復方芩柏湯調控ERK/JNK信號通路治療潰瘍性結腸炎的效應及機制研究

〔摘要〕 目的 研究復方芩柏湯對細胞外信號調節激酶（extracellular regulated protein kinases， ERK）/c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase， JNK）信號通路的調控作用，以及對潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis， UC）小鼠血清中炎癥因子的影響。方法 將60只SPF級健康雄性BALB/C小鼠利用3%葡聚糖硫酸（dextran sulfate sodium， DSS）建立UC模型，造模成功后隨機分為模型組（以生理鹽水灌腸）、美沙拉嗪組（以0.196 g/kg美沙拉嗪藥液灌腸）、復方芩柏湯組（以1.092 g/kg復方芩柏顆粒劑藥液灌腸），每組20只，每天保留灌腸2次，連續3周。另取20只正常飼養小鼠作為空白組。在治療前和治療后第7、14、21天，觀察小鼠體質量、大便性狀、便血情況，并計算疾病活動指數（disease activity index， DAI），且于給藥結束后進行麻醉取血并取結腸組織。采用HE染色觀察各組小鼠結腸組織病理變化情況；ELISA法檢測各組小鼠血清中炎癥因子白細胞介素（interleukin）-22、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）含量變化情況；采用Western blot法檢測各組小鼠結腸組織中的p90核糖體蛋白S6激酶（p90 ribosomal protein S6 kinase， p90RSK）、JNK、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase， p-JNK）、細胞外調節蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinases 1/2， ERK 1/2）、磷酸化細胞外調節蛋白激酶1/2（phospho extracellular regulated protein kinases， p-ERK 1/2）蛋白的表達。結果 在治療的第7、14、21天，美沙拉嗪組、復方芩柏湯組小鼠體質量均明顯高于模型組（P＜0.05，P＜0.01），DAI評分明顯低于模型組（P＜0.05，P＜0.01）。光鏡下，與模型組相比，美沙拉嗪組及復方芩柏湯組小鼠結腸組織病理改變呈不同程度的恢復，炎癥浸潤減輕。給藥結束后，與空白組比較，模型組p90RSK、p-JNK、p-ERK 1/2蛋白以及IL-6、TNF-α蛋白表達明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，美沙拉嗪組和復方芩柏湯組p90RSK、p-JNK、p-ERK 1/2蛋白以及IL-6、TNF-α蛋白表達明顯降低（P＜0.05，P＜0.01），抗炎因子IL-22、IL-10含量明顯升高（P＜0.01）。結論 復方芩柏湯可能通過抑制ERK/JNK信號通路，促進抗炎因子IL-22、IL-10的表達，抑制促炎因子IL-6、TNF-α的表達，減少腸道炎癥反應，促進腸上皮細胞增殖，改善腸黏膜屏障，促進UC小鼠腸道黏膜組織損傷修復。

〔關鍵詞〕 潰瘍性結腸炎；復方芩柏湯；炎癥因子；p90核糖體蛋白S6激酶；c-Jun氨基末端激酶；磷酸化c-Jun氨基末端激酶；細胞外調節蛋白激酶1/2；磷酸化細胞外調節蛋白激酶1/2

〔中圖分類號〕R285.5" " " " "〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.05.007

Effects of compound Qinbai Decoction on regulation of ERK/JNK signaling pathway in treating ulcerative colitis and its mechanism

GAO Yong1， LI Keya2， WANG Zhenquan2*， CHEN Daguang1， LYU Zhaowen1， ZHANG Xiaofang1

