三種心力衰竭大鼠模型的病理差異及中醫(yī)證候評(píng)價(jià)

〔摘要〕 目的 對(duì)多柔比星（doxorubicin， DOX）、高血壓和異丙腎上腺素（isoproterenol， ISO）誘導(dǎo)的心力衰竭（以下簡(jiǎn)稱“心衰”）大鼠模型在造模過(guò)程、病理特點(diǎn)等方面進(jìn)行比較，并對(duì)其中醫(yī)證候進(jìn)行評(píng)價(jià)，以助研究者選擇適當(dāng)?shù)哪Ｐ汀７椒?30只雄性Dahl鹽敏感性大鼠為高血壓心衰模型組（8% NaCl高鹽飼料喂養(yǎng)，連續(xù)喂養(yǎng)20周）；60只雄性SD大鼠隨機(jī)均分為DOX心衰模型組（DOX 1.5 mg/kg，每周2次，腹腔注射，共7周）和ISO心衰模型組[ISO 5 mg/（kg·d），連續(xù)7 d，腹腔注射，再繼續(xù)飼養(yǎng)3周]；另取10只雄性SD大鼠作為空白對(duì)照組。對(duì)大鼠心臟、腎臟、肝臟進(jìn)行HE染色，對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行Masson染色；用ELISA法檢測(cè)大鼠血清N末端腦鈉肽前體（N-terminal pro-brain natriuretic peptide， NT-proBNP）水平；用超聲心動(dòng)圖評(píng)估大鼠的心臟功能；結(jié)合自然狀態(tài)和一般體征探討3種心衰大鼠模型的中醫(yī)證型。結(jié)果 與空白對(duì)照組比較，DOX心衰模型組大鼠活動(dòng)量減少、體溫降低、水腫明顯；高血壓心衰模型組大鼠精神不振、尿量減少并且水腫；ISO心衰模型組大鼠活動(dòng)減少、體溫下降、大便稀軟；DOX心衰模型組和高血壓心衰模型組的腎臟均有較嚴(yán)重的病理?yè)p傷，ISO心衰模型組僅有心臟損傷；3種心衰模型組血清NT-proBNP均增加（Plt;0.05）、左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fractions， LVEF）和左室短軸縮短率（left ventricular fraction shortening， LVFS）均降低（Plt;0.05）。DOX心衰模型組和ISO心衰模型組中醫(yī)證候?yàn)殛?yáng)虛證，高血壓心衰模型組中醫(yī)證候?yàn)闅怅巸商撟C。結(jié)論 根據(jù)大鼠的宏觀表現(xiàn)和微觀指標(biāo)，3種模型病理有較大差異，應(yīng)慎重選擇；DOX和ISO心衰模型可能為陽(yáng)虛證，高血壓心衰模型可能為氣陰兩虛證。

〔關(guān)鍵詞〕 心力衰竭；大鼠模型；病因造模；病理差異；中醫(yī)證候；模型評(píng)價(jià)

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R256.2" " " " "〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A" " " " " 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.05.004

Pathological differences and Chinese medicine pattern evaluation of

three rat models of heart failure

YU Yipin1， LIANG Hao2， DONG Wenbo3， LI Xinchun1， YI Qiong4， TAN Duoting1， HU Zhixi2， LI Lin1*

