高效液相色譜法在藥品檢驗中的應用

李健婷

（廣西梧州制藥（集團）股份有限公司，廣西 梧州 530011）

高效液相色譜法是一種新型分離技術，其英文縮寫是HPLC，它的特點是分離速度較快，并且敏感程度較高。目前高效液相色譜技術在藥品檢驗中發揮的作用是不容小覷的，它支持著現代醫療衛生事業的不斷發展，對藥品質量安全的保障起到了重要的作用和價值。

高效液相色譜法從20 世紀開始誕生，之后經過長時間的臨床實踐取得了不錯的運用效果，目前在醫藥檢測、生命科學領域等諸多行業已經得到了廣泛的使用。藥品檢驗是高效液相色譜技術大顯身手的區域，這種方法的運用較為專業，也較為科學，通過研究比對結果可以發現，和普通的藥品檢測技術相比，高效液相色譜法的檢測準確性更高，因此具有細節化研究的意義和必要性，尤其是該項技術在色譜峰容量方面靈敏度較高，占據極大的優勢，改變了傳統的檢測程序和檢測手段，可以使檢測數據的準確性得到保障。因此秉承著科學技術是第一生產力的原則，在藥品檢測過程中要加快對高效液相色譜法的推廣和使用，滿足制藥行業客觀發展的實際需求。

1 高效液相色譜法

1.1 發展與優勢

高效液相色譜法于20 世紀70 年代左右誕生，它最早作為一種新型分離分析技術而存在，經過長時間的實踐和優化已經在多個領域得到了使用，它的運用基礎是經典液相色譜，加入了氣相色譜理論的加持，常用的檢測工具是靈敏度較高的檢測器和高壓液泵。目前隨著自動化技術的加入，高效液相色譜法也可以實現全自動操作，這項技術的流動相是液體，可以傳輸到檢測對象，觀察其區域反應，產生某些特定顏色的物質，它的原理和傳統的液相色譜技術幾乎相同，但是由于技術的更新換代和設備的優化，使操作過程更加方便易懂，也能夠提高物質的反應效率。高效液相色譜技術在具體使用過程中需要加入液體試劑或藥物，被儀器分離出來，由于不同的物理特性，色譜的分離位置也是不同的，之后輸送到對應的處理儀器之中展開物質檢測，能精確地分離物質中的雜質，篩選出廢棄物質。因此，在藥品質量檢測技術中運用高效液相色譜法具有較高的價值，和傳統氣相色譜法技術相比，高效液相色譜法自動化程度和靈敏化程度顯著提升。傳統的方式采用了重力加料的形式，使流出速度減慢，而更新后的技術采用的是高壓輸液設備，其傳輸速率已經達到了傳統方法的100 倍左右[1]。此外，高效液相色譜法相對于傳統的液相色譜技術能夠實現低化合物的有機分離，它還可以把不同極性的液體設置為流動相，因此具有更大的選擇空間，不同的組分之間會產生交叉作用和影響力，由此可見，這項技術在分離過程中的表現更加出色。

1.2 原理及使用特色

高壓輸液系統是高效液相色譜法最為重要的使用設備，它的主要特色是流動相為液體，這一方法可以利用高壓輸液泵的勢能混合極性不同的溶劑，接下來再注入實驗色譜柱之中，利用進氣閥注入樣品讓流動相在柱體之內互相流通，對柱內液體慢慢分離和滲透并展開監測，從而完成整個化學分析過程[2]。高效液相色譜法能夠正常使用需要依靠高效微粒固定相和高靈敏度的檢測器，目前常用的高效液相色譜法還采用了小口徑柱、高效色譜填料，這些物質在高壓輸液泵的影響之下能夠更快地推動容器流通通過色譜柱的檢測，有了這些精密工具和儀器的配合，高效液相色譜法運用的效率大大提高，使分離效果和檢測速度變得更加顯著，和傳統的經典注色譜檢測方法相比，它能夠更快地完成檢測樣本和物質的分離。由此可見，高效液相色譜法的使用特色是高效性、靈敏性和快速性。