1. People's Hospital of Ningxiang City， Changsha， Hunan 410600， China; 2. The Second Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410005， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To study the regulatory effects of compound Qinbai Decoction （QBD） on the extracellular regulated protein kinases （ERK）/c-Jun N-terminal kinase （JNK） signaling pathway， as well as its effects on inflammatory factors in the serum of mice with ulcerative colitis （UC）. Methods Sixty SPF grade healthy male BALB/C mice were used to establish a UC model using 3% dextran sulfate sodium （DSS）. After successful modeling， they were randomized into model group （enema with normal saline）， mesalazine group （enema with 0.196 g/kg mesalazine solution）， and compound QBD group （enema with 1.092 g/kg compound Qinbai Granule）， with 20 mice in each group. The enema was administered twice a day for 3 consecutive weeks. An additional 20 normally fed mice were used as blank group. Before treatment and on the 7th， 14th， and 21st day after treatment， the body mass， stool characteristics， and bloody stool situation of the mice were observed， and the disease activity index （DAI） was calculated. The mice were anesthetized for blood and colon tissue collection after completion of administration. HE staining was used to observe the pathological changes of colon tissues in each group of mice; ELISA method was applied to check changes in the content of inflammatory factors such as interleukin-22， IL-6， IL-10， and tumor necrosis factor-α （TNF-α） in mice serum in each group; Western blot was employed to examine the expressions of p90 Ribosomal protein S6 kinase （p90 RSK）， JNK， phosphorylated c-Jun N-terminal kinase （p-JNK）， extracellular regulated protein kinases 1/2 （ERK 1/2）， and phospho extracellular regulated protein kinases 1/2 （p-ERK 1/2） in the colon tissue of mice in each group. Results On the 7th， 14th， and 21st day of treatment， the body mass of mice in the mesalazine and compound QBD groups were significantly higher than those in the model group （Plt;0.05， Plt;0.01）， and the DAI score was significantly lower than that in model group （Plt;0.05， Plt;0.01）. Under the light microscope， compared with the model group， the pathological changes in the colon tissue of mice in the mesalazine and the compound QBD groups showed varying degrees of recovery， with reduced inflammation infiltration. After administration， compared with the blank group， the model group showed a significant increase in the protein expressions of p90RSK， p-JNK， p-ERK 1/2， as well as IL-6 and TNF-α （Plt;0.01）. Compared with the model group， the mesalazine and the QBD groups showed a significant decrease in the protein expressions of p90RSK， p-JNK， p-ERK 1/2， as well as IL-6 and TNF-α （Plt;0.05， Plt;0.01）， while the content of anti-inflammatory factors IL-22 and IL-10 significantly increased （Plt;0.01）. Conclusion Compound QBD may promote the expressions of anti-inflammatory factors IL-22 and IL-10 and inhibit the expressions of proinflammatory factors IL-6 and TNF-α， reduce intestinal inflammatory response， promote intestinal epithelial cell proliferation， improve intestinal mucosal barrier， and promote the repair of intestinal mucosal tissue damage in UC mice by inhibiting the ERK/JNK signaling pathway.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 ulcerative colitis; compound Qinbai Decoction; inflammatory factor; p90 Ribosomal protein S6 Kinase; c-Jun N-terminal kinase; phosphorylated c-Jun N-terminal kinase; extracellular regulated protein kinases 1/2; phospho extracellular regulated protein kinases 1/2

潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis， UC）是一種慢性非特異性腸道炎癥性疾病，可累及結直腸黏膜及黏膜下層，亦可遍及整段結腸，臨床主要表現為持續性或反復發作的腹痛腹瀉、黏液膿血便等，其發病原因不明，可能與感染、免疫、遺傳、環境及精神心理等因素有關[1-2]。臨床治療UC主要以5-氨基水楊酸、糖皮質激素、免疫抑制劑、生物制劑、小分子制劑、糞菌移植等藥物為主，具有抗炎、保護腸道黏膜屏障、調節腸道菌群、改善腸道微環境等作用[3-4]。

