歐陽婉洳,李洪淼,張 利,謝淑玲,劉嘉琳
(遼寧農業職業技術學院,遼寧 營口 115009)
黃芪有“補氣之長”、“補氣諸藥之最”的美譽,它為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根,具有補氣升陽、固表止汗等作用[1]。始載于《神農本草經》,列為上品。黃芪含多糖類、皂苷類、黃酮類、氨基酸類等化合物[2],此外還含硒、鋅、銅等多種微量元素?,F代研究表明,黃芪多糖是黃芪發揮生物活性和藥理作用的重要物質之一[3],具有抗腫瘤、保護心腦血管、提高免疫功能、保護肺功能、調節血壓、抗衰老等藥理作用[4-5]。黃芪多糖的提取方法較多,其中超聲輔助法是研究的熱點。它是利用超聲波產生的空化作用使細胞內的各種成分充分溶出,因此能大大提高物質的提取效果。本實驗旨在探索超聲輔助法提取黃芪多糖的最佳工藝,為黃芪多糖的大規模生產提供參考。
黃芪飲片,購自遼寧丹東佰福藥業有限公司。蒸餾水,來自學院制水實訓室。
KQ-400KDE超聲波提取儀,昆山市超聲儀器有限公司;LH-T32手持式折射儀,杭州陸恒生物科技有限公司。
準確稱取黃芪飲片10 g,置于三角瓶中,按一定料水比加入蒸餾水,浸泡后將三角瓶放入超聲提取儀進行多糖的提取。采用單因素試驗,分別研究提取次數、料水比、提取溫度、提取時間及超聲功率對多糖提取的影響,用手持式折射儀測得的提取液總糖度為衡量指標。每組實驗設三個重復,取平均值。在單因素試驗基礎上,以提取溫度(A)、提取功率(B)、提取時間(C)、料水比(D)為因素,以提取液的糖度值為衡量指標,采用四因素三水平的正交設計,優化黃芪多糖的提取工藝。
稱取10 g黃芪飲片,按料水比1∶10加入水,浸泡。設置超聲功率為60%、60 ℃下提取60 min,分別提取三次,每次提取結束靜置測提取液的糖度值,實驗結果如圖1所示。由圖1可見,糖度值隨提取次數的增加下降很快,當提取到第三次時,糖度值為0,說明多糖成分已全部溶入到水中。因此,黃芪經設備提取2次即可。

圖1 提取次數對糖度值的影響Fig.1 Effect of extraction times on sugar content
將料水比設置為1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30,分別在超聲功率60%、60 ℃下提取60 min,用糖度計測各提取液的糖度值,實驗結果如圖2所示。由圖2可知,糖度值隨料水比的增大而降低,但兩者不是線性關系。說明料水比太低不利于多糖的溶出,料水比過高對多糖的溶出影響較小。從多糖得率、提取液量等方面綜合考慮,選擇1∶10的料水比比較合適。

圖2 料水比對糖度值的影響Fig.2 Effect of solid-liquid ratio on sugar content
在超聲功率60%、料水比1∶10的條件下,分別將超聲波提取儀的溫度設置為40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃,提取60 min后靜置測各提取液的糖度值,如圖3所示。由圖3可知,在40~60 ℃范圍內,提取液的糖度值隨溫度升高而增大,當溫度超過60 ℃時,再升高提取溫度,糖度值無變化,說明此時多糖已全部溶出。因此,在提取黃芪時,提取溫度最低不得低于60 ℃??紤]耗能的因素,確定黃芪的最佳提取溫度為60 ℃。

圖3 提取溫度對糖度值的影響Fig.3 Effect of extraction temperature on sugar content
黃芪和水按料水比1∶10加入,浸泡。將超聲功率分別設為40%、50%、60%、70%、80%、90%,60 ℃下提取60 min,靜置后測提取液的糖度值,結果如圖4所示。由圖4可知,當功率在40%~60%時,提取液的糖度值較小,而且變化甚微。當功率為70%時,糖度值達到最大,隨著超聲功率的增大提取液的糖度值略有下降,原因是超聲功率過大對多糖產生了破壞作用。因此,用超聲波提取儀提取黃芪時,最佳提取功率為70%。

圖4 提取功率對糖度值的影響Fig.4 Effect of extraction power on sugar content
在溫度為60 ℃、超聲功率70%、料水比1∶10的條件下,將提取時間分別設置為20 min、30 min、40 min、50 min、60 min、70 min、80 min,分別測不同提取時間提取液的總糖度,實驗結果如圖5所示。從圖5可知,在20~50 min內,黃芪提取液的糖度值隨提取時間的延長而增大。當提取時間超過50 min時,糖度值不再增加,說明藥物當中的糖類成分已充分溶出。因此,為了降低生產成本,黃芪的提取時間應為50 min。

圖5 提取時間對糖度值的影響Fig.5 Effect of extraction time on sugar content
在單因素試驗基礎上,以提取溫度、提取功率、提取時間、料水比為因素,設計四因素三水平的正交試驗,以提取液的糖度值為指標,優化黃芪多糖的提取工藝。因素和水平見表1,實驗結果見表2。

表1 正交試驗因素水平表Table 1 Orthogonal test factor level table

表2 正交試驗結果Table 2 Results of orthogonal test
由表2可知,四因素中,對提取液糖度值影響最大的是料水比,影響最小的是提取溫度,提取的最佳工藝因素水平是A1B3C3D1,即提取溫度60 ℃,提取功率70%,提取時間70 min,料水比為1∶5。在最優工藝條件下,提取液的糖度值最高,可達5.2。
本研究通過正交試驗對黃芪多糖的超聲輔助提取工藝進行了優化,結果表明料水比,提取溫度、提取功率、提取時間均能影響黃芪多糖的溶出,最佳工藝參數是:提取溫度60 ℃,提取功率70%,提取時間70 min,料水比為1∶5。
該方法是利用超聲波的空化作用使提取溶劑進入細胞,加快有效成分的釋放和溶出。為避免超聲波破壞多糖結構造成多糖得率降低,應注意提取時間、提取溫度、超聲功率的控制。與傳統提取方法相比,超聲輔助提取技術具有快速、低溫、節能又環保等優點,可用于黃芪多糖的工業化生產。