1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. Hunan Institute of Chinese Medicine Diagnosis， Changsha， Hunan 410208， China; 3. The Second People's Hospital of Beihai， Beihai， Guangxi 536000， China; 4. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To compare rat models of heart failure induced by doxorubicin （DOX）， hypertension， and isoproterenol （ISO） in terms of modelling process and pathological features and to evaluate their Chinese medicine patterns to assist researchers in selecting appropriate models. Methods Thirty male Dahl salt-sensitive rats were used as the hypertensive heart failure model group （8% NaCl high-salt chow fed continuously for 20 weeks）; sixty male SD rats were divided randomly and equally into the DOX heart failure model （DOX 1.5 mg/kg， intraperitoneally injected twice weekly for 7 weeks） and the ISO heart failure model groups [ISO 5 mg/（kg·d）， intraperitoneally injected for 7 consecutive days and then continued feeding for another 3 weeks]; and another 10 male SD rats were used as blank control group. HE staining was used to dye the hearts， kidneys， and livers of rats and Masson staining was used to dye cardiomyocytes; serum levels of N-terminal pro-brain natriuretic peptide （NT-proBNP） were determined by ELISA; and the cardiac function of rats was evaluated by echocardiography. Combined with the natural state and general signs， the Chinese medicine patterns of three heart failure rat models were also explored. Results Compared with the blank control group， the rats in the DOX heart failure model group had reduced activity， decreased body temperature， and obvious edema; the rats in the hypertensive heart failure model group showed lassitude， reduced urine output， and edema; and rats in the ISO heart failure model group showed reduced activity， decreased body temperature， and loose stool. The DOX and hypertensive heart failure model groups showed relatively serious pathological damage in the kidneys， while the ISO heart failure model group only had heart damage. Serum levels of NT-proBNP of the three heart failure model groups all increased （Plt;0.05）， while left ventricular ejection fractions （LVEF） and left ventricular fraction shortening （LVFS） both decreased （Plt;0.05）. The Chinese medicine pattern of the DOX heart failure model and ISO heart failure model groups was yang deficiency， while that of the hypertensive heart failure model group was dual deficiency of qi and yin. Conclusion According to the macroscopic manifestations and microscopic indexes of the rats， the three models have great differences in pathology， and thus careful selection is necessary. DOX and ISO heart failure models may be yang deficiency pattern， while hypertensive heart failure models may be dual deficiency of qi and yin pattern.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 heart failure; rat model; etiological modelling; pathological difference; Chinese medicine pattern; model evaluation

心力衰竭（以下簡(jiǎn)稱“心衰”）是由于多種原因?qū)е滦呐K結(jié)構(gòu)和（或）功能的異常改變，而使心臟收縮（或）舒張功能發(fā)生障礙，是各種心臟疾病的晚期階段，被稱為“21世紀(jì)心血管病的最后戰(zhàn)場(chǎng)”[1-2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，心衰的發(fā)生與年齡明顯相關(guān)[3-4]，是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的危重病、多發(fā)病[5]。為了研究心衰的病理生理、診斷、治療等，研究者們建立了多種心衰動(dòng)物模型。其中，使用大鼠作為動(dòng)物模型具有成本低、便于飼養(yǎng)、造模易成功等諸多優(yōu)勢(shì)，在實(shí)驗(yàn)中最為常用。但不同的造模方法，建立的動(dòng)物模型并不相同，有些甚至造成了額外的臟器損傷，產(chǎn)生的病理變化也有差異。這些不同的動(dòng)物模型，屬于病因差異造模，會(huì)出現(xiàn)不同表現(xiàn)，可能對(duì)應(yīng)不同的中醫(yī)證候。本課題組前期通過(guò)以方測(cè)證驗(yàn)證了一些心衰動(dòng)物模型的證候?qū)傩訹6]。本研究旨在對(duì)多柔比星[（doxorubicin， DOX）又稱阿霉素]、高血壓和異丙腎上腺素（isoproterenol， ISO）誘導(dǎo)的心衰模型在造模過(guò)程、病理特點(diǎn)等方面進(jìn)行比較，探討不同動(dòng)物模型的病理差異及與中醫(yī)證候之間的相關(guān)性，并對(duì)其中醫(yī)證候進(jìn)行評(píng)價(jià)，以助研究者選擇適當(dāng)?shù)哪Ｐ汀?/p>

1 材料與方法

1.1" 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性Dahl鹽敏感性大鼠30只，體質(zhì)量（220±10） g，動(dòng)物合格證號(hào)：11400700134072；SPF級(jí)雄性SD大鼠70只，體質(zhì)量（220±10） g，動(dòng)物合格證號(hào)：43004700029162。所有實(shí)驗(yàn)用大鼠均由北京維通利華動(dòng)物公司提供，所有動(dòng)物飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)[SYXK（湘）2019-0009/SYXK（湘）2013-0005]，所有實(shí)驗(yàn)方案均通過(guò)湖南中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)審批（LLBH-202010130003）。