2 高效液相色譜法在藥品檢驗中的應用

2.1 檢測藥品含量

高效液相色譜技術具有較高的分辨率，并且在檢測過程中的分析速度較快，可以多次重復分析，在藥品檢測時不需要過多的樣品作為支撐就可以達到檢測的效果，因此適合用來檢測藥品的含量，特別是用來檢測樣品不足時的藥品含量。藥物是否合格其判斷依據要參考藥品中各類物質的治療作用，同時還要參考藥品的物質成分含量，如果含量過剩可能會對人體其他功能造成損害[3]。使用高效液相色譜法可以分離藥品中的規定成分和有效成分，并分離出無效成分，將其傳輸到檢測儀器之中，對樣品成分展開分類精準檢測，確保有效成分能夠實際滿足臨床需求。目前藥品中的含量測定方式主要包含離子交換色譜法和吸附色譜法，也包括反向色譜應用技術。比如，在檢測馬來酸曲美布丁原料的時候，采用高效液相色譜法的輔助可以簡化操作流程，提高數據的準確性，還可以同時對各組試劑的組分含量展開檢測。有些抗炎藥物的檢測使用高效液相色譜法也可以取得不錯的效果，常用的抗炎藥物其功能應當是鎮痛消炎，但有些有效成分屬于水溶性，化學性質不穩定，甚至無法生成溶液，而采用高效液相色譜法技術能夠提高藥物有機成分的溶解穩定性，也有利于對某些特殊藥品的含量準確檢測。由此可見，高效液相色譜法操作起來相對便捷，準確率較高，經過長時間的使用，已經把這項技術列為某些藥物的法定分析方式，我國使用高效液相色譜法也有諸多成功的先例，這也意味著這項技術在各類化學藥品中的使用范圍在不斷拓寬。

2.2 檢測藥品有效成分，做好藥物鑒別

采用高效液相色譜法其中最關鍵的檢測內容和對象就是藥品中的有效成分含量，藥品有效成分的含量會直接影響到藥物的合格性和質量安全性。藥品在進入市場銷售之前都需要經過嚴格的測驗，才能確保有效成分含量達標，屬性合格，相關參數標準都符合之后才可以上市銷售[4]。使用高效液相色譜法就可以快速得到精準的檢驗成果，有效分析藥品中的有效成分，針對目標展開精準檢驗，防止藥物的附加試劑可能會帶來的人體副作用。比如采用該方法檢測黃芩片的時候，其有效成分是公認的黃酮，無論是傳統的檢測方法還是高效液相色譜法都可以得到不錯的結果，但是后者操作過程更加簡便快捷，并且對有效成分的測定更加精準，使藥品出口質量得到保障。利用該方法檢測藥品質量還可以篩選出最優質量的片段，除了檢測有效成分之外，對藥物的鑒別也離不開高效液相色譜法，藥物的藥用價值是存在差異的，其適應癥也不同。因此，有一些功能相似的藥物在具體使用方法和使用范圍中也存在一定的差別，一定要仔細鑒別藥物成分才能充分發揮臨床作用，利用高效液相色譜法展開藥物鑒別可以明確而細致地得出藥品的組分結構和性質參數，這些參數都要做好保存，加以記錄，為藥物定性。例如南五味子和北五味子是兩種不同的中藥，雖然名號相似，但由于產地和制法不同，適應癥完全不同，利用高效液相色譜法可以鑒定南北五味子中的有效成分，組分含量利用C18 柱，將甲醇和水以65∶35 的比例混合在一起，流速控制在每分鐘1mL 左右，檢測波長在250nm 以下，以上參數設置好之后，利用高效液相色譜法就可以快速地區分南五味子和北五味子。從這個角度來觀察，高效液相色譜法能夠為藥品品質的檢驗和品種的鑒別提供全新的思路。

2.3 檢測抗生素和中藥成分

高效液相色譜法可以運用在臨床中檢測抗生素的使用效果，有一些患者存在過敏現象，在使用抗生素類藥物時容易出現機體不良反應，其主要原因在于藥物中的中間體和降解產物發生了機體副作用，利用高效液相色譜法能夠明確抗生素中的雜質極限，從而對臨床用藥起到科學的指導參照。比如在檢測氨芐西林膠囊的時候就可以利用高效液相色譜技術分析藥品主成分和其衍生降解產物，將降解物質和藥物組成部分分離，控制制劑限度[5]。目前，我國在使用抗生素等抗菌類藥物的時候，強制規定要展開抗生素含量的測試，除了抗菌藥物之外還包括動物源性食品，其檢測的目的是防止抗生素在人體內不合規殘留，引發身體不適或影響肝臟功能。除了對抗生素進行檢測外，高效液相色譜檢測技術還可以用來檢測中藥的質量和成分，中藥的質地大多數屬于植物成分，較為復雜，所以質量檢測存在一定的誤差，較為困難。常規的檢測方法不統一且較為繁雜，不能保證結果準確性，并且常用的中藥成分較多，有效成分提取和分離困難，如果沒有高效液相色譜法技術的幫助，在測定有效成分時將會變得非常笨拙，使用了該項技術之后就可以將待測中藥樣本的雜質和有效組分進行分離，用最快的速度在短時間內完成二者的分組提取，接下來再進行中藥的鑒別和篩查，對有效物質的含量展開測試。例如檢測復方丹參滴丸的時候，這一款中藥有效成分是丹參素和兒茶葵，在高效液相色譜技術的幫助下，檢測效果較好，分離度較高，并且可以精準定量定性。由此可見，這項技術在中藥質量檢測中的運用得到了廣泛的青睞和支持，它的分離度較好，靈敏度較高，并且操作步驟精簡快捷，能實現中藥有效成分的劃分，從而達到專業檢測的效果。

