側孢短芽胞桿菌JYC 688鑒定及抑菌促生特性研究

摘要

馬鈴薯瘡痂病是由多種致病鏈霉菌侵染引起薯塊表面結痂導致薯塊外觀品質下降的病害，防控困難，生物防治是其主要防治措施之一。篩選具有良好拮抗作用的生防菌，可為馬鈴薯病害的生物防治提供優良的微生物資源。本研究從健康馬鈴薯植株根際土壤中分離獲得JYC"688菌株，采用平板對峙和紙碟法篩選驗證菌株拮抗性，結合形態學觀察、生理生化特性測定及分子生物學手段確定其種屬地位，并檢測其產生水解酶和嗜鐵載體的能力。結果表明，菌株JYC"688是側孢短芽胞桿菌Brevibacillus"laterosporus，其菌株培養液能夠顯著抑制引起馬鈴薯瘡痂病的酸性瘡痂鏈霉菌Streptomyces"acidiscabies和腫脹瘡痂鏈霉菌S.turgidiscabies的生長，抑菌圈直徑分別為27.86"mm和31.90"mm;其對馬鈴薯晚疫病菌Phytophthora"infestans、早疫病菌Alternaria"alternata、黑痣病菌Rhizoctonia"solani也具有良好的抑制活性;菌株JYC"688能夠分泌β1，3葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶、嗜鐵素等多種抗菌相關物質，可溶解大豆卵磷脂、碳酸鈣、碳酸鎂3種難溶性化合物，有利于磷、鈣、鎂3種元素的釋放，是一株具有開發潛力的生防菌。

關鍵詞

側孢短芽胞桿菌;"鑒定;"抑菌特性;"促生特性

中圖分類號：

S"432.1

文獻標識碼："A

DOI："10.16688/j.zwbh.2022730

Identification"of"Brevibacillus"laterosporus"JYC"688"against"potato"common"scab"and"its"growth"promoting"characteristics

HUANG"Xun1，"FENG"Jiawen2，"JIN"Chunlin2，"GAO"Jiawei2，"DENG"Linmei1，ZHANG"Xiaofang1，"YANG"Yanli1*，"LIU"Xia1*

（1."College"of"Plant"Protection，"Yunnan"Agricultural"University，""Kunming"650201，"China;"2."Agriculture"

and"Rural"Affairs"Bureau"of"Malong"District，"Qujing"City，"Yunnan"Province，"Qujing"655199，"China）

Abstract

Potato"common"scab"（PCS）"disease"is"a"soilborne"disease"caused"by"a"variety"of"pathogenic"Streptomyces"spp.，"which"lead"to"the"surface"scab"and"the"deterioration"of"the"appearance"quality"of"potato"tuber."Screening"biocontrol"bacteria"with"good"antagonistic"effects"may"provide"excellent"microbial"resources"for"biological"control"of"potato"diseases."In"this"study，strain"JYC"688"was"isolated"from"the"rhizosphere"soil"of"healthy"potato"plants，"its"antagonistic"activity"was"determined"by"plate"confrontation"and"paper"plate"methods，"its"classification"status"was"identified"using"morphological"observation，"physiological"and"biochemical"characterization，"and"molecular"biology"methods，"its"ability"to"produce"hydrolytic"enzymes"and"iron"carriers"was"also"tested."The"results"showed"that"strain"JYC"688"was"Brevibacillus"laterosporus，"and"its"liquid"fermentation"could"significantly"inhibit"the"growth"of"Streptomyces"acidiscabies"and"S.turgidiscabies，"with"inhibition"zone"diameters"of"27.86"mm"and"31.90"mm，"respectively."It"also"had"good"inhibitory"activity"against"Phytophthora"infestans，"Alternaria"alternata"and"Rhizoctonia"solani."The"strain"JYC"688"could"secrete"β1，3"glucanase，"cellulase，"protease，"ferritin，"and"other"antibacterial"related"substances，"and"dissolve"three"insoluble"compounds"of"soybean"lecithin，"calcium"carbonate"and"magnesium"carbonate，"which"is"conducive"to"the"release"of"three"elements"of"phosphorus，"calcium"and"magnesium."In"conclusion，"the"strain"JYC"688"is"a"potential"biocontrol"bacterium"with"good"research"value.