1.2" 主要試劑與儀器

DOX（山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，批號(hào)：220103-A16）；ISO（美國(guó)MedChemExpress公司，批號(hào)：HY-B0468/CS-2582）；大鼠N末端腦鈉肽前體（N-terminal pro-brain natriuretic peptide， NT-proBNP）ELISA試劑盒（武漢華美生物工程有限公司，批號(hào)：W210349115）；二甲苯、中性樹(shù)膠（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)：10023418、10004160）；蘇木精、伊紅染色液（上海威奧生物科技有限公司，批號(hào)：02A230427、02B230519）；Masson三色染色液（上海愛(ài)必信生物科技有限公司，批號(hào)：abs9347）。

超低溫冰箱（安徽中科美菱低溫科技股份有限公司，型號(hào)：CDWBX33）；小型高速冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司，型號(hào)：H1650R）；無(wú)創(chuàng)血壓系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司，型號(hào)：BP-300A）；彩色多普勒超聲診斷儀（飛依諾科技蘇州有限公司，型號(hào)：SonoScape-SZN）；多功能酶標(biāo)分析儀（深圳市匯松科技發(fā)展有限公司，型號(hào)：MB-530）。

1.3" 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1" 分組與模型制作" 30只雄性Dahl鹽敏感性大鼠為高血壓心衰模型；60只雄性SD大鼠隨機(jī)均分為DOX心衰模型組和ISO心衰模型組；另取10只雄性SD大鼠作為空白對(duì)照組。造模期間，所有不同組別大鼠均按照3只/籠，置于（24±2） ℃、相對(duì)濕度50％±10％，12 h/12 h明暗交替的環(huán)境中，自由采食和飲水。不同組別的造模方法具體如下。DOX心衰模型組：DOX 1.5 mg/kg，每周2次，腹腔注射，共7周[7]；高血壓心衰模型組：8% NaCl高鹽飼料喂養(yǎng)，每籠喂養(yǎng)飼料60 g/d，自由取水，連續(xù)喂養(yǎng)20周[8]；ISO心衰模型組：ISO 5 mg/（kg·d），連續(xù)7 d，腹腔注射，再繼續(xù)飼養(yǎng)3周[9]；空白對(duì)照組：不做其他特殊處理，正常飼養(yǎng)。

1.3.2" 取材" 20%烏拉坦溶液，按5 mL/kg對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉。剪開(kāi)腹部皮膚，翻出腸管，剝離腹膜，暴露腹主動(dòng)脈，采血3 mL以上，4 ℃，3 000 r/min離心15 min（離心半徑為17.8 cm），保留上清液，放于-80 ℃冰箱備用。剪斷血管，剝離雙腎，去掉被膜，放入多聚甲醛固定液；繼續(xù)在右上腹尋找到肝臟，剪下放入多聚甲醛固定液；剪開(kāi)肋骨，暴露胸腔，剪斷血管，剝離心臟，剪下前壁組織，放于甲醛中固定。

1.4" 模型評(píng)價(jià)方法

1.4.1" 自然狀態(tài)觀察" 實(shí)驗(yàn)期間，觀察各組大鼠活動(dòng)量、攝食、飲水量、毛發(fā)、糞便及精神狀態(tài)，每天記錄各組大鼠的表現(xiàn)，評(píng)價(jià)各組大鼠的自然狀態(tài)。

1.4.2" 一般體征檢查" 實(shí)驗(yàn)期間每日對(duì)各組大鼠尿量、水腫情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，在模型處死前對(duì)大鼠的直腸溫度進(jìn)行測(cè)量并記錄。

