miR-146、miR-26水平與支氣管哮喘患者氣道炎癥及氣道重塑的關系

董揚 傅應亞 方偉

作者簡介：董揚（1987.4-），女，重慶人，碩士，主治醫師，主要從事慢性阻塞性肺部疾病、支氣管哮喘研究

通訊作者：方偉（1981.3-），男，重慶人，本科，主治醫師，主要從事慢性阻塞性肺病、支氣管哮喘、肺癌研究

摘要：目的? 探討miR-146、miR-26在支氣管哮喘患者氣道炎癥及氣道重塑中的作用及機制。方法? 收集2021年3月-2023年1月在重慶市南岸區人民醫院就診的75例支氣管哮喘患者（哮喘組）和25名健康體檢者（對照組），檢測血液和呼吸中的相關分子，用HRCT掃描測量氣道的形狀和大小。分析miR-146、miR-26水平與哮喘嚴重程度、氣道炎癥及氣道重塑的相關性。結果? 哮喘組miR-146、miR-26水平低于對照組，且隨著哮喘嚴重程度的增加而降低（P＜0.05）。哮喘組FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數均高于對照組，且隨著哮喘嚴重程度的增加而升高（P＜0.05）。miR-146、miR-26水平與FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數呈負相關（P＜0.05）。結論? miR-146、miR-26水平與支氣管哮喘患者氣道炎癥及氣道重塑有密切關系，可能通過調節T2型免疫反應和一氧化氮合成酶表達參與哮喘的發生和發展。測定外周血中miR-146、miR-26水平可能有助于評估哮喘患者的病情和治療效果。

關鍵詞：支氣管哮喘；微小RNA；呼出氣一氧化氮；嗜酸性粒細胞；氣道重塑

中圖分類號：R526.2+5? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.09.025

文章編號：1006-1959（2024）09-0130-04

Relationship Between miR-146， miR-26 Levels and Airway Inflammation，

Airway Remodeling in Patients with Bronchial Asthma

DONG Yang1，FU Ying-ya2，FANG Wei1

（1.Department of Respiratory Medicine，Chongqing Nan'an District People's Hospital，Chongqing 400000，China;

2.Department of Respiratory Medicine，Chongqing Seventh People's Hospital，Chongqing 400000，China）

Abstract：Objective? To investigate the role and mechanism of miR-146， miR-26 in airway inflammation and airway remodeling in patients with bronchial asthma.Methods? A total of 75 patients with bronchial asthma （asthma group） and 25 healthy subjects （control group） were collected from March 2021 to January 2023 in Chongqing Nan'an District People's Hospital. The related molecules in blood and respiration were detected， and the shape and size of the airway were measured by HRCT scan. The correlation between miR-146， miR-26 levels and asthma severity， airway inflammation and airway remodeling was analyzed.Results? The levels of miR-146 and miR-26 in the asthma group were lower than those in the control group， and decreased with the increase of asthma severity （P<0.05）. The levels of FeNO， EOS%， IgE and HRCT parameters in the asthma group were higher than those in the control group， and increased with the increase of asthma severity （P<0.05）. The levels of miR-146 and miR-26 were negatively correlated with FeNO level， EOS%， IgE level and HRCT parameters （P<0.05）.Conclusion? The levels of miR-146， miR-26 are closely related to airway inflammation and airway remodeling in patients with bronchial asthma， which may be involved in the occurrence and development of asthma by regulating T2 immune response and nitric oxide synthase expression. The determination of miR-146 and miR-26 levels in peripheral blood may be helpful to evaluate the condition and therapeutic effect of asthma patients.

Key words：Bronchial asthma;MicroRNA;Exhaled nitric oxide;Eosinophils;Airway remodeling