Key"words

Brevibacillus"laterosporus;"identification;"antimicrobial"properties;"growth"promoting"characteristics

馬鈴薯瘡痂病（potato"common"scab，PCS）是一種由鏈霉菌Streptomyces"spp.侵染引起的土傳病害，發病薯塊表面結痂導致薯塊外觀品質下降。由于其病原菌種類多、組成復雜，防控較為困難，生物防治是其主要防治措施之一［1］。植物病害的生物防治是利用自然界中原本存在的有益微生物對靶標病原微生物的拮抗作用來控制病原微生物的危害，具有較小的環境風險，是一種與環境友好的防治技術［2］。目前應用較為廣泛的拮抗菌株主要有芽胞桿菌Bacillus。芽胞桿菌是存在于土壤和植物根際中重要的拮抗微生物類群，其通過營養及空間位點競爭、誘導植物抗性產生和改變土壤微生物群落結構等方式來減輕病原微生物危害［3］。側孢短芽胞桿菌Brevibacillus"laterosporus在自然界分布廣，繁殖快、營養簡單、孢子形成能力強、抗逆性強、受環境溫度和pH影響較小，易在土壤中定殖，并能產生殺蟲蛋白、抑菌物質、抗癌免疫調節物質等多種代謝產物，具有良好的生防應用潛力［45］。有報道表明：側孢短芽胞桿菌B8在抑制病毒、促進種子萌發和幼苗生長方面有一定的作用，采用噴施或灌根方式用側孢短芽孢桿菌B8無菌發酵液預先處理番茄可抑制番茄黃化曲葉病毒（tomato"yellow"leaf"curl"virus，TYLCV）的侵染，其菌株發酵液對煙草黑脛病的預防作用可達78.1%［4，6］。側孢短芽胞桿菌A60能夠顯著降低辣椒疫病發病率和病情指數，且具有較好的持效性，辣椒植株經側孢短芽胞桿菌B8胞外抗菌蛋白處理后表現出很高的誘導抗性［78］。側孢短芽胞桿菌X10對番茄青枯病有良好的防治效果，且對番茄的生長和產量的提高有顯著作用［9］。側孢短芽胞桿菌S231通過抑制病原菌菌絲過氧化物酶的形成、胞吞和糖基磷脂酰肌醇錨定生物合成來影響菌絲的生長，對細辛葉枯病的活體防效在66.82%，可顯著降低葉枯病的病情指數，控制細辛葉枯病病情發展［1011］。側孢短芽胞桿菌可顯著抑制油茶炭疽病菌和水稻紋枯病菌的生長［1213］。側孢短芽胞桿菌LX12對花生根腐病、白絹病、瘡痂病、葉斑病均有明顯的防治效果［14］。利用側孢短芽胞桿菌防治馬鈴薯瘡痂病的研究報道較少，本研究從云南健康馬鈴薯植株根際土壤中分離篩選出一株具有良好抑菌活性的拮抗菌株JYC"688，對其進行單菌落形態特征觀察、生理生化特征測定和分子生物學鑒定，并以引起馬鈴薯瘡痂病的腫脹鏈霉菌S.turgidiscabies和酸性鏈霉菌S.acidiscabies為靶標，初步探討其抑菌促生特性，以期為馬鈴薯瘡痂病的生物防治提供優良的微生物資源。

1"材料與方法

1.1"供試菌株

馬鈴薯瘡痂病致病菌S.acidiscabies和S.turgidiscabies，馬鈴薯晚疫病菌Phytophthora"infestans、黑痣病菌Rhizoctonia"solani、早疫病菌Alternaria"alternata及拮抗菌株JYC"688均由云南農業大學植物保護學院馬鈴薯病害研究室提供。