中醫學將UC歸屬于“痢疾”“腸澼”“滯下”等范疇，病機與濕熱瘀滯、氣血失和密切相關。中藥通過調節免疫炎癥反應、減輕氧化應激、改善腸黏膜屏障等，在控制UC進展和緩解臨床癥狀方面逐漸顯示出獨特優勢[5]。復方芩柏湯具有清熱利濕、行氣止痛、活血化瘀的功效，經過長期臨床觀察和大量實驗研究，復方芩柏湯的療效得到進一步肯定[6-10]。本研究旨在探究復方芩柏湯對細胞外信號調節激酶（extracellular regulated protein kinases， ERK）/c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase， JNK）信號通路的調控作用，以及對UC小鼠血清中炎癥因子白細胞介素（interleukin， IL）-22、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）的影響，為復方芩柏湯治療UC的有效性和科學性提供更深層次的理論依據。

1 材料與方法

1.1" 動物

健康雄性BALB/C小鼠80只，體質量（25.03±0.57） g，均購自湖北貝恩特生物科技有限公司，許可證號：SCXK（鄂）2021-0027。飼養條件：12 h/12 h明暗交替，室溫23～25 ℃，濕度40%～60%，噪聲≤60 dB，適應性喂養1周后開始造模。本實驗符合動物實驗倫理要求，倫理審查批準編號為：IACUC（準）-BNT-2023-003。

1.2" 藥物

復方芩柏湯由湖南中醫藥大學第二附屬醫院自制復方芩柏顆粒劑12 g于200 mL無菌水溶解稀釋而成。復方芩柏顆粒劑（批號：湘藥制備字Z2021044

4000），藥物組成：黃芩12 g，黃柏12 g，秦艽10 g，當歸10 g，桃仁10 g，防風10 g，蒼術10 g，檳榔10 g，澤瀉10 g，制大黃10 g，延胡索10 g。成人灌腸用藥劑量為12 g/d，按成人體質量70 kg、實驗小鼠體質量為18～40 g，參照常用實驗小鼠與人的體表面積比值表計算，每只小鼠每天給藥劑量為2.184 g（即小鼠給藥量為1.092 g/kg），故每只小鼠灌腸藥量為0.13 mL/d。美沙拉嗪緩釋顆粒劑（規格500 mg/袋，批號：國藥準字H20143164，上海愛的發制藥集團）成人用藥量為2 g/d，溶于40 mL蒸餾水中制成溶液（50 mg/mL），同樣參照常用實驗動物與人的體表面積比值表計算，每只小鼠每天給藥劑量為0.391 g（即小鼠給藥量為0.196 g/kg），故每只小鼠灌腸藥量為7.8 mL/d。均放入4 ℃冰箱保存備用。

1.3" 主要試劑

葡聚糖硫酸（dextran sulfate sodium， DSS）（中國上海翊圣生物科技有限公司，批號：60316ES60）；三溴乙醇（tribromoethanol， TBE）（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號：T161626）；苯甲基磺酰氟（phenylmethylsulfonyl fluoride， PMSF）（上海碧云天生物技術有限公司，批號：ST506）；鏈霉親和素標記山羊抗小鼠IgG、鏈霉親和素標記山羊抗兔IgG、p90核糖體蛋白S6激酶（p90 ribosomal protein S6 kinase， p90RSK）抗體、JNK抗體、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase， p-JNK）抗體、GAPDH抗體（武漢三鷹生物技術有限公司，批號：SA00001-1、SA00001-2、80108-1-RR、66210-1-IG、80024-1-RR、60004-1-Ig）；ERK抗體、磷酸化細胞外調節蛋白激酶（phospho extracellular regulated protein kinases， p-ERK）抗體（美國Cell Signaling Technology，批號：4695T、4370T）；BCA蛋白濃度測定試劑盒、RIPA裂解液（上海碧云天生物技術有限公司，批號：P0010、P0013B）；特超敏ECL化學發光液（賽默飛世爾科技公司，批號：NCI5079）；HE染色液（中國醫藥集團有限公司，批號：71014544）；蘇木精染液（美國Sigma-Aldrich公司，批號：H9627）；四甲基二乙胺（tetramethylethylenediamine， TEMED）（美國Amresco公司，批號：Amresc00761）；蛋白marker（14-120 kDa）（北京全氏金生物技術有限公司，批號：DM111）；蛋白marker（10-250 kDa）（加拿大Fermentas公司，批號：26619-1）；小鼠IL-22 ELISA試劑盒、小鼠IL-6 ELISA試劑盒、小鼠IL-10 ELISA試劑盒、小鼠TNF-α ELISA試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號：E-EL-M2446、E-EL-M0044、E-EL-M0046、E-EL-M3063）。