1.4.3" 組織學(xué)觀察" 對(duì)心臟、腎臟、肝臟進(jìn)行HE染色：石蠟切片脫蠟至水，依次將組織切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、無(wú)水乙醇Ⅰ、無(wú)水乙醇Ⅱ、75%乙醇5 min，蒸餾水洗。蘇木精染色、伊紅染色、脫水封片，顯微鏡鏡檢采集分析。對(duì)心肌組織進(jìn)行Masson染色：石蠟切片脫蠟至水、鐵蘇木素染色、麗春紅酸性品紅染色、苯胺藍(lán)染色、分化、透明封片，顯微鏡鏡檢采集分析。并使用Image-Pro Plus 6.0分析各組心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（collagen volume fraction， CVF），CVF=膠原面積/視野總面積×100%。計(jì)算方式：每張Masson切片選取5個(gè)視野取其平均值。

1.4.4" 血清NT-proBNP檢測(cè)" 采用復(fù)孔操作，先加稀釋液100 μL，將標(biāo)準(zhǔn)品、各組制備的血清（均為50 μL）加入孔內(nèi)，用膜封住，30 ℃水浴鍋孵育2 h，甩干，滴加洗滌液，清洗4次，加酶，溫育，洗滌。徹底清洗后加底物90 μL顯色，37 ℃避光顯色15～30 min，加50 μL終止液，直到孔中顏色由藍(lán)變黃。底物在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。15 min后酶標(biāo)儀上測(cè)定光密度值，將結(jié)果導(dǎo)入Excel，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品擬合曲線，生成公式，推導(dǎo)各標(biāo)本實(shí)際的含量。

1.4.5" 超聲心動(dòng)圖檢測(cè)" 在超聲心動(dòng)圖的引導(dǎo)下，用M型超聲經(jīng)胸骨左心室長(zhǎng)軸切面測(cè)量左室舒張末期內(nèi)徑（left ventricular end-diastolic dimension， LVEDD）、左室收縮末期內(nèi)徑（left ventricular end-systolic dimension， LVESD），測(cè)量3個(gè)心動(dòng)周期的均值，按照V=（7.0/2.4+D）×D3[其中V是體積，D是左室直徑]公式計(jì)算左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fractions， LVEF）及左室短軸縮短率（left ventricular fraction shortening， LVFS）[10]，并同步記錄心率。

1.5" 辨證診斷

對(duì)心衰的辨證分型主要參考《慢性心力衰竭中醫(yī)診療指南（2022年）》[11]和《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則：試行》[12]。（1）氣虛證。主癥：氣短、乏力、心悸；次癥：活動(dòng)易疲勞、自汗、懶言或面白少華；舌象：舌質(zhì)淡或淡紅。（2）陽(yáng)虛證。主癥：畏寒、肢冷、脘腹或腰背發(fā)涼；次癥：困倦嗜睡、喜熱飲、小便不利、浮腫或胸腹水；舌象：舌質(zhì)淡、舌體胖或有齒痕、苔白或白滑。（3）氣陰兩虛證。主癥：面浮、肢腫、氣短、心悸、胸部悶痛、倦怠乏力；次癥：小便短少、自汗、畏寒肢冷等；舌象：舌淡苔白。具備2項(xiàng)主癥，或1項(xiàng)主癥及2項(xiàng)次癥，即可辨證。

1.6" 統(tǒng)計(jì)分析

采用Prism 9.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和作圖。計(jì)量資料用“ｘ±s”表示。組內(nèi)比較采用單因素方差分析，組間比較采用無(wú)校正LSD檢驗(yàn)。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)均為雙邊，Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1" 各組大鼠自然狀態(tài)和一般體征

造模結(jié)束后，空白對(duì)照組大鼠無(wú)死亡，精神狀態(tài)活躍，被毛整齊有光澤，飲食與二便正常。DOX心衰模型組共造模成功17只，造模成功率56.7%；大鼠精神萎靡，身體蜷縮，活動(dòng)量減少，多聚集，被毛疏松、無(wú)光澤，食量和飲水量均減少，水腫明顯。高血壓心衰模型組共造模成功19只，造模成功率63.3%；前期大鼠被抓時(shí)反抗劇烈、易激惹，后期出現(xiàn)精神不振、蜷臥少動(dòng)，尿多等現(xiàn)象。ISO心衰模型組共造模成功21只，造模成功率70.0%；可見(jiàn)大鼠心前區(qū)搏動(dòng)明顯增強(qiáng)，超聲心動(dòng)圖提示心率加快，并出現(xiàn)呼吸頻率增快、震顫、多汗、活動(dòng)減少、身體蜷縮、嗜臥、體溫下降、大便稀軟現(xiàn)象。對(duì)造模成功的大鼠自然狀態(tài)與一般體征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，詳見(jiàn)表1。