1.2"供試培養基

馬鈴薯瘡痂病致病鏈霉菌培養采用燕麥瓊脂培養基（oatmeal"agar，OMA），馬鈴薯晚疫病菌培養采用黑麥番茄培養基（rye"tomato"agar），馬鈴薯早疫病菌和黑痣病菌采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（potato"dextrose"agar，PDA），拮抗菌株培養采用牛肉膏蛋白胨培養基（nutrient"agar，"NA）。拮抗菌株的溶磷、解鈣、解鎂活性測定分別采用蒙金娜有機磷培養基、YMA解鈣培養基（甘露醇"10"g，K2HPO4"0.25"g，KH2PO4"0.25"g，MgSO4"0.2"g，NaCl"0.1"g，Yeast"0.8"g，CaCO3"50"g，加去離子水至"1"L，pH"6.8～7.2）和YMA解鎂培養基（等量"MgCO3代替"CaCO3，其他物質含量同解鈣培養基）。

1.3"菌株JYC"688對瘡痂鏈霉菌生長的影響

吸取甘油保存的瘡痂鏈霉菌涂布于OMA培養基平板表面，28℃暗培養5～7"d后，加入2"mL無菌水使用刮鏟刮下菌體，并將濃度調整至1×108cfu/mL，制成鏈霉菌菌懸液。吸取100"μL菌懸液均勻涂布于OMA培養平板表面，參照林超等的平板對峙培養法［5］，并作如下修改：挑取菌株JYC"688純培養物接種于OMA培養平板表面距離培養皿邊緣1"cm"處，共接種3個點，使3點等距對稱。以不接種JYC"688為對照，每處理重復3次，28℃暗培養5～7"d后，觀察培養平板上菌株JYC"688周圍是否出現抑菌圈。

采用紙碟法［16］再次驗證菌株JYC"688對瘡痂鏈霉菌的抑制作用，具體步驟為：挑取菌株JYC"688單菌落于10"mL含有NA液體培養基的離心管中培養48"h，吸取1"mL菌液于150"mL"NA液體培養基中，培養72"h獲得菌株培養液。在OMA培養基表面均勻涂抹鏈霉菌菌懸液，并在平板中央覆蓋直徑23"mm的無菌圓形濾紙片。吸取100"μL"JYC"688培養液緩慢加入到圓形濾紙片上，28℃暗培養7"d后，觀察濾紙片周圍是否有抑菌圈出現，若有則利用數顯式游標卡尺測定抑菌圈直徑，評估菌株JYC"688培養液對瘡痂鏈霉菌生長的影響。

1.4"菌株JYC"688的種類鑒定

1.4.1"形態學特征觀察

利用平板劃線法對菌株進行單菌落純化，記錄平皿中的菌落形態。

1.4.2"生理生化特性測定

參見《常見細菌系統鑒定手冊》對菌體進行觀察，并進行糖類發酵、明膠液化試驗、硫化氫產生試驗、淀粉水解試驗、甲基紅試驗、VP試驗、吲哚產生試驗、牛奶石蕊試驗、檸檬酸鹽利用試驗、脲酶產生試驗等，對其生理生化特性進行鑒定。

1.4.3"分子生物學鑒定

挑取菌株JYC"688單菌落接種于NA培養基平板上，28℃暗培養5"d后，采用生工生物工程（上海）股份有限公司生產的EZUP柱式細菌基因組DNA抽提試劑盒提取其基因組DNA。以菌株JYC"688基因組DNA為模板，利用通用引物27F/1492R［5］和引物UP1/UP2r［17］擴增菌株JYC"688的16S"rDNA和gyrB基因序列，PCR擴增產物用瓊脂糖凝膠電泳檢測，獲得1"500"bp和1"200"bp左右的目的條帶，用試劑盒回收后交由生工生物工程（上海）股份有限公司進行測序，將測序結果輸入NCBI數據庫中，使用BLAST軟件在GenBank中與其他的16S"rDNA和gyrB基因序列進行同源性比較，利用MEGA"7.0以鄰接法構建系統發育樹。

