞群特點分析

李雅楠 張志 張玉娜 白明明 鄭凡 邢江濤 黃懷鵬 吳克峰

在全球范圍內,肺癌的發病率僅次于乳腺癌,據統計,2020年約有180萬人死于肺癌,位居癌癥相關死亡的首位[1]。非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)約占肺癌的85%[2],其最常見的組織類型為腺癌和鱗癌,分別占50%和40%[3]。研究表明,晚期NSCLC患者外周血中存在循環腫瘤細胞[4]。免疫監視功能下降有助于循環腫瘤細胞逃避免疫細胞的殺傷作用,并在靶器官中形成轉移性病變[5]。本研究觀察NSCLC患者外周血淋巴細胞亞群的分布特點,報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2022年1月至2023年4月就診于石家莊平安醫院腫瘤學部,符合入組標準的肺癌患者,收集治療前1 d患者的外周靜脈血及臨床病例資料。本研究經石家莊平安醫院醫學倫理委員會批準(批件號:202112)。

1.2 納入標準 (1)無惡性腫瘤病史;(2)1個月內新發肺占位患者;(3)符合中華醫學會腫瘤學分會肺癌臨床診療指南(2021版)肺癌診斷標準[6];(4)未接受肺癌相關手術、化療、放療、免疫治療、靶向治療、類固醇激素治療;(5)經支氣管鏡咬檢或經皮穿刺肺組織活檢,病理證實為肺部原發腫瘤,且組織病理類型為鱗癌或腺癌;(6)無急性及嚴重播散性感染性疾病;(7)無自身免疫性疾病;(8)排除合并其他部位原發腫瘤者。

1.3 主要儀器與試劑 CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP-Cy5.5/CD4-PC7/CD19-APC/ CD8-APC-Cy7熒光單克隆抗體試劑盒購自天津曠博公司,溶血素購自美國Becton Dickinson公司。流式細胞儀為美國Becton Dickinson公司FACS Canto Ⅱ流式細胞儀,每樣本管獲取10萬個活細胞,流式分析軟件為BD Diva 8.0.2。血液分析儀為日本Sysmex公司XS-1000i全自動五分類血液分析儀。

1.4 標本收集及實驗方法 真空采血管采集患者外周靜脈血2 mL。按照CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP-Cy5.5 /CD4-PC7/CD19-APC/CD8-APC-Cy7熒光單克隆抗體試劑盒說明書進行樣本處理,然后上機檢測。首先,建立CD45/SSC散點圖,去除碎片,設置不規則門圈出CD45高表達、SCC低表達的淋巴細胞。選擇顯示淋巴細胞門細胞,分別設置CD3/SSC散點圖、CD3/CD4散點圖、CD3/CD8散點圖、CD3/CD16+56散點圖和CD3/CD19散點圖。在CD3/SSC散點圖中,設置方形門將表達該抗原的陽性細胞群圈出,即總T細胞占淋巴細胞的百分比。在CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD16+56和CD3/CD19散點圖中,設置四象限門,將表達相應抗原的陽性細胞圈出,即CD4+T、CD8+T、NK、B細胞占淋巴細胞的百分比。各淋巴亞群絕對值(個/μL)=各淋巴細胞占淋巴細胞的百分比×血常規淋巴細胞絕對值。見圖1。

圖1 外周血淋巴細胞亞群流式檢測

2 結果

2.1 一般資料 本研究共納入93例新發肺癌病例,其中男74例,女19例;年齡41～87歲,平均年齡(67.02±8.99)歲。經組織病理學證實,42例(45.16%)為鱗癌,51例(54.84%)為腺癌。見表1。

表1 93例新發肺癌病例的臨床特征

2.2 肺癌患者外周血淋巴細胞亞群特征

2.2.1 58.06%的病例外周血淋巴細胞比例低于正常值下限,其中腺癌病例中,淋巴細胞比例低于正常值下限者占52.94%,鱗癌病例中,淋巴細胞比例低于正常值下限者占64.29%,差異無統計學意義(P=0.30);35.48%的病例淋巴細胞絕對值低于正常值下限,其中腺癌病例中,淋巴細胞絕對值低于正常值下限者占33.33%,鱗癌病例中,淋巴細胞絕對值低于正常者占38.10%,差異無統計學意義(P=0.67)。見表2。

2.2.2 流式分析顯示,與健康人群數據相比,總T細胞比例高于正常值上限者占7.53%,低于正常值下限者占7.53%。細胞毒T細胞比例高于正常值上限者占7.53%,低于正常值下限者占7.53%。輔助T細胞比例高于正常值上限者占21.51%,低于正常值下限者占9.68%。總B細胞比例高于正常值上限者占7.53%,低于正常值下限者占16.13%。NK細胞比例高于正常值上限者占3.23%,低于正常值下限者占4.30%。腺癌和鱗癌在以上指標的分布上差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.2.3 總T細胞絕對值低于正常值下限者占60.22%,細胞毒T細胞絕對值低于正常值下限者占64.52%,輔助T細胞絕對值低于正常值下限者占58.06%,總B細胞絕對值低于正常值下限者占44.09%。腺癌和鱗癌在以上指標的分布上差異均無統計學意義(P>0.05)。NK細胞絕對值低于正常值下限者占32.26%,其中21.57%的腺癌病例NK細胞絕對值低于正常值下限者,45.24%的鱗癌病例NK細胞絕對值低于正常值下限者,差異有統計學意義(P=0.02)。見表2。