支氣管哮喘（bronchial asthma， BA）是一種常見的慢性氣道炎癥性疾病，以氣道高反應性和可逆性氣流受限為特征[1]。哮喘的發病機制尚不完全清楚，但認為與遺傳、環境、免疫等多種因素有關。目前，哮喘的治療主要是控制氣道炎癥和緩解支氣管痙攣，但仍有部分患者難以達到理想的控制水平。因此，尋找新的哮喘發病機制和治療靶點是當前哮喘研究的重要方向。微小RNA（microRNA， miRNA）是一類長度為18～25個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，通過與靶基因的3'非翻譯區（3'untranslated region， 3'UTR）結合，導致靶基因的降解或轉錄后抑制[2-4]。miRNA參與了多種生物學過程，包括細胞分化、增殖、凋亡、代謝、免疫調節等。近年來，越來越多的證據表明，miRNA在哮喘的發生和發展中發揮重要作用[5]。miR-146和miR-26是兩種在哮喘中表達異常的miRNA。miR-146在呼吸道上皮細胞、肺泡巨噬細胞、嗜酸性粒細胞等細胞中表達，可以調節T2型免疫反應表達[6，7]和氣道平滑肌中炎癥介質的表達。miR-26在肺泡上皮細胞、平滑肌細胞等細胞中表達，可以抑制炎癥因子和平滑肌收縮。這些細胞和分子都與哮喘患者的氣道炎癥和氣道重塑有關。氣道重塑（airway remodeling）是指哮喘患者長期存在的氣道結構改變，包括氣道壁增厚、平滑肌增生等[8，9]。目前，關于miR-146和miR-26水平與哮喘患者氣道重塑的關系的報道較少。本研究旨在探討miR-146和miR-26水平與支氣管哮喘患者氣道炎癥及氣道重塑的關系，為哮喘的發病機制和治療靶點提供新的線索。

1資料與方法

1.1一般資料? 采用前瞻性隊列研究設計，收集2021年3月-2023年1月在重慶市南岸區人民醫院呼吸科就診的75例支氣管哮喘患者（哮喘組）和25名健康體檢者（對照組）。哮喘組患者均符合全球哮喘防治倡議（Global Initiative for Asthma， GINA）2022版診斷標準。根據哮喘控制水平分為輕度、中度和重度哮喘。哮喘組納入標準：①符合支氣管哮喘診斷標準；②年齡18～65歲；③未使用任何抗哮喘藥物或僅使用低劑量吸入性皮質類固醇（ICS）治療；④無其他呼吸系統、心血管系統、消化系統、內分泌系統等嚴重合并癥；⑤無急性感染或發熱；⑥無孕婦或哺乳期婦女；⑦無吸煙史或戒煙超過1年。排除標準：拒絕參加本研究或中途退出者。對照組無呼吸系統疾病史，無吸煙史，無過敏性疾病史，無慢性炎癥性疾病史，無使用任何藥物史。兩組年齡、性別、身高、體重比較，差異無統計學意義（P＞0.05），研究可比，見表1。本研究經過本院倫理委員會審批，并獲得所有患者的知情同意。

1.2方法

1.2.1測定血液指標? 外周血中miR-146、miR-26的表達水平采用EDTA抗凝法采集患者空腹靜脈血5 ml，離心后取上清血漿，用TRIzol試劑提取總RNA，用miScriptⅡ RT試劑盒進行逆轉錄，用miScript SYBR Green PCR試劑盒進行實時熒光定量PCR（qRT-PCR），以U6為內參基因，以2-△△Ct法計算相對表達水平。血清嗜酸性粒細胞百分比（EOS%）、血清IgE水平采用EDTA抗凝法采集患者空腹靜脈血2 ml，離心后取上清血清，用全自動血細胞分析儀（Sysmex XN-9000公司，日本）測定EOS%，用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定IgE水平。

1.2.2測定呼出氣一氧化氮（FeNO）水平? 采用NIOX MINO呼出氣一氧化氮分析儀（Aerocrine AB公司，瑞典）按照廠家說明書操作，讓患者在儀器的口罩上吹氣，儀器會顯示FeNO的數值。按照說明書的要求，重復測量3次，取平均值作為最終結果作為患者的FeNO水平。

1.2.3患者的氣道重塑程度評估? 采用64排螺旋CT掃描儀（GE Healthcare公司，美國）進行高分辨率計算機斷層掃描（HRCT），按照標準程序掃描患者的胸部，選擇第三肋間隙處的右肺上葉后段支氣管作為代表性氣道進行分析，測量其氣道壁厚度（AWT）、氣道壁面積（WA%）、氣道內徑（AiD）等參數，公式如下：WT%=WT/（WT+ID）×100%；WA%=WA/（WA+π×ID2/4）×100%；ID%=ID/[（WA+π×ID2/4）/π]1/2×100%。

1.3觀察指標? 主要觀察指標為外周血中miR-146、miR-26的表達水平；次要觀察指標為FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數。