1.5"菌株JYC"688抑菌促生特性測定

抑菌譜檢測：通過平板對峙培養法檢測JYC"688菌株對馬鈴薯晚疫病菌、黑痣病菌、早疫病菌的抑制效果，具體步驟為：挑取菌株JYC"688純培養物于無菌水中，振蕩混勻，并將濃度調節至1×108"cfu/mL；分別于PDA培養基平板中央打孔并接種直徑為5"mm的病原菌菌餅，吸取10"μL"JYC"688菌懸液接種于距離培養皿邊緣1"cm處形成單點對峙和兩點對峙，以不接JYC"688為空白對照。28℃暗培養7～10"d，應用數顯式游標卡尺測量正常生長條件和對峙培養條件下的病原菌菌落生長寬度""（病原菌菌落邊緣兩端的水平距離），以此作為衡量菌株JYC"688對3種馬鈴薯病原菌抑制活性的指標。正常條件下，病原菌生長不受抑制，病原菌菌落能夠長滿整個培養皿；對峙培養條件下，病原菌生長受到抑制，且病原菌菌落生長寬度越小，抑制效果則越好。

胞外水解酶及嗜鐵素檢測：采用平板透明圈法對菌株JYC"688分泌的胞外水解酶、嗜鐵素等抗菌相關物質進行檢測，挑取JYC"688純培養物分別接種于β1，3葡聚糖酶檢測培養基、蛋白酶檢測培養基、纖維素酶檢測培養基［18］、鉻天青（chromeazurol"S，"CAS）培養基平板［19］中央，于28℃條件暗培養3"d后觀察菌落周圍培養基顏色是否發生變化，是否出現清亮透明圈。

將菌株JYC"688

分別接種于以大豆卵磷脂為唯一磷源的蒙金娜有機磷培養基、YMA解鈣、YMA解鎂培養基平板中央，利用透明圈法對菌株

的溶磷［20］、解鈣、解鎂［21］活性進行檢測，若菌株周圍有透明圈出現，則證明該菌具有溶磷、解鈣、解鎂活性，采用DF和ADF培養基（以ACC作為唯一氮源）檢測菌株產生ACC脫氨酶的能力［22］。

1.6"數據分析

使用Microsoft"Excel"2010整理數據，利用IBM"SPSS"21.0軟件對數據進行單因素方差分析及Duncan氏新復極差法多重比較。

2"結果與分析

2.1"菌株JYC"688的種類確定

2.1.1"菌株JYC"688的菌落形態特征

菌株JYC"688在NA培養基上生長良好，培養48"h的單菌落呈圓形或近圓形，扁平狀，菌落顏色為淡黃色，不透明，周圍無色素產生，菌落邊緣較整齊，表面濕潤粗糙無光澤，菌落中央稍凸起，呈輪紋生長，有輕微辛辣氣味（圖1）。

2.1.2"菌株JYC"688的生理生化特性

對菌株JYC"688進行糖酵解、大分子物質的水解、IMViC生理生化特性測定。菌株JYC"688可分解葡萄糖產酸不產氣、產生明膠酶使明膠水解、可產生脲酶分解尿素，VP和牛奶石蕊試驗結果為陽性;不降解乳糖，不能使淀粉水解，不產生硫化氫氣體，甲基紅、檸檬酸鹽利用和吲哚產生試驗結果均為陰性;菌株JYC"688的葡萄糖酵解、淀粉水解、明膠液化、甲基紅試驗結果與目前報道的側孢短芽胞桿菌SHBN4、JLN38、YCSF1生理生化特性一致，而牛奶石蕊、檸檬酸鹽利用、吲哚產生、VP試驗結果與側孢短芽胞桿菌不同菌株的生理生化特性存在差異（表1）。

2.1.3"菌株JYC"688的分子生物學特征

菌株JYC"688的16S"rDNA和gyrB基因的核苷酸序列長度分別為1"430"bp和1"197"bp，其中16S"rDNA與側孢短芽胞桿菌PB295"（KM613149.1）的相似性為99.79%，基于菌株的16S"rDNA基因序列構建的系統發育樹顯示，菌株JYC"688與Brevibacillus"laterosporus"PB295、HSA465"（KJ398346.1）、CSS8"（KM091710.1）、AJ1"（MW632050.1）、BL12"（MN330028.1）聚在同一分支（圖2），基于gyrB基因序列構建的系統發育樹顯示，JYC"688和B.laterosporus"DSM25"（CP017705.1）聚在同一分支（圖3），二者的相似性為99.73%。