1.4" 主要儀器

Mini-Proten Tetra System電泳系統（型號：PP1152，北京六一儀器廠）；石蠟切片機（型號：RM 2016，德國Leica公司）；多功能酶標儀（型號：mμlISKANMK3，賽默飛世爾科技公司）；高速冷凍離心機（型號：Neofuge 15R，Heal Force公司）；凝膠成像系統（型號：ChemiDocTMXRS+，美國Bio-Rad Laboratories公司）。

1.5" 造模方法

采用3% DSS建立UC小鼠模型[11-13]。小鼠適應性喂養1周后，禁食禁水24 h，用無菌水配制濃度為3%的DSS溶液，放入飲水瓶中自由飲用，持續7 d，建立DSS結腸炎小鼠模型。按照Cooper評分系統[14]根據小鼠體質量、大便性狀、便血情況評定小鼠結腸組織疾病活動指數（disease activity index， DAI），以DAI升高及小鼠結腸病理性改變視為造模成功。

1.6" 分組與干預方法

DSS結腸炎造模24 h后進行藥物干預。實驗分為空白組（n=20）和造模組（n=60），造模組再隨機分為3組：模型組、美沙拉嗪組、復方芩柏湯組。模型組予生理鹽水灌腸；美沙拉嗪組予以美沙拉嗪藥液0.196 g/kg灌腸；復方芩柏湯組予以復方芩柏顆粒劑藥液1.092 g/kg灌腸。每天2次，持續干預3周。

1.7" 動物取材

給藥結束后第2天取材，按400 mg/kg TBE腹腔注射麻醉小鼠后，眼球采血，2 000 r/min（離心半徑8.5 cm）離心5 min 后，取上層血清，置于-80 ℃保存備用。暴露腹腔，取距肛門1 cm與盲腸袋間的結腸段，觀察結腸形態并拍照統計長度，置于預冷的1×PBS中快速清洗1～2遍，分成兩份：一份放于4%多聚甲醛中，完全浸泡結腸組織，固定包埋，切片，用于觀察結腸組織病理學變化；另一部分迅速投入液氮中，后轉入-80 ℃冰箱保存。

1.8" 結腸組織病理學評分標準

于治療前和治療后7、14、21天觀察小鼠體質量變化，進食、活動及糞便情況，按照Cooper評分系統[14]根據小鼠體質量、大便性狀、便血情況（每個項目根據癥狀嚴重程度依次計0～4分，得分越高，癥狀越嚴重）評定小鼠結腸組織DAI，DAI=（體質量指數分數+大便性狀分數+便血情況分數）/3。詳見表1。