2.2" 各組大鼠的病理檢測(cè)結(jié)果

2.2.1" 心臟病理檢測(cè)結(jié)果" 空白對(duì)照組大鼠可見(jiàn)心肌組織結(jié)構(gòu)正常，排列規(guī)則，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)明顯纖維素樣改變。與空白對(duì)照組大鼠相比，DOX心衰模型組可見(jiàn)心肌細(xì)胞水腫、肥大，部分肌纖維斷裂、排列錯(cuò)亂，心肌間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；高血壓心衰模型組心肌細(xì)胞水腫、肥大，心肌纖維排列錯(cuò)亂，間質(zhì)中可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；ISO心衰模型組缺血區(qū)心肌細(xì)胞壞死、排列錯(cuò)亂，炎性細(xì)胞增多。詳見(jiàn)圖1—2。

與空白對(duì)照組比較，DOX心衰模型組、高血壓心衰模型組和ISO心衰模型組的CVF顯著提高（P＜0.05），提示3組心衰模型心肌纖維化程度增加。詳見(jiàn)表2。

2.2.2" 腎臟病理檢測(cè)結(jié)果" 空白對(duì)照組大鼠腎臟形態(tài)正常，腎小球數(shù)目正常，大小均一，毛細(xì)血管環(huán)完整。與空白對(duì)照組比較，DOX心衰模型組腎臟近曲小管水腫、壞死，遠(yuǎn)曲小管?chē)?yán)重水腫、壞死，腎小球固縮，結(jié)構(gòu)不清。高血壓心衰模型組腎小管細(xì)胞排列紊亂，腎小管上皮細(xì)胞水腫、減少、脫落，并伴有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小球各類(lèi)細(xì)胞分辨不清。而ISO心衰模型組腎臟未發(fā)現(xiàn)損傷。詳見(jiàn)圖3。

2.2.3" 肝臟病理檢測(cè)結(jié)果" 所有大鼠肝臟均排列整齊，未發(fā)現(xiàn)明顯損傷。詳見(jiàn)圖4。

2.3" 各組大鼠的心功能比較

與空白對(duì)照組比較，DOX心衰模型組及ISO心衰模型組LVEF、LVFS、HR降低（P＜0.05），NT-proBNP升高（P＜0.05）；高血壓心衰模型組LVEF、LVFS降低（P＜0.05），NT-proBNP升高（P＜0.05）。與DOX心衰模型組比較，高血壓心衰模型組LVEF、LVFS、HR升高（P＜0.05），NT-proBNP降低（P＜0.05）；ISO心衰模型組HR、NT-proBNP降低（P＜0.05）。與高血壓心衰模型組比較，ISO心衰模型組HR、NT-proBNP降低（P＜0.05）。詳見(jiàn)表3。

2.4" 各組大鼠的中醫(yī)證候診斷

DOX心衰模型組和ISO心衰模型組為陽(yáng)虛證，高血壓心衰模型組為氣陰兩虛證。詳見(jiàn)表4。

3 討論

3.1" 3種心衰大鼠模型的造模特點(diǎn)

心衰是多種心血管疾病發(fā)生發(fā)展的共同結(jié)局，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的身體健康[13]。動(dòng)物模型為研究某種疾病的發(fā)生、發(fā)展、病理生理、治療及預(yù)后提供了支撐。雖然當(dāng)前的心衰動(dòng)物模型種類(lèi)繁多[14]，但并非所有的動(dòng)物模型都能很好地模擬心衰過(guò)程，其病理生理機(jī)制及造模成功后的癥狀、形態(tài)學(xué)、生化指標(biāo)均與人類(lèi)心衰有一定差距[15]。建立穩(wěn)定而成熟的心衰模型，是開(kāi)展心衰動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的關(guān)鍵前提。