綜上，根據菌株JYC"688菌落形態特征、生理生化特性和分子生物學特征，將其鑒定為側孢短芽胞桿菌Brevibacillus"laterosporus。

2.2"菌株JYC"688及培養液對S.turgidiscabies和S.acidiscabies的抑菌活性

2.2.1"JYC"688菌體對馬鈴薯瘡痂鏈霉菌生長的影響

采用平板對峙培養法初步測定菌株JYC"688對馬鈴薯瘡痂鏈霉菌的抑制作用，結果顯示，S.turgid

均能夠在OMA培養基中正常生長并能布滿整個培養基表面;而接種菌株JYC"688的培養基表面均出現了抑菌圈，說明菌株JYC"688對2種瘡痂鏈霉菌具有抑制活性（圖4）。

2.2.2"JYC"688培養液對馬鈴薯瘡痂鏈霉菌生長的影響

采用紙碟法再次驗證菌株JYC"688培養液對瘡痂鏈霉菌的抑制活性。結果表明，空白對照和紙片對照瘡痂鏈霉菌均能長滿整個培養基表面，而加入菌株JYC"688培養液的濾紙片周圍出現了抑菌圈，對腫脹瘡痂鏈霉菌S.turgidiscabies和酸性瘡痂鏈霉菌"S.acidiscabies抑菌圈直徑分別為31.90"mm和27.86"mm，與對照相比均具有顯著性差異（Plt;0.05），說明菌株JYC"688培養液能夠顯著抑制S.turgidiscabies和S.acidiscabies的生長（表2，圖5）。

2.3"菌株JYC"688抑菌特性

2.3.1"菌株JYC"688的抑菌譜

2.3.1.1"菌株JYC"688對馬鈴薯黑痣病菌生長的影響

在PDA培養基上Rhizoctonia"solani菌餅的一側和兩側

分別接種菌株JYC"688，以病原菌菌落生長寬度作為測定指標，結果顯示R.solani能夠在PDA培養基上正常生長，菌落生長寬度為89.73"mm，而在形成單點對峙和兩點對峙的培養平板中對R.solani的菌落生長寬度分別為65.05"mm和50.27"mm，均顯著低于對照（Plt;0.05），說明菌株JYC"688能夠顯著抑制R.solani的生長，且兩點對峙的抑制效果更加明顯（表3，圖6）。

2.3.1.2"菌株JYC"688對馬鈴薯早疫病菌生長的影響

在PDA培養基中含有Alternaria"alternata菌餅的一側和兩側分別接種菌株JYC"688，結果顯示A.alternata能夠在對照PDA培養基上正常生長，菌落生長寬度為81.28"mm，在形成對峙培養狀態的培養基中，A.alternata沒有布滿整個培養基表面，菌株生長均受到了抑制，菌落生長寬度分別為60.22"mm和42.77"mm，均顯著低于對照（Plt;0.05），說明菌株JYC"688能夠顯著抑制A.alternata的生長，其中兩點對峙的抑制效果更加明顯（表3，圖7）。

2.3.1.3"菌株JYC"688對馬鈴薯晚疫病菌生長的影響

在黑麥番茄培養基中含有Phytophthora"infestans菌餅的一側和兩側接種JYC"688菌株，結果顯示，P.infestans能夠在對照黑麥番茄培養基上正常生長，菌落生長寬度為89.52"mm，而在形成對峙培養的培養皿中對P.infestans的菌落生長寬度分別為62.25"mm和44.30"mm，均顯著低于對照（Plt;0.05），說明菌株JYC"688能夠顯著抑制P.infestans的生長，且兩點對峙培養的抑制效果更加明顯（表3，圖8）。