1.9" HE染色觀察結腸組織形態

將取出的新鮮結腸組織置于4%多聚甲醛中，完全浸泡結腸組織，固定包埋，切片，HE染色，鏡下觀察拍照。

1.10" ELISA法測定各組小鼠血清中IL-22、IL-6、IL-10、TNF-α含量

實驗開始前，收集的血清樣本及各試劑均置于室溫平衡；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔，空白孔加樣品稀釋液100 μL，余孔分別加標準品或待測樣品100 μL。給酶標板覆膜，37 ℃孵育90 min。棄去液體，每孔加生物素化抗體工作液 100 μL（臨用前20 min內配制，避光放置），加上覆膜，37 ℃溫育60 min。棄去液體，洗板3次，每次浸泡30 s，大約350 μL/孔，甩干并在吸水紙上輕拍，將孔內液體拍干。每孔加酶結合物工作液100 μL（臨用前20 min內配制，避光放置），加上覆膜，37 ℃溫育30 min。棄去孔內液體，甩干，洗板5次。每孔加TMB 90 μL，酶標板加上覆膜，37 ℃避光孵育15 min。每孔加終止液50 μL終止反應，此時藍色立轉黃色。立即用酶標儀在450 nm 波長處測量各孔的光密度（optical density， OD）值。

1.11" Western blot法檢測結腸組織中p90RSK、JNK、p-JNK、ERK 1/2、p-ERK 1/2蛋白表達水平

取100 mg結腸組織，加入含有磁珠的研磨管中，在研磨管中加入含有蛋白酶抑制劑與磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液，使其與組織充分混合，放置于勻漿儀上進行勻漿，此過程在冰上操作。裂解完成后4 ℃，12 000 r/min（離心半徑8.5 cm）離心5 min，取上清液，BCA法蛋白定量。取25 ？滋g總蛋白進行電泳分離，5%濃縮膠80 V，10%分離膠120 V，然后濕轉90 min，電流200 mA，5%脫脂牛奶/TBST室溫搖床封閉1 h，孵育一抗p90RSK（1∶1 000）、JNK（1∶1 000）、p-JNK（1∶1 000）、ERK（1∶2 000）、p-ERK（1∶1 000），4 ℃冰箱過夜。次日室溫復溫20～30 min，TBST洗10 min×3次，孵育辣根過氧化物酶標記的二抗（1∶5 000），室溫搖床孵育1 h，TBST洗10 min×3次，加入ECL化學發光試劑顯色，凝膠成像系統發光成像。用Image J軟件分析各條帶灰度值，進行相對定量分析，統計各組與內參GAPDH灰度值的比值。

1.12" 統計學方法

采用SPSS 23.0統計軟件進行分析。實驗數據以“ｘ±s”表示，組間數據比較采用方差分析，用LSD法（方差齊）或Dunnett's T3（方差不齊）作組間多重比較。均以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1" 各組小鼠一般情況觀察及體質量比較

空白組毛色柔潤光澤，無稀便膿血便、情況。造模第7天，造模各組小鼠體質量下降，糞便變稀，其后肢位于身下，瞇著眼睛，毛發凌亂并豎立。造模期間3只小鼠死亡（模型組1只，美沙拉嗪組1只，復方芩柏湯組1只）。治療后，美沙拉嗪組、復方芩柏湯組大便次數逐漸減少，黏液膿血便減少或消失，進食及飲水量增加，毛發逐漸恢復光澤。

與空白組比較，模型組小鼠的體質量明顯降低（Plt;0.01）。治療第7、14、21天，與模型組比較，美沙拉嗪組及復方芩柏湯組的體質量明顯增加（Plt;0.05，Plt;0.01），接近空白組。詳見表2。

2.2" 各組小鼠DAI評分比較

空白組小鼠DAI評分為0分，造模后，模型組的DAI評分明顯增加。治療第7、14、21天，與模型組比較，美沙拉嗪組和復方芩柏湯組DAI評分均明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）；美沙拉嗪組與復方芩柏湯組DAI評分比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表3。

2.3" 各組小鼠結腸組織形態學觀察

光鏡下觀察發現，空白組小鼠結腸黏膜連續、結構完整、無明顯缺損；黏膜腺體結構完整、排列整齊，未見組織壞死、出血及炎性細胞浸潤；黏膜下層及肌層無明顯炎性細胞浸潤及增生。模型組小鼠結腸組織出現明顯損傷，黏膜不連續，可見潰瘍面及壞死灶，深達肌層；腺體結構被破環，腺體排列紊亂，可見炎性細胞浸潤和組織增生。美沙拉嗪組及復方芩柏湯組小鼠結腸組織病理改變呈不同程度恢復，腺體結構、形態開始恢復，排列較整齊；炎性細胞浸潤及組織增生亦明顯減輕，腸壁基本恢復。詳見圖1。