1.4統計學方法? 采用SPSS 22.0軟件進行數據分析。計量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗或方差分析；計數資料以（n）和（%）表示，組間比較采用？字2檢驗或Fisher精確概率法。相關性分析采用Spearman秩相關系數。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1 miR-146、miR-26水平與哮喘嚴重程度的關系? 哮喘組患者的miR-146、miR-26水平低于對照組，且隨著哮喘嚴重程度的增加而降低（P＜0.05）。輕度哮喘組患者的miR-146、miR-26水平低于對照組，中度哮喘組患者的miR-146、miR-26水平低于輕度哮喘組（P＜0.05），重度哮喘組患者的miR-146、miR-26水平低于中度哮喘組（P＜0.05），見表2。

2.2 FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數與哮喘嚴重程度的關系? 哮喘組患者的FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數均高于對照組，且隨著哮喘嚴重程度的增加而升高（P＜0.05）。輕度哮喘組患者的FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數高于對照組，中度哮喘組患者的FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數高于輕度哮喘組，重度哮喘組患者的FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數高于中度哮喘組（P＜0.05），見表3。

2.3 miR-146、miR-26水平與FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數的相關性? Spearman秩相關分析顯示，miR-146、miR-26水平與FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數呈負相關（P＜0.05），見表4。

3討論

miR-146是一種在呼吸道上皮細胞、肺泡巨噬細胞、嗜酸性粒細胞等細胞中表達的miRNA，可以調節T2型免疫反應表達和調節氣道平滑肌中炎癥介質的表達。T2型免疫反應是哮喘的主要免疫機制之一，涉及Th2細胞、IgE、嗜酸性粒細胞等因子[10]。既往研究發現，miR-146可以通過靶向IL-1β、IRAK1、TRAF6等基因抑制T2型免疫反應[11-12]，通過靶向環氧化酶-2 （COX-2）和IL-1β基因來調節氣道平滑肌中炎癥介質的表達[13-15]。miR-26是一種在肺泡上皮細胞、平滑肌細胞等細胞中表達的miRNA，可以可以抑制上皮細胞的增值及遷移和平滑肌收縮[16]。前人研究發現[17，18]，miR-26可以通過靶向IL-6、THF-α、hs-CBP基因抑制炎癥因子和平滑肌收縮。本研究發現，支氣管哮喘患者的外周血中miR-146、miR-26水平低于對照組，且隨著哮喘嚴重程度的增加而降低。同時，miR-146、miR-26水平與哮喘患者的氣道炎癥及氣道重塑指標呈負相關。這些結果提示，miR-146、miR-26水平與支氣管哮喘患者氣道炎癥及氣道重塑有密切關系，可能通過調節T2型免疫反應和一氧化氮合成酶表達參與哮喘的發生和發展。

哮喘患者的外周血中miR-146、miR-26水平顯著降低，且與FeNO水平、EOS%、IgE水平呈負相關，這可能說明，miR-146在哮喘患者中失去了對T2型免疫反應和氣道平滑肌中炎癥介質的抑制作用，從而導致了氣道炎癥的加重。miR-26在哮喘患者中失去了對T2型免疫反應和平滑肌收縮的抑制作用，從而導致了氣道炎癥和氣流受限的加重。

氣道重塑是指哮喘患者長期存在的氣道結構改變，包括氣道壁增厚、平滑肌增生、黏液腺體增生、黏液分泌增加、血管增生等[19]。氣道重塑會導致氣道高反應性和氣流受限的持久化，并影響哮喘患者的預后[20]。本研究采用HRCT評估患者的氣道重塑程度，發現哮喘患者的AWT、WA%顯高于對照組，AiD低于對照組，且隨著哮喘嚴重程度的增加而變化，說明HRCT是一種有效的評估氣道重塑的方法。本研究還發現，miR-146、miR-26水平與AWT、WA%呈負相關，與AiD呈正相關。這可能說明，miR-146、miR-26水平與氣道重塑有關，可能通過影響上述細胞和分子的表達或功能參與氣道重塑的過程。

本研究有一些局限性，如樣本量較小，未考慮患者的吸煙史、過敏原暴露史等可能影響結果的因素，未進行動物實驗或體外實驗驗證miR-146、miR-26與靶基因之間的因果關系等。今后需要進一步擴大樣本量，控制混雜因素，進行多中心研究，以及進行實驗室研究，以驗證本研究的結論，并探討miR-146、miR-26在哮喘治療中的潛在價值。

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收稿日期：2023-06-01；修回日期：2023-06-10

編輯/肖婷婷