綜上，根據平板對峙培養結果，側孢短芽胞桿菌JYC"688能夠顯著抑制S.acidiscabies、S.turgidiscabies、R.solani、A.alternata、P.infestans的生長，可作為馬鈴薯病害生物防治的候選菌株。

2.3.2"菌株JYC"688胞外水解酶、嗜鐵素產生情況

葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶等細胞壁水解酶及嗜鐵素的產生是生防菌株重要的拮抗因子，本試驗結果顯示，接種菌株JYC"688在葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶檢測培養基平板上均有透明圈出現，嗜鐵素培養基平板上有黃色暈圈出現（圖9），表明菌株JYC"688能夠產生β1，3葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶，分解培養基中的葡聚糖、羥甲基纖維素納、蛋白質，從而在培養基中出現透明圈;該菌也能產生嗜鐵素來爭奪鐵離子使其無法與培養基中的鉻天青、溴化十六烷基三甲銨形成亮藍色的復合物，從而在菌落周圍形成橘黃色暈圈。

2.3.3"菌株JYC"688促生特性

對菌株JYC"688溶磷、解鈣、解鎂及ACC脫氨酶產生特性進行測定，結果顯示，接種JYC"688菌株的ADF培養基較為清澈，表明菌株JYC"688不能產生ACC脫氨酶降解ACC，不能利用ACC作為唯一氮源。在接種菌株JYC"688的溶磷培養基、解鈣、解鎂培養基中菌株JYC"688周圍均有透明圈出現;表明該菌株對大豆卵磷脂、碳酸鈣和碳酸鎂3種難溶性化合物具有溶解活性，有利于磷、鈣、鎂3種營養元素的釋放與利用，從而促進作物的生長（圖10）。

綜上，側孢短芽胞桿菌JYC"688能夠分泌β1，3葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶、嗜鐵素等多種抗菌相關物質，可溶解大豆卵磷脂、碳酸鈣、碳酸鎂3種難溶性化合物，利于磷、鈣、鎂3種營養元素的釋放，展現了良好的生防促生特性，是一株具有潛力的生防菌。

3"討論

相關研究表明，側孢短芽胞桿菌作為重要的植物病害生防菌，對煙草黑脛病菌Phytophthora"parasitica"var."nicotianae［6］、水稻稻瘟病菌Pyricularia"oryzae［24］、尖孢鐮刀菌Fusarium"oxysporum［25］、水稻紋枯病菌Rhizoctonia"solani［23］、辣椒疫霉病菌Phytophthora"capsici［7］、番茄青枯病菌Ralastonia"solanacearum［9］、細辛葉枯病菌Mycocentrospora"acerina［10］、黃芪根腐病菌Fusarium"oxysporum［26］、油茶炭疽病菌Colletotrichum"gloeosporioides［12］等多種植物病原菌具有顯著的抑制活性，極具開發為生防菌劑的潛能。李翠平等篩選獲得的側孢短芽胞桿菌BL12對S.bottropensis具有良好的抑制活性，尚未闡明對其他鏈霉菌生長的影響［27］。本研究獲得的側孢短芽胞桿菌JYC"688及培養液對馬鈴薯瘡痂鏈霉菌的生長具有顯著的抑制活性，還可顯著抑制馬鈴薯黑痣病菌、早疫病菌、晚疫病菌的生長，這一結果拓寬了側孢短芽胞桿菌的抑菌譜，為馬鈴薯病害的生物防治提供了優良的微生物資源。