2.3 不同病理類型患者外周血淋巴細胞亞群具體數值的分布情況:腺癌患者的總T細胞比例顯著低于鱗癌患者的總T細胞比例(P=0.047),腺癌患者的NK細胞比例顯著高于鱗癌患者的NK細胞比例(P=0.0025),腺癌患者的NK細胞絕對值顯著高于鱗癌患者的NK細胞絕對值(P=0.02),其他淋巴細胞亞群檢測指標差異無統計學意義(P>0.05)。見圖2。

3 討論

免疫狀態與宿主腫瘤的發生發展密切相關。健康人群的外周血可以檢測到多種免疫細胞,包括T細胞、B細胞和NK細胞,它們在免疫監視、免疫抑制和殺傷效應等方面發揮關鍵作用[5]。研究發現,循環腫瘤細胞在進入外周循環后可抱團形成循環腫瘤細胞簇[7]。循環腫瘤細胞簇的形成能提高其侵襲轉移能力,程序性死亡受體配體1(programmed cell death ligand 1, PD-L1)在肺癌細胞的表達能夠使其逃離免疫細胞的殺傷作用,從而產生免疫耐受[8]。循環腫瘤細胞與NSCLC患者外周血免疫監視功能下降有關。免疫監視功能降低有助于其逃避免疫細胞的殺傷作用,并在靶器官中形成轉移性病變[5]。因此,機體免疫細胞亞群在數量或比例上的變化至關重要。

本研究結果顯示,大部分中晚期NSCLC患者在就診初期外周血淋巴細胞亞群比例正常(總T細胞84.95%、總B細胞76.34%、NK細胞92.47%),但由于淋巴細胞占白細胞的比例降低和絕對值減少,因此總T細胞絕對值、總B細胞絕對值和NK細胞絕對值相應降低。這提示中晚期NSCLC患者外周血免疫功能低下,與腫瘤的發生發展密切相關。

T細胞是具有高度異質性的細胞群體,其中CD4+T細胞和CD8+T細胞占比最大。本研究發現,在就診初期,中晚期肺癌患者外周血已存在CD4+T和CD8+T細胞比例失衡。研究報道,腫瘤間質中CD4+/CD8+T細胞的浸潤與NSCLC患者的預后及生存率密切相關[9]。NSCLC腫瘤部位CD4+T細胞數量較鄰近正常肺組織的CD4+T細胞數量顯著增多,以CD4+Foxp3+調節性T細胞(regulatory T cell,Tregs)細胞為主。CD8+T細胞是抑制肺癌生長的關鍵細胞,其生物學效應被CD4+Foxp3+Tregs細胞抑制[10]。可見,CD4+/CD8+比例失衡可能破壞免疫系統網絡,促進腫瘤細胞的免疫逃逸或免疫耐受。

NK細胞稱為自然殺傷細胞,起源于共同淋巴祖細胞,與T、B細胞不同,它們無需抗原預先致敏,可以直接殺傷某些腫瘤細胞,也可以通過ADCC效應定向殺傷IgG抗體特異性結合的腫瘤細胞,是執行機體免疫監視作用的重要效應細胞[11]。NK細胞還可以通過與其他免疫細胞相互作用來調節免疫反應,例如將凋亡靶細胞的抗原交叉提呈給特定的樹突細胞,以及通過產生γ-干擾素來啟動CD4+T細胞[12]。本研究表明,腺癌患者的NK細胞比例和絕對值均顯著高于鱗癌患者水平。流行病學顯示,石家莊市肺腺癌和肺鱗癌的5年生存率分別為40.06%和24.51%[13]。提示高NK細胞狀態可能是腺癌患者的保護因素。文獻報道,循環腫瘤細胞陽性患者外周血NK細胞比例顯著低于循環腫瘤細胞陰性患者相應水平[5]。免疫紊亂導致腫瘤細胞擴散到循環中,逃避免疫細胞的殺傷,并遷移到靶器官后形成轉移灶,最終導致疾病進展和生存率低下。

綜上所述,中晚期NSCLC患者就診初期外周血T、B、NK細胞比例多正常,但各亞群細胞絕對值減低,CD4+/CD8+比例失衡,腺癌患者NK細胞水平顯著高于鱗癌患者NK細胞水平。由于肺癌患者早期臨床癥狀不明顯,大部分患者出現臨床癥狀時已處于晚期。