2.4 檢測手性藥物和非添加化學成分

高效液相色譜法在藥品檢測中的運用遠不止上述幾種，在手性藥物檢測的過程中也能發揮不錯的作用。手性藥物的檢測難度較大，其難點在于手性化合物存在不對稱合成的情況，運用高效液相色譜法可以提取外消旋體拆分和天然物質，展開生物合成，在化學性質和物理性質上，手性藥物和對映異構體可以互相借鑒，有相似之處，在分離與鑒別過程中傳統方式操作過于困難，高效液相色譜法靈敏性較高，可以脫離衍生物的束縛，展開手性藥物的檢測。色譜分離法包括臨界流體色譜、高效毛細管電泳色譜等不同的技術，可以高效快捷地對手性藥物展開拆分并檢測。工作人員先對手性藥物做好衍生物的處理，計算非對稱異構分子，接下來再展開分離檢測，無論是在手性藥物的研制還是在手性藥物的代謝過程中，使用高效液相色譜法都具有不錯的價值。與此同時，檢測非添加化學成分時使用高效液相色譜法也取得了成功實踐，非添加化學成分檢測針對的是達不到常規藥物治療作用的假藥或保健品，雖然市場上藥品和保健品層出不窮，琳瑯滿目，但是不合規的藥物和保健品其共同點都是違規添加了化學藥劑。利用高效液相色譜法就可以將非法成分檢測出來，和傳統的薄層色譜方式比較，高效液相色譜法在檢測技術上更加便捷，具有較高的專屬性，分析能力和分離效果都較強，可以快速對非添加化學物質展開定性定量檢測，防止假藥流入市場。除此之外，對藥品有關物質的檢測可以分為有機雜質、無機雜質和殘留溶液，檢查的項目也包括異構體副產物和降解產物。比如在檢測甲硝唑藥片的時候，除了要檢測有效物質和有關物質之外，還存在部分難以定性的疑難雜物，借助高效液相色譜法展開技術檢測能夠規避雜質的干擾和影響，也能夠排除紫外線的作用，提高準確程度，利用反向高效液相色譜法可以檢測甲硝唑藥片的成分含量，其具體參數設計應當是流動項設置為甲醇和水的溶液，比例是20∶80，流速設置是每分鐘1mL，檢測波長設置為325nm。根據檢測結果可以得出甲硝唑原材料的含量和雜質含量相等，在藥品制藥過程中沒有發生明顯的變性，該項藥物符合質量要求。如果采用傳統的薄層色譜法，不僅在操作上過于重復，時間太慢并且準確度不高，高效液相色譜法在很大程度上彌補了傳統薄層色譜檢測技術的缺陷。

3 高效液相色譜技術的新發展

當前高效液相色譜技術正在高速發展過程中，大致可以分為三種類型，例如蒸發光散射檢測技術、質譜聯用技術和快速高效液相色譜技術。蒸發光散射檢測技術可以把傳統的蒸發光檢測技術結合高效液相色譜技術互相汲取優勢，傳統的發色團化合物檢測范圍是受到極大限制的，使用了新技術之后這項限制被突破，在技術問題上得到了有效的升級和解決，從而擴大了高效液相色譜技術的運用范圍。質譜聯用技術指的是在傳統的液相色譜基礎上結合質譜儀，分析有機化合物的有效成分，在有機分離之后使用這項技術提高了質譜儀較為強大的檢測能力，稱之為組分鑒定能力。而快速高效液相色譜技術進一步優化了色譜參數，相對于傳統的高效液相色譜技術使柱子得到了升級和改造，柱子能夠承受更高的壓力，提高效果，也縮短了高效液相色譜技術的檢測時間。在未來，高效液相色譜技術的發展將會走出全新的天地，比如在檢測復方氨基酸注射液的時候，測定其中含有的焦谷氨酸含量，就可以采用高效液相色譜技術。在具體測定時，有關工作人員需要持續優化色譜條件以及測定方法，把柱溫控制在合適的范圍值之內，設定酸堿度值。

4 結語

在藥品檢驗過程中使用高效液相色譜法能有效提高藥品檢測的質量和效率。有關工作人員需要了解高效液相色譜法的使用優勢和使用原理，在檢測藥品含量、藥品有效成分的時候讓其發揮作用，還可以用該方法來檢測抗生素和中藥，確保用藥健康。