2.4" 各組小鼠血清中IL-22、IL-6、IL-10、TNF-α含量比較

與空白組比較，模型組促炎因子IL-6、TNF-α含量明顯升高（P＜0.01），抗炎因子IL-22、IL-10含量差異無統計學意義（P＞0.05）；與模型組比較，美沙拉嗪組和復方芩柏湯組IL-22、IL-10含量明顯升高（P＜0.01），IL-6、TNF-α含量明顯下降（P＜0.01）；美沙拉嗪組和復方芩柏湯組組間IL-22、IL-10、IL-6、TNF-α含量比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表4。

2.5" 各組小鼠結腸組織中p90RSK、p-JNK、p-ERK 1/2蛋白相對表達比較

與空白組比較，模型組p90RSK、p-JNK以及p-ERK 1/2蛋白相對表達均明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，美沙拉嗪組和復方芩柏湯組p90RSK、p-JNK以及p-ERK 1/2相對表達均明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）；美沙拉嗪組和復方芩柏湯組p90RSK、p-JNK及p-ERK 1/2相對表達差異無統計學意義（Pgt;0.05）。詳見表5。

3 討論

UC歸屬于中醫學“腸澼”“赤沃”“痢疾”“泄瀉”等范疇，從直腸往上成倒灌性發病，可遍及全結腸，呈彌漫性分布[15]。中醫從辨證論治、整體觀念出發，在保護靶器官、控制炎癥反應、改善臨床癥狀、減少復發方面具有一定的優勢[16]。復方芩柏湯是基于劉完素在《素問·病機氣宜保命集》中提出的“行血則便膿自愈，調氣則后重自除”的理論，結合“濕熱”“氣滯”“血瘀”貫穿于UC急性活動期全過程的發病特點，采取以清熱利濕為主、行氣活血為輔的治療方法[10]。方中，君藥黃芩、黃柏性寒味苦，入大腸經，功擅清熱燥濕、瀉火解毒；臣藥防風、秦艽勝濕止痛，澤瀉利水滲濕；佐以延胡索、檳榔、當歸、桃仁、大黃，共奏清熱燥濕、行氣活血、止血鎮痛之功[17-18]。課題組前期研究證實，復方芩柏湯可能通過激活PI3K/AKT-mTOR信號通路[6]、抑制TLR2/IkB-α/IL-1β信號通路[19]、弱化p38MAPK信號通路[8]、調節炎癥因子IL-17、TNF-α、超敏C反應蛋白、IL-6等[7，20]，改善腸黏膜屏障，促進潰瘍修復。UC發病與諸多炎癥因子相關[21]，結腸組織損傷后，腸黏膜內的炎癥反應導致機體大量釋放炎癥因子，使血清中促炎因子IL-6、TNF-α表達增加，炎癥反應過程加劇，進一步影響參與免疫抑制的細胞因子IL-10、IL-22等的合成與分泌，使腸黏膜上皮層完整性喪失和通透性增加，加劇炎癥過程。而組織修復過程中，上皮細胞的再生與腸黏膜屏障的維持及器官功能至關重要。IL-22是IL-20細胞因子家族中的重要成員，由T細胞和先天淋巴樣細胞產生，可誘導上皮細胞產生抗菌肽和黏液，而免疫細胞可以維持腸道黏膜上皮屏障的結構完整性，加強其基本防御系統功能[22]。IL-22已被證明是上皮細胞穩態和修復的關鍵調節因子，對UC具有抗炎作用[23-24]。腸道損傷后，IL-22通過產生先天淋巴樣細胞，增加了小鼠小腸類器官的生長。重組IL-22直接靶向結腸干細胞（intestinal stem cell，ISC），促進小鼠和人腸道類器官的生長與增殖，從而促進ISC的擴增。LINDEMANS等[25]研究發現，IL-22通過直接作用于ISCs，增強了ISC介導的上皮再生，促進了細胞周期進程、上皮增殖和ISC池的再生。另外，IL-22在高度增殖的細胞（如腸上皮細胞）中誘導細胞增殖，與ERK 1/2介導的p90RSK、c-Jun和Stomatin的轉錄及激活腸上皮細胞中的JAK-STAT信號通路、蛋白激酶B（protein kinase B， PKB）通路、MAPK途徑有關[26]。NIESS等[22]研究發現，IL-22亦可促進ERK 1/2參與細胞增殖和遷移的非依賴性基因的表達，表明p90RSK和c-Jun是IL-22調節ERK 1/2信號通路的下游調節因子。IL-10由效應T細胞和Treg細胞產生，在參與炎癥反應過程中通過抑制巨噬細胞的特異性免疫功能，減少黏附分子的表達，達到抑制過度炎癥反應、促進組織修復的目的，對于維持組織免疫穩態具有重要作用[27]。IL-6由淋巴細胞、巨噬細胞等多種細胞分泌，與多效性促炎因子TNF-α一樣，具有促進炎癥反應的發生及加速機體炎癥反應的作用，與UC發病及疾病活動度成正相關。IL-6還可對B細胞、T細胞和其他免疫細胞的增殖產生細胞作用，并引起免疫損傷[21，28]。