相關研究表明，側孢短芽胞桿菌分泌抗菌肽或胞外抗菌蛋白作用于病原菌細胞膜，使膜外脂雙層外側發生扭曲，細胞膜發生相變導致菌體死亡或改變細胞膜通透性，使細胞內原生質體囊泡化和聚合化，致使細胞膜消融，菌絲體消解，進而抑制辣椒疫霉菌菌絲生長、孢子囊產生、休止孢萌發，保護辣椒植株免受辣椒疫霉菌游動孢子的傷害;同時該菌還能產生幾丁質酶破壞立枯絲核菌細胞壁中的幾丁質成分，使菌絲解體，最終達到抑制立枯絲核菌菌絲生長的效果［2829］。側孢短芽胞桿菌S629以營養競爭的方式抑制了藤黃微球菌Micrococcus"luteus和大腸桿菌Escherichia"coli的生長［30］。側孢短芽胞桿菌A60中的激發子PeBL1通過誘導活性氧迸發、酚類物質和木質素積累等方式來激活煙草植株的系統抗性［31］。纖維素、葡聚糖、蛋白質作為植物病原菌細胞壁的重要組成部分，纖維素酶、蛋白酶、葡聚糖酶的產生有利于破壞病原菌細胞壁結構，從而表現出較強的抑菌作用;許多生防菌株通過產生嗜鐵素與鐵離子結合來降低環境中的鐵離子濃度，致使病原微生物缺鐵而不能生長繁殖，進而達到控病減害的目的［32］。本研究所獲得的側孢短芽胞桿菌JYC"688可產生葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶、嗜鐵素等多種抗菌活性物質，進一步豐富了側孢短芽胞桿菌的抗菌代謝產物種類，但仍需繼續對JYC"688菌株的生防機制進行深入研究。

4"結論

本研究從馬鈴薯健康植株根際土壤中分離獲得對馬鈴薯瘡痂病菌具有顯著抑制活性的拮抗菌株JYC"688，經菌落形態觀察、生理生化特性測定及多基因序列分析，將其鑒定為側孢短芽胞桿菌Brevibacillus"laterosporus，JYC"688培養液能顯著抑制瘡痂鏈霉菌S.turgidiscabies和S.acidiscabies的生長，對馬鈴薯晚疫病菌、早疫病菌、黑痣病菌具有良好的抑制活性，并能夠分泌β1，3葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶、嗜鐵素等抑菌活性物質，可溶解大豆卵磷脂、碳酸鈣、碳酸鎂3種難溶化合物;B.laterosporus"JYC"688抑菌活性強，可促進磷、鈣、鎂3種元素的釋放，是一株具有潛力的生防菌。

參考文獻

［1］"趙偉全，楊文香，李亞寧，等."中國馬鈴薯瘡痂病菌的鑒定［J］."中國農業科學，2006，39（2）：313318.

［2］"王超，郭堅華，席運官，等."拮抗細菌在植物病害生物防治中應用的研究進展［J］."江蘇農業科學，2017，45（18）：16.

［3］"張淼，周立梅，徐德陽，等."側孢短芽孢桿菌BL21抗菌蛋白的穩定性分析和分離純化［J］."中國農學通報，2017，33（15）：4348.

［4］"厲彥芳，王春陽，謝菁菁，等."側孢短芽孢桿菌B8抑制植物病毒及促進番茄生長作用研究［J］."中國植保導刊，2019，39（7）：1116.

［5］"陳潺，陳升富，王建宇，等."側孢短芽孢桿菌AMCC"100017的分離鑒定及其生防潛力［J］."微生物學通報，2014，41（11）：22752282.

［6］"趙秀香，吳元華，李曄."拮抗細菌B8對煙草黑脛病菌的抑制作用及其菌株鑒定［J］."中國生物防治，2007，23（1）：5459.

［7］"郝楠，仝贊華，邱德文."側孢短芽孢桿菌A60的篩選及其對辣椒疫霉的室內防效測定［J］."生物技術通報，2017，33（9）：160165.

［8］"李蔚，趙秀香，徐千惠，等."側孢短芽孢桿菌B8胞外抗菌蛋白對辣椒立枯病抗病機制的研究［J］."中國植保導刊，2016，36（10）：59.

［9］"李偉杰，姜瑞波."番茄青枯病拮抗菌X10的鑒定和田間應用［J］."中國土壤與肥料，2007（5）：6063.

［10］劉亞苓，于營，魯海坤，等."側孢短芽孢桿菌S231拮抗下細辛葉枯病菌轉錄組差異表達分析［J］.生物技術通報，2021，37（2）：111121.