DOX作為一種廣譜抗腫瘤化療藥物，具有嚴(yán)重的心臟毒性，會(huì)造成不可逆的心肌損害和心功能衰竭[16]。同時(shí)，DOX誘導(dǎo)的心衰還可造成嚴(yán)重的腎臟損傷，引起水鈉潴留[17]，這能解釋本研究結(jié)果中DOX心衰模型組NT-proBNP值的升高。DOX誘導(dǎo)的心肌損傷模型具有無(wú)創(chuàng)傷、造模時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，但會(huì)引起心肌毒性、干擾水鈉代謝、造成經(jīng)腎臟代謝的激素升高，與實(shí)際心衰機(jī)制有差距[18]，此模型選擇應(yīng)慎重。高鹽飲食誘導(dǎo)的高血壓心衰大鼠模型幾乎與人類(lèi)高血壓心臟病心衰無(wú)異，均為長(zhǎng)期高血壓誘導(dǎo)的心肌損傷，但高血壓也同樣造成了嚴(yán)重的腎臟損傷，且造模時(shí)間久、飼養(yǎng)成本高。該模型特別適合高血壓與心衰的診斷和藥物研究。ISO為β受體激動(dòng)劑，長(zhǎng)期使用可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞纖維化和壞死，并導(dǎo)致心室重構(gòu)[19]。ISO誘導(dǎo)的模型可模擬出交感興奮性增高引起心衰的病理過(guò)程[20]，且只對(duì)心臟造成損傷，造模簡(jiǎn)單，比較適合單純心衰的病理生理和藥物研究。同時(shí)，由于腎臟功能完善，該模型尤其適合心衰后的水鈉代謝研究，有助于理解心衰后出現(xiàn)水鈉潴留的機(jī)制。研究者需根據(jù)模型特點(diǎn)謹(jǐn)慎選用適合自己研究領(lǐng)域的模型，避免因模型選擇錯(cuò)誤導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差。

3.2" 3種心衰大鼠模型的中醫(yī)證候評(píng)價(jià)

隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的不斷深入，部分學(xué)者認(rèn)為單純西醫(yī)手段干擾的疾病動(dòng)物模型不能滿足中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究的需要[21]。于是出現(xiàn)了中醫(yī)病證結(jié)合的模型制備方法。而這些造模方法通常將疾病造模和證候因素疊加，使“證”或“復(fù)合證”形成的單重或多重因素施加于穩(wěn)定的疾病模型上，以模擬“證”和“復(fù)合證”的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，有明確目標(biāo)地建立某一證候模型或復(fù)合證候模型[22]。但本研究發(fā)現(xiàn)，不同造模方法與中醫(yī)病因?qū)W說(shuō)具有一定相似性，不同的病因可能會(huì)造成不同的疾病、不同的證型或復(fù)合證型。如果僅靠添加人為手段制備所需的證型，如剝奪睡眠制備氣虛模型[23]、外界刺激制備肝郁模型[24]等，不僅違背科學(xué)性，也與臨床實(shí)際不符。實(shí)質(zhì)上，中醫(yī)證候并不獨(dú)立于疾病之外，西醫(yī)的“疾病”與中醫(yī)的“證候”也不是兩個(gè)單獨(dú)的個(gè)體，疾病發(fā)展過(guò)程本身就存在著中醫(yī)證候的變化。本團(tuán)隊(duì)前期研究表明[25]，對(duì)同一種疾病的不同造模方法會(huì)呈現(xiàn)不同的病理表現(xiàn)和宏觀表現(xiàn)，出現(xiàn)證候差異。