本研究發現，復方芩柏湯可能通過抑制ERK/JNK信號通路發揮治療UC的作用。在治療第7、14、21天，美沙拉嗪組及復方芩柏湯組DAI評分較模型組明顯降低，結腸組織病理改變呈不同程度恢復，腺體結構、形態開始恢復，排列較整齊；炎性細胞浸潤及組織增生亦明顯減輕，腸壁基本恢復，說明復方芩柏湯對DSS誘導的UC小鼠有保護作用。同時，通過檢測血清中的炎癥因子，UC模型組IL-6、TNF-α含量比空白組明顯升高，經復方芩柏湯治療后IL-6、TNF-α含量降低，IL-22、IL-10水平升高，從而調節UC小鼠炎癥因子的分泌，減輕機體炎癥反應，達到緩解UC的目的。其作用機制可能通過使p90RSK、p-JNK、p-ERK 1/2表達下降抑制ERK/JNK通路，促進抗炎因子IL-22、IL-10的表達，抑制促炎因子IL-6、TNF-α的分泌，改善急性期UC小鼠臨床癥狀并緩解腸道病理改變，其機制可能與改善黏膜屏障、促進上皮細胞再生有關。

綜上所述，復方芩柏湯對于DSS誘導的UC小鼠有治療作用，其具體機制可能與促進抗炎因子IL-22、IL-10的表達從而促進黏膜修復，抑制促炎因子IL-6、TNF-α的分泌從而防止黏膜損傷有關。但基于IL-22、IL-10對于胃腸道黏膜修復功能可能與多因素相關[25，29]，此研究局限于從ERK/JNK信號通路進行探索，今后還需從多方面探索復方芩柏湯在UC治療上的可能作用機制，以加強對其治療機制的研究，為中醫藥治療UC提供新的理論依據。

參考文獻

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（本文編輯" 匡靜之）

〔收稿日期〕2023-06-25

〔基金項目〕湖南省自然科學基金項目（S2012J5043）；湖南省中醫藥管理局項目（2021020）；湖南省中醫藥管理局一般項目（201786）；長沙市自然科學基金項目（kq2202482）；湖南中醫藥大學校級科研基金項目（2019XJJJ129）。

〔通信作者〕*王真權，男，博士，主任醫師，博士研究生導師，E-mail：wangzhenquan123456@163.com。