［11］劉亞苓，于營，崔麗麗，等."細辛葉枯病生防細菌的篩選，鑒定及其防效測定［J］."中國中藥雜志，2020，45（5）：10471052.

［12］吳天樂，陳藝，馬力，等."一株油茶炭疽病病原拮抗細菌的分離與鑒定［J］."湖南林業科技，2016，43（5）：6266.

［13］魏松紅，張亞婷，孔令春，等."水稻紋枯病生防菌的篩選及田間防治效果［J］."農藥，2022，61（7）：532536.

［14］遲玉成，趙顯民，許曼琳，等."一株花生根際生防菌及其制備方法和應用："CN201310643869.3"［P］.20150610.

［15］林超，余賢美，王春妮，等."土壤嗜鐵細菌C19的篩選、分子鑒定及其對炭疽菌和鐮刀菌的拮抗作用［J］."熱帶作物學報，"2009，"30（1）："9498.

［16］單文榮，李俊霞，劉花粉."濾紙片法篩選不同活性物對棉花黃萎病菌抑制效果研究［J］."中國農學通報，2010，26（19）：285289.

［17］陳蘭，謝永麗，吳曉暉，等."4株促紫花苜蓿生長的芽孢桿菌分子鑒定及其生物活性分析［J］."西北農業學報，2023，32（2）：212221.

［18］宋文欣，陳清華，楊惠貞，等."桑枝枯菌核病病菌拮抗芽孢桿菌的篩選和鑒定［J］."江蘇農業科學，2020，48（22）：106110.

［19］劉艷萍，滕松山，趙蕾."高產嗜鐵素惡臭假單胞菌A3菌株的鑒定及其對黃瓜的促生作用［J］."植物營養與肥料學報，2011，17（6）：15071514.

［20］任氫欣，王繼華，曾齊，等."大豆根際踝節真菌WR14的溶磷特性研究［J］."農業生物技術學報，2022，30（1）：114124.

［21］王明月，劉紹雄，熊智，等."石漠化地區豆科植物根瘤菌降解碳酸鈣、鎂能力研究［J］."生態環境學報，2014，23（10）：15811585.

［22］王偉楠，蘭智勇，喻文麗，等."鹽穗木根際產ACC脫氨酶耐鹽菌株的篩選及鑒定［J］."中國土壤與肥料，2021（2）：270275.

［23］羅文芳，魏松紅，王海寧，等."水稻紋枯病生防菌的篩選與鑒定［J］."沈陽農業大學學報，2017，48（6）：660665.

［24］杜春梅，王葳，葛菁萍，等."生防菌株BL21的鑒定及其活性產物［J］."植物保護學報，2007，34（4）：359363.

［25］張楹."側孢芽孢桿菌產生的抑真菌蛋白酶［J］."中國生物防治，2006，22（2）：146149.

［26］張愛梅，吳菊艷，韓雪英，等."沙棘根瘤內生細菌中抑菌促生菌株的篩選和鑒定［J］."微生物學通報，2019，46（5）：10411051.

［27］李翠平."側孢短芽孢桿菌BL12防治馬鈴薯瘡痂病的土壤微生態機制［J］."泰安："山東農業大學，"2020.

［28］任召珍，孫謐，鄭媛，等."海洋側孢短芽孢桿菌Lh1"株所產多肽R1"性質分析及作用原理探討［J］."海洋科學，2010（11）：4145.

［29］趙璟."側孢短芽孢桿菌A60抗菌肽分離純化與功能分析［D］.北京：中國農業科學院，"2012.

［30］王志新，張丹，李興峰，等."側孢短芽孢桿菌S629的生物學特性研究［J］."現代食品科技，2016，32（5）：5258.

［31］王顥潛."側孢短芽孢桿菌A60激發子PeBL1鑒定和基因功能的研究［D］."北京：中國農業科學院，2015.

［32］余賢美，鄭服叢."嗜鐵素在促進植物生長及病害防治等方面的應用［J］."中國農學通報，2007，23（8）：507510.

（責任編輯：楊明麗）