動(dòng)物模型是否成功，最關(guān)鍵的是模型的整體狀態(tài)與臨床表現(xiàn)的一致性[26]。除了一般狀態(tài)和體征的觀察，心臟病理檢測(cè)結(jié)果顯示，3種心衰大鼠模型心肌細(xì)胞損傷、心肌纖維化明顯。本研究選取心功能受損的標(biāo)志物（LVEF、LVFS等）和心衰診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”NT-proBNP進(jìn)行研究[27]。結(jié)果提示，3種心衰大鼠模型NT-proBNP值較空白對(duì)照組均升高，說(shuō)明心衰造模成功。有研究表明，LVEF與中醫(yī)證型具有顯著相關(guān)性，LVEF越低，陽(yáng)虛證可能性越大，陽(yáng)虛的程度也越重[28-29]。本研究中，高血壓心衰大鼠的LVEF值高于其他兩組模型，提示高血壓心衰模型屬于射血分?jǐn)?shù)保留的心衰模型[30]，結(jié)合后期尿量減少、體溫不變，說(shuō)明高血壓心衰大鼠不屬于陽(yáng)虛證。而DOX誘導(dǎo)的心衰和ISO誘導(dǎo)的心衰在造模結(jié)束后都出現(xiàn)精神萎靡、活動(dòng)減少、身體蜷縮等癥狀，體溫在造模后期也出現(xiàn)明顯降低的狀況，因而這兩種模型則很可能是陽(yáng)虛模型。前期基于“以方測(cè)證”的研究也表明[31-32]，DOX和ISO誘導(dǎo)的心衰模型通過(guò)參附注射液治療效果更好，佐證了其陽(yáng)虛的證候?qū)傩浴６哐獕盒乃ツＰ驮趹?yīng)用參附注射液后病情加重，死亡率增高，用參麥注射液的大鼠的病情卻顯著改善[33]，說(shuō)明該模型可能更貼近氣陰兩虛證。病理結(jié)果顯示，DOX和高血壓心衰模型都造成了腎臟損傷，所以二者的病位除了心還可能包括腎，并不是單純的心衰模型，原因是若心氣、心陽(yáng)虧虛，不能溫腎水，繼則出現(xiàn)心腎不交。《素問(wèn)·玉機(jī)真藏論篇》云：“五臟相通，移皆有次。五臟有病，則傳其所勝。”國(guó)醫(yī)大師鄧鐵濤[34]認(rèn)為，“五臟皆致心衰，非獨(dú)心也”，故心衰的發(fā)生與五臟密切相關(guān)。以往研究結(jié)果也顯示[35]，心衰因肺循環(huán)、體循環(huán)不暢導(dǎo)致組織缺血缺氧，此時(shí)病變由心累及腎等相關(guān)臟腑。綜上，本研究認(rèn)為3種心衰大鼠模型中醫(yī)證候各有不同，表現(xiàn)多樣，涉及多個(gè)臟腑，證候?qū)傩圆⒉粏我弧?/p>

4 結(jié)論

目前，心衰病證動(dòng)物模型的研究形成了多元化的制備方法與評(píng)價(jià)體系，為病證的診療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但在確定造模成功與否的客觀評(píng)判指標(biāo)上，未形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，缺乏可反映“證”的特異性客觀指標(biāo)，特別是對(duì)于復(fù)合證候模型的建立并不嚴(yán)謹(jǐn)。因此，需要在疾病模型建立的基礎(chǔ)上，通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察、以方測(cè)證、檢測(cè)微觀指標(biāo)等來(lái)加強(qiáng)對(duì)證候研究的探索，從而確立心衰模型的證候?qū)傩约皬?fù)合證候?qū)傩浴氖滦乃サ闹嗅t(yī)相關(guān)研究時(shí)，應(yīng)遵循中醫(yī)學(xué)的理論指導(dǎo)確定模型制備方法，結(jié)合自身研究的需求，謹(jǐn)慎選擇較適宜的模型。未來(lái)，本課題組也將采用代謝組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等系統(tǒng)生物學(xué)技術(shù)進(jìn)一步探究其證候本質(zhì)。

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（本文編輯" 周" 旦）

〔收稿日期〕2023-10-16

〔基金項(xiàng)目〕國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（82274411，82274412）；湖南省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（2022JJ40300）；湖南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2023JJ30453）；湖南中醫(yī)藥大學(xué)科研基金“揭榜掛帥”專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目（2022XJJB002）；湖南省青年科技創(chuàng)新人才項(xiàng)目（2022RC1021）。

〔通信作者〕*李" 琳，女，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：471920830